孟鲁司特钠治疗儿童哮喘的临床症状和肺功能评估

目的观察孟鲁司特钠对哮喘儿童的临床症状以及肺功能改变的影响。方法收集2010年1月~2013年12月我院哮喘专科门诊支气管哮喘急性发作的患儿共450例,随机分为治疗组(加用孟鲁司特钠)和对照组,观察患儿治疗前、治疗后、治疗3个月及停药3个月(即6个月)时的日间和夜间临床症状及测定患儿的肺功能(用力肺活量、最大吸气后用力快速呼气1秒用力呼气量、呼气峰流速)。结果治疗前两组患儿日间哮喘症状评分、夜间哮喘症状评分、肺功能(用力肺活量、最大吸气后用力快速呼气1秒用力呼气量、呼气峰流速)无显著差别(P0.05),治疗后、3个月、6个月时治疗组患儿的日间哮喘症状评分、夜间哮喘症状评分降低,肺功能(用力肺活量、最大吸气后用力快速呼气1秒用力呼气量、呼气峰流速)较对照组改善,两组比较均有统计学差异(P0.05),且治疗组3个月后患儿哮喘的临床控制率、显效比例,较对照组增加,差异有统计学差异(P0.05),治疗有效率对照组为(76.92%),治疗组为(91.32%),两组间差异有统计学意义(P0.05)。结论孟鲁司特钠不仅能控制哮喘临床症状,还能改善肺功能。     

CTRP9抑制幼年哮喘小鼠气道平滑肌细胞增殖和炎性反应的研究

目的 研究C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)对哮喘幼鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)增殖和气道炎症的作用。方法 ELISA检测正常、哮喘儿童和小鼠血清中CTRP9含量;原代培养哮喘小鼠ASMCs,经pcDNA3.1-CTRP9转染后,MTT检测ASMCs增殖,ELISA测定TNF-α和IL-6含量,Western 印记检测TLR4和NF-κB p65蛋白表达以及NF-κB p65磷酸化水平;pcDNA3.1-CTRP9转染哮喘小鼠,HE染色观察肺组织炎性细胞的浸润程度;收集小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF),光镜下检测嗜酸性粒细胞、巨噬细胞和中性粒细胞数目;检测小鼠肺部TNF-α、IL-6、TLR4和NF-κB的表达。结果 哮喘儿童和小鼠血清中CTRP9含量低于正常组;CTRP9能抑制ASMCs增殖、炎症因子分泌和TLR4/NF-κB通路活化;CTRP9也能抑制哮喘小鼠肺部炎性细胞浸润、各炎性反应细胞数目、炎症因子分泌和TLR4/NF-κB通路活化。结论 CTRP9能抑制幼年哮喘小鼠ASMCs增殖和炎性反应。     

~(99m)锝扫描小儿消化系统出血468例应用分析

目的:探讨99m锝扫描对小儿消化系统出血,尤其是先天畸形的诊断意义。方法:对486例消化系统出血患儿行99m锝扫描检查,并对其检查结果与手术后病理检查结果作对照分析。结果:486例病人99m锝扫描阳性423例,阴性63例,经手术证实Meckel憩室382例,重复畸形38例,阳性率86.4%。63例扫描阴性的病人有5例再次出血,重复行99mTco4扫描,3例阳性,手术证实2例为Meckel憩室,1例为肠重复畸形。结论:99m锝扫描检查在对小儿消化道出血,尤其是先天畸形,具有简单,无创伤,可重复检查的优点,且阳性率较高。     

MicroRNA-34a 对小鼠气道平滑肌细胞增殖和ORMDL3 表达的影响

目的 探讨支气管哮喘小鼠模型中microRNA-34a（miR-34a）对气道平滑肌细胞（ASMC）增 殖与血清类黏蛋白1 样蛋白3（ORMDL3）表达的影响。方法 以卵清蛋白（OVA）诱导复制的小鼠哮喘 模型和培养的ASMC 为研究对象,筛选与ORMDL3 密切相关的miRNA ;利用miR-34a-mimic 使miR- 34a 过表达;用苏木精- 伊红染色和MTT 法探究其对ASMC 增殖的影响;实时荧光定量聚合酶链反应和 Western blot 检测ORMDL3 的表达变化。结果 OVA 诱导下小鼠气道组织中miR-34a 被抑制（P <0.05）。 miR-34a-mimic 可减少哮喘小鼠ASMC 异常增殖（P <0.05）;miR-34a-mimic 抑制ASMC 在490nm 下的光 密度值和相对细胞活性（P <0.05）;miR-34a-mimic 下调哮喘小鼠气道组织中ORMDL3 的表达,并抑制体 外培养ASMC 中ORMDL3 的表达（P <0.05）。结论 miR-34a 可抑制ASMC 的增殖和ORMDL 3 基因表达, 为今后哮喘发病机制的研究提供新的思路。     

高迁移率族蛋白B1激活JAK2/STAT3并促进支气管上皮细胞分泌哮喘相关炎症因子

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)参与调节支气管上皮细胞分泌哮喘相关炎症因子的机制。方法 20只雌性BALB/c小鼠随机分对照组和哮喘组,采用卵清蛋白腹腔注射致敏联合雾化吸入激发建立哮喘小鼠模型。支气管上皮细胞16-HBE分组处理:空白对照组,HMGB1组(浓度分别为100、200、500 ng/mL),500 ng/mL HMGB1+AG490组,500 ng/mL HMGB1+雷帕霉素组。HE染色观察小鼠气道结构;qRT-PCR和免疫组化法检测两组小鼠肺部组织HMGB1的表达;ELISA法测定两组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)上清中HMGB1的含量和各组细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1α(IL-1α)水平。Western blot检测各组细胞中p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平。结果 哮喘组小鼠HMBG1的表达比正常小鼠明显升高。HMGB1升高细胞中TNF-α、IL-6和IL-1α水平,上调p-JAK2和p-STAT3水平,并且呈现浓度依赖性关系。AG490和雷帕霉素处理抑制细胞中p-JAK2和p-STAT3表达,同时降低TNF-α、IL-6和IL-1α水平。结论 HMGB1参与调控哮喘慢性炎症反应,可能与活化JAK2/STAT3信号通路促进支气管上皮细胞分泌炎症因子有关。     

茶多酚对脂多糖诱导的支气管上皮细胞损伤的保护作用及其机制

目的 探讨茶多酚在脂多糖诱导的人支气管上皮细胞损伤中的保护作用及其机制。方法 培养人支气管上皮细胞16HBE,给予不同浓度的脂多糖(1,25,50,100 μg/ml)和茶多酚(100,200,400,800 g/ml)作用。MTT检测细胞的生长,流式细胞术检测细胞凋亡,western blot检测细胞核内和总NFκB的蛋白表达,ELISA检测IL-6,IL-13和TNF-α的含量,试剂盒检测MDA,SOD和LDH的水平。结果 与对照组相比,LPS组的细胞生长显著降低;细胞凋亡显著升高;IL-6,IL-13和TNF-α的含量升高;核内和NFκB总蛋白上升;MDA和LDH含量增加,SOD的活性降低,而茶多酚处理抑制以上LPS诱导的16HBE损伤。结论 茶多酚可以通过抑制氧化应激缓解脂多糖诱导的人支气管上皮细胞损伤。     

TRPV1及TGF-β2的ELISA及免疫组化方法检测对上气道咳嗽综合征的诊断价值

目的:探讨瞬时受体电位香草酸受体1(transient receptor potential vanniloid 1,TRPV1)及转化生长因子β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)的免疫酶联吸附试验(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)及免疫组化方法检测对儿科上气道咳嗽综合征(upper airway cough syndrome,UACS)的诊断价值。方法:94例UACS患儿作为试验组,另选择同一时期的92例腺体样肥大,但无UACS的患儿作为对照组。采集两组患儿血清进行TRPV1及TGF-β2的ELISA测定,采集患儿腺样体组织进行TRPV1及TGF-β2的免疫组化检测,对检测结果进行对照分析。结果:UACS组患儿ELISA检测的TRPV1和TGF-β2值均显著高于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.001);UACS组患儿免疫组化检测的TRPV1、TGF-β2阳性率均显著高于对照组,差异具有统计学意义(P=0.018,0.001);TRPV1和TGF-β2的免疫组化检测方法的敏感度均显著干预ELASA,差异具有统计学意义(均P<0.001),TRPV1和TGF-β2的ELASA检测的特异度均显著高于免疫组化检测,差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:TRPV1及TGF-β2的升高与UACS的发病可能有关,TRPV1和TGF-β2的免疫组化检测对UACS诊断的敏感性较高,而TRPV1和TGF-β2的ELASA检测对UACS诊断的特异性较高,联合应用ELISA及免疫组化检测UACS可疑病例,有助于提高UACS患者诊断的准确性,降低漏诊、误诊率。     

过表达KyoT2对哮喘小鼠气道平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的 研究KyoT2对哮喘小鼠气道平滑肌细胞 （ASMC）增殖和迁移的影响。方法 卵白蛋白 （OVA）诱导BALB/c小鼠建立哮喘气道重塑模型后,行ASMC分离和培养,并以原代培养的正常小鼠ASMC作为对照组。检测对照组和哮喘组小鼠ASMC中KyoT2的表达。哮喘小鼠ASMC转染pCMV-Myc （空载体组）和过表达KyoT2质粒pCMV-Myc-KyoT2 （KyoT2过表达组）48 h后,采用RT-PCR和Western blot方法检测各组KyoT2 mRNA和蛋白表达;采用MTT法和BrdU法检测ASMC增殖;采用Transwell法检测ASMC的迁移。Western blot用于检测过表达KyoT2对RBP-Jκ、PTEN和AKT蛋白表达水平的影响。结果 与对照组比较,哮喘组ASMC中KyoT2表达下调,KyoT2过表达组ASMC中KyoT2表达显著上调 （P < 0.05）。与空载体组比较,KyoT2过表达抑制细胞增殖和细胞迁移 （P < 0.05）;且KyoT2过表达能下调RBP-Jκ和AKT的表达,上调PTEN的表达 （P < 0.05）。结论 KyoT2抑制哮喘ASMC增殖和迁移,其机制可能是通过负调控RBP-Jκ/PTEN/AKT信号通路来实现。     

胡椒碱抑制AngⅡ诱导大鼠气道平滑肌细胞增殖和迁移

目的探究胡椒碱对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖和迁移的影响。方法用改良组织块和胰蛋白酶消化联合培养原代细胞ASMCs。MTT检测AngⅡ及其受体拮抗剂losartan对细胞增殖活性的影响。AngⅡ和不同浓度胡椒碱作用ASMCs后,MTT、流式细胞术和Transwell分别检测细胞增殖、细胞周期以及细胞迁移;ERK1/2抑制剂PD98059和losartan干预后,Western blot检测cyclin D1、MMP-9、p-ERK1/2、ERK1/2和β-actin等蛋白表达。结果 AngⅡ(10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)和10~(-5)mol/L)作用24 h后,可浓度依赖性地促进ASMCs增殖(P0.05),其中10~(-7)mol/L AngⅡ促进效果最为显著;losartan处理则抑制AngⅡ诱导的ASMCs增殖(P0.05)。10~(-7)mol/L AngⅡ处理组ASMCs增殖活性、S期细胞分布比例、细胞迁移数目和蛋白质(cyclin D1、MMP-9和p-ERK1/2)表达均明显增加(P0.05);而胡椒碱(10、25、50和100μmol/L)处理可浓度依赖性地减轻AngⅡ诱导的上述效应。并且,PD98059和losartan亦能阻断AngⅡ对ASMCs p-ERK1/2、cyclin D1和MMP-9的上调作用。结论胡椒碱能通过ERK1/2通路抑制AngⅡ诱导的大鼠ASMCs增殖和迁移。     

气胸对肺压迫再灌注损伤的实验研究

目的探讨幼兔气胸复张后肺再灌注损伤及丹参对此的保护作用。方法将48只幼兔,随机分为6组(实验组A1~A4,对照组B1~B2)。A1右侧胸腔注入17ml空气7d后复张,A2压迫5 d后复张,其余同A1。A3、A4分别在复张前3d每天肌肉注射生理盐水、丹参,其余同A2。B1正常饲养,B2只行右侧胸腔穿刺。各组空气栓塞处死,取右侧肺组织行以下观察:(1)肺组织大体变化;(2)肺组织干湿比;(3)光镜下观察肺病理变化;(4)测定肺组织髓过氧化物酶(MPO),丙二醛(MDA)的变化。结果实验组各组MPO、MDA含量以及肺湿干比、病理评分较对照组各组显著增高(P<0.01)压迫7 d组(A1)各项指标较压迫5 d组(A2)增高(P<0.05)。丹参治疗组(A4)各项指标均明显低于压迫5d组(A2)(P<0.05)。结论气胸复张后肺组织中MPO、MDA增高,提示气胸复张后有肺缺血一再灌注后的损伤,与压迫时间成正比;丹参能够抑制肺组织MPO和MDA的产生,降低肺湿干比,有减轻肺缺血-再灌注后的损伤作用。