不同转移潜能人肝癌细胞系酪氨酸磷酸化蛋白质差异分析

目的研究不同转移潜能人肝癌细胞系中酪氨酸磷酸化蛋白质表达的差异并筛查与肝癌转移相关的酪氨酸磷酸化蛋白质分子。方法应用双电泳(2-D E)、免疫印迹法及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析,对三种不同转移潜能人肝癌细胞系Hep 3B、MHCC97L和MHCC97H进行酪氨酸磷酸化蛋白质组分析。结果对照2-DE胶和免疫印迹发光胶片,Hep3B检测到10个点,MHCC 9 7L检测到19个点, MHCC97H检测到17个点。经质谱鉴定,得到膜连蛋白Ⅰ等19个差异点。结论细胞内酪氨酸磷酸化蛋白的表达差异与肝癌的侵袭转移有关。     

人肝细胞性肝癌组织转移相关分子的比较蛋白质组学研究

目的 应用比较蛋白质组学方法研究肝细胞性肝癌(HCC)转移相关的关键蛋白分子。方法 用双向凝胶电泳(2DE)对有转移的HCC组织和未发生转移的HCC组织总蛋白进行分离，两组间差异蛋白点用质谱和数据库搜索鉴定，并在蛋白质和mRNA水平上进一步检测验证。结果 鉴定出l6个差异表达蛋白，包括S100钙结合蛋白(S100)、热休克蛋白27(HSP27)、细胞角蛋白18(CK18)等。对在转移性HCC组织中表达显著增高的HSP27，应用western blot分析在蛋白水平上验证了2DE结果，RT-PCR检测出两组问mRNA水平也存在差异，但不显著，免疫组织化学检测显示HSP27主要定位于肝细胞胞浆内。结论 HCC转移与多种蛋白表达相关，其中HSP27高表达可能在转移中发挥作用，可能为潜在的判断HCC转移的分子标记或控制转移的治疗靶点。     

靶向干扰CXCR7基因表达对肝癌(HCC)细胞增殖及凋亡的影响

 目的  探讨CXCR7基因在不同肝癌细胞系及肝癌组织中的表达情况,并研究靶向抑制CXCR7基因表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响。方法  应用Western blot检测不同肝癌细胞系及10例肝癌组织中CXCR7蛋白的表达水平。采用短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默HCCLM3与MHCC97L细胞中CXCR7基因的表达,分别采用Western Blot和qRT PCR检测shRNA的靶向沉默效果。通过CCK-8增殖实验与Annexin V-FITC/PI细胞双染色研究CXCR7抑制对HCCLM3与MHCC97L增殖及凋亡的影响。结果  CXCR7表达水平与肝癌细胞的恶性程度呈正相关,肝癌组织中CXCR7表达水平较癌旁显著升高。实验成功构建了9个慢病毒表达载体,其中CXCR7 shRNA 566序列干扰效率最高。增殖实验显示干扰表达组细胞生长速度受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪分析显示干扰CXCR7表达可诱导细胞凋亡的发生。结论  CXCR7表达水平与肝癌恶性程度呈正相关,靶向干扰CXCR7表达可抑制细胞的增殖能力,诱导细胞发生凋亡。     

不同转移潜能人肝癌细胞系的差异表达蛋白质组分析及意义

目的比较研究转移性肝癌细胞系中蛋白质表达谱的改变,筛查在转移中起重要作用的关键蛋白质分子.方法用双向电泳(2-DE)及液相色谱-电喷雾-串联质谱(LC-ESI-MS/MS)对3种不同转移潜能人肝癌细胞系Hep3B、MHCC97L、MHCC97H的差异蛋白质组进行分析. 结果 Hep3B、MHCC9TL和MHCC9TH分别平均检测到976±112个蛋白点(n=3)、1092±40个蛋白点(n=3),和888±15个蛋白点(n=3),以其中MHCC97L图谱为参考胶,Hep3B、MHCC9TL和MHCC9TH分别与其匹配的平均匹配点数为637±37个(n=3)、771±16个(n=2)和589±51个(n=3),平均匹配率分别为65.7 %,72.1%,66.2%.不同胶间蛋白质斑点的位置偏差[等电聚焦(IEF)]方向为(2.95± 0.95)mm,聚丙烯酰胺凝胶电泳方向为(2.87±0.88)mm.Hep3B、MHCC97L、MHCC97H中有359个蛋白质点匹配.与Hep3B比,MHCC97L有103个点未匹配,相差10倍以上的上调点和下调点分别为57个和49个;MHCC97H有113个点未匹配,相差10倍以上的上调点有47个,相差10倍以上的下调点有52个.质谱可鉴定出S100A4,S100A6,S100A11,Annexin1等26种胶内差异蛋白质.结论与不转移肝癌细胞相比,转移性肝癌细胞有明显的差异性蛋白表达谱.推测肝癌侵袭转移性与细胞内多种差异蛋白相关.     

不同银染法和上样模式对双向凝胶电泳影响的初步分析

双向凝胶电泳 (2 DE)技术是蛋白质组学研究的重要支撑技术之一。该技术利用蛋白质 2项独立物化参数———等电点 (pI)和分子量的差异 ,将高分辨率的等电聚焦电泳(IEF)和聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)程序相组合。 2 DE常用的标本上样方式有溶涨上样和杯上样。前者溶涨与等电聚焦同时进行 ,后者溶涨与等电聚焦依次进行。常用的下游蛋白质显示技术包括同位素标记法、荧光标记法、染料标记法、金属和重金属离子标记法。银染法属金属离子还原染色 ,分双胺银染法和非双胺化学显色银染法。本研究通过比较两种上样方式和两种银染法对人肝…