人CTGF和TIMP1基因重组腺相关病毒双表达质粒的构建及其活性检测

 目的 构建人结缔组织生长因子（connective tissue growth factor, CTGF）和基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1, TIMP1)基因腺相关病毒（adeno-associated virus, AAV）表达质粒，并观察其在HEK293细胞中的表达，检测目的蛋白的生物学活性。方法 采用PCR技术，分别设计引物扩增所需序列并进行PCR鉴定。再采用分子克隆的方法，以内部核糖体进入位点(internal ribosome entry sites, IRES)序列连接CTGF和TIMP1并克隆到AAV表达质粒pSNAV2.0构建重组质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TIMP1。把重组质粒转染HEK293细胞，用双重免疫荧光和Western blot的方法对重组质粒的表达进行研究，MTT法检测细胞培养上清液中CTGF蛋白的生物学活性，ELISA法检测细胞培养上清液中TIMP1蛋白的含量。结果 PCR、酶切、DNA测序等方法均证实成功构建了含有完全正确的CTGF和TIMP1基因序列的AAV表达质粒。双重免疫荧光和Western blot检测到目的蛋白的表达，转染后的细胞上清具有促使成纤维细胞增殖的生物学活性，ELISA法结果证实重组载体能够高表达TIMP1蛋白。结论 成功构建了双表达质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TIMP1，转染 HEK293细胞后能够表达具有生物学活性的目的蛋白，为基因治疗椎间盘退变的研究工作奠定了基础。     

负压封闭引流技术治疗四肢皮肤软组织缺损并感染的疗效观察

目的:观察负压封闭引流技术在四肢皮肤软组织缺损并感染治疗中的疗效.方法:将45例病人分为两组,常规换药组26例;清创术后创面覆盖VSD系统19例.比较两组的创面缩小程度、换药次数、植皮愈合时间及总住院时间等指标,评估疗效,并采用SPSS软件进行统计分析.结果:VSD能彻底清除创面的分泌物和坏死组织,刺激肉芽生长,较常规换药组明为缩短皮肤软组织缺损愈合时间,,效果显著.结论:VSD技术是治疗四肢外伤性皮肤软组织缺损伴创面感染的有效方法,它可以减轻病人痛苦,缩短创面愈合时间.     

经伤椎椎弓根植骨联合伤椎置钉治疗胸腰椎爆裂骨折

目的探讨经伤椎椎弓根植骨联合伤椎置钉治疗胸腰椎爆裂骨折的临床疗效。方法回顾性分析本院2008年3月～2010年1月经伤椎椎弓根植骨联合伤椎置钉治疗胸腰椎爆裂骨折病例资料59例,其中,男38例,女2l例;年龄19～65岁,平均37岁。收集的病例均为单节段椎体爆裂性骨折,所有病例采用后路经伤椎椎弓根植骨。经伤椎及上下椎椎弓根固定。比较术前术后椎体前缘高度、脊柱后凸角（矢状面Cobb角）、椎管内占位、神经功能ASIA分级等指标。结果术后随访12～24个月,平均随访17个月,术后均获得较好恢复,高度及外形基本恢复正常．无内固定物松动、断裂等并发症,手术前后椎体前缘高度、脊柱后凸角、椎管内占位比较差异均有统计学意义（p〈0．05）,神经功能ASIA分级亦有改善。结论经伤椎椎弓根植骨联合伤椎置钉治疗胸腰椎爆裂骨折可有效建立椎体前中柱稳定性,增强内固定系统的牢固性,是治疗胸腰椎爆裂骨折的一种有效方法。     

腺相关病毒载体介导结缔组织生长因子对体外转染恒河猴和人腰椎间盘细胞蛋白多糖和Ⅱ型胶原影响的比较

目的比较腺相关病毒载体介导结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）对体外培养的恒河猴和人腰椎间盘细胞转染后蛋白多糖含量和Ⅱ型胶原的影响。方法将恒河猴及成人腰椎间盘髓核细胞进行体外培养,应用rAAV2-CTGF体外转染细胞,分别通过^35S标记蛋白多糖的方法和Ⅱ型胶原的SP-ABC免疫组化法检测腺相关病毒载体介导生长因子对椎间盘细胞蛋白多糖合成和Ⅱ型胶原的影响。结果恒河猴椎间盘细胞能进行体外培养并传代,其形态学特性与培养的成人椎间盘细胞相似,rAAV2-CTGF与对照组相比可促进恒河猴和人椎间盘髓核细胞的蛋白多糖生物合成（P〈0．01）,恒河猴和成人相比生长因子对于蛋白多糖的促进作用无明显差异（P〉0．05）。结论成功培养恒河猴及成人椎间盘细胞,腺相关病毒载体介导CTGF能显著促进髓核细胞蛋白多糖的合成,生长因子对恒河猴和人椎间盘细胞蛋白多糖含量的影响具有很大的相似性。     

氧化应激对大鼠髓核细胞凋亡的影响

背景:细胞凋亡在椎间盘退变过程中发挥重要作用,而导致细胞凋亡的因素很多,氧化应激是导致细胞凋亡的一个重要因素.目的:从细胞内信号转导水平验证过氧化氢对大鼠髓饮细胞氧化应激损伤的影响.设计、时间及地点:单一样本观察.试验于2008 03/10在山东省创伤骨科研究所完成.材料:p38MAPK特异性阻断刺(SB203580)、JNK特异性阻断剂(SP600125)购自碧云天生物技术有限公司:大鼠椎间盘来自2只新生24 h SD大鼠.方法:原代培养大鼠髓核细胞,将生长良好的髓核细胞制成细胞悬液,随即分为4组:H202组:用0,50.100,200,400,800μmol/L H2O2刺激:对照组:不加刺激的细胞:SB203580+H2O2组:给予特异性p38MAPK阻断剂SB203580预孵育细胞,再给予H2O2刺激:SP600125+H2O2组:给予特异性JNK阻断剂SP600125预孵育细胞,再给予H2O2刺激.上述处理后检测相关指标.主要观察指标:以免疫组织化学检测P-p38和P-JNK的表达情况及表达位置:Western印迹法检测SAPKJJNK、p38MAPK及其磷酸化组分的表达.结果:H2O2能够激活髓核细胞内p38和JNK的活性:SB203580能够有效地抑制p38MAPK的活性,而SP600125则能够有效的抑制JNK的活性;免疫荧光显示P-p38MAPK和P-JNK在细胞质和细胞核均有表达中,而对照组未发现.结论:大鼠髓核细胞受氧化应激后可通过p38MAPK和JNK通路导致细胞凋亡.     

成年女性颈椎嗜酸性肉芽肿1例报告

患者女,43岁。因颈痛伴活动受限1个月,于2008年11月16日人院。患者于入院前1个月无明显诱因出现颈部疼痛不适,呈持续性,向肩部放射,服非甾体类镇痛药效果不佳,颈部活动受限。无发热、无肢体感觉及运动障碍。查体：颈椎曲度正常,颈后部轻压痛,颈椎前屈后伸活动度减小,四肢感觉、运动正常,肌张力正常,双侧Hoffmann征阴性。ESR24mm／h,超敏C反应蛋白正常,血清AFP及CEA均阴性。     

基质金属蛋白酶及其抑制因子与腰椎间盘退变关系的研究进展

腰椎间盘突出是临床上引起腰痛的主要原因之一。椎间盘突出的发生基础是椎间盘退变，而退变常伴随着椎间盘基质成分合成和降解的失衡，在影响基质降解的诸多因素中，基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）和金属蛋白酶组织抑制因子（tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs）失衡是导致基质过度降解的根本原因。MMPs和TIMPs在椎间盘退变中的作用已成为近年来研究的重点之一，现就其近年研究进展作一综述。     

微创经椎间孔椎体间融合治疗退行性腰椎滑脱

[目的]探讨微创经椎间孔椎间融合治疗退行性腰椎滑脱(degenerative spondylolisthesis,DS)的临床疗效.[方法]回顾性分析2016年4月—2018年12月本院收治的101例单节段DS患者的临床资料,根据医患沟通结果,53例采用微创经椎间孔椎间融合术(微创组),48例行开放TLIF手术(开放组...     

氧化应激对大鼠髓核细胞凋亡的影响*

细胞凋亡在椎间盘退变过程中发挥重要作用,而导致细胞凋亡的因素很多,氧化应激是导致细胞凋亡的一个重要因素。 目的：从细胞内信号转导水平验证过氧化氢对大鼠髓核细胞氧化应激损伤的影响。 设计、时间及地点：单一样本观察,试验于2008-03/10在山东省创伤骨科研究所完成。 材料：p38MAPK特异性阻断剂(SB203580)、JNK特异性阻断剂(SP600125)购自碧云天生物技术有限公司;大鼠椎间盘来自2只新生24 h SD大鼠。 方法：原代培养大鼠髓核细胞,将生长良好的髓核细胞制成细胞悬液,随即分为4组：H202组：用0,50,100,200,400,800 μmol/L H2O2刺激;对照组：不加刺激的细胞;SB203580+H2O2组：给予特异性p38MAPK阻断剂SB203580预孵育细胞,再给予H2O2刺激;SP600125+H2O2组：给予特异性JNK阻断剂SP600125预孵育细胞,再给予H2O2刺激。上述处理后检测相关指标。 主要观察指标：以免疫组织化学检测P-p38和P-JNK的表达情况及表达位置;Western印迹法检测SAPK/JNK、p38MAPK及其磷酸化组分的表达。 结果：H2O2能够激活髓核细胞内p38和JNK的活性;SB203580能够有效地抑制p38MAPK的活性,而SP600125则能够有效的抑制JNK的活性;免疫荧光显示P-p38MAPK和P-JNK在细胞质和细胞核均有表达中,而对照组未发现。 结论：大鼠髓核细胞受氧化应激后可通过p38MAPK和JNK通路导致细胞凋亡。     

颈椎前路减压MC+椎间融合器治疗脊髓型颈椎病的临床疗效分析

正脊髓型颈椎病(CSM)是颈椎退行性改变导致脊髓受压和(或)脊髓血供障碍引起的脊髓功能障碍性疾病。颈椎前路椎间盘切除减压融合(ACDF)是治疗颈椎病最主要的手术方法。自2008年5月至2011年9月,采用颈椎前路减压MC+椎间融合器(法国LDR公司生产)治疗单节段脊髓型颈椎病