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目的研究不同转移潜能人肝癌细胞系中酪氨酸磷酸化蛋白质表达的差异并筛查与肝癌转移相关的酪氨酸磷酸化蛋白质分子。方法应用双电泳(2-D E)、免疫印迹法及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析,对三种不同转移潜能人肝癌细胞系Hep 3B、MHCC97L和MHCC97H进行酪氨酸磷酸化蛋白质组分析。结果对照2-DE胶和免疫印迹发光胶片,Hep3B检测到10个点,MHCC 9 7L检测到19个点, MHCC97H检测到17个点。经质谱鉴定,得到膜连蛋白Ⅰ等19个差异点。结论细胞内酪氨酸磷酸化蛋白的表达差异与肝癌的侵袭转移有关。 相似文献
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目的 分析人肺巨细胞癌高、低转移株中uPA基因启动子序列差异和这种差异对启动子活性的影响。方法 用PCR分段扩增人肺巨细胞癌高 (95D)和低 (95C)转移细胞株中uPA基因启动子序列 ,将uPA启动子亚克隆到荧光素酶为报告基因的 pGL3 Basic载体上 ,转染 95D或 95C细胞 ,分析启动子活性。 结果 95D与 95C细胞uPA基因启动子序列中有 3个位点碱基的差别 ,95D分别是 - 1933bp为“T” ,- 4 2 4bp为“C” ,- 96bp为“G” ,而 95C分别为“C”、“T”、“T”。这些不同对启动子活性的影响未见差别。在 - 2 14 3/ - 182 4之间存在uPA基因启动子的增强子序列 ,在 - 182 4 / - 4 0 8之间存在uPA启动子的负性调控序列。结论 uPA在 95D与 95C细胞中表达的差别不是直接由于启动子序列差别引起的 ,而可能是由于两种细胞中存在转录因子量的差别 相似文献
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目的构建PAI-2ΔCD突变体基因,实现在大肠杆菌中的表达并建立重组人PAI-2ΔCD的分离纯化方法。方法用PCR扩增PAI-2ΔCD基因,经限制性内切酶片段分析及核苷酸序列分析后,突变体基因与原核表达载体pLY-4重组并转化蛋白酶缺陷型菌株JF1125。经温度诱导表达,表达产物用SDS-PAGE,Western印迹法和纤溶抑制活性测定等方法鉴定。工程菌发酵后,经高压匀浆破菌,用离子交换、疏水性色谱和分子筛进行分离。结果经温度诱导表达,SDS-PAGE证实在相应相对分子质量处出现表达条带,约占全菌总蛋白的15%。Western印迹法证实表达产物具有PAI-2免疫原性,溶圈抑制法及翻转板法证实表达产物具有纤溶抑制活性。5L发酵菌液可得湿菌约100g,经多步纯化后,每升发酵菌液可得纯度达97%的PAI-2ΔCD约36mg,比活性为28640AIU/mg。结论成功构建了PAI-2ΔCD突变体,实现了在大肠杆菌中的表达,并成功地分离纯化了重组人PAI-2ΔCD蛋白。 相似文献
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朱运松 《医学分子生物学杂志》1991,(6)
在纤溶反应体系中,Ⅰ型纤溶酶原抑制剂(PAI-1)是组织型纤溶酶原激活剂和U型纤溶酶原激活物(PA)的生理性抑制剂。PAI-1通过与t-PA的结合形成复合物使其失活,从而调节t-PA的活性,本文着重介绍了PAI-1的基因结构及其功能,以及与t-PA之间的关系。 相似文献
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目的:检测IgG受体(FcγR)在炎症细胞因子刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)上的表达。方法:采用ELISA、免疫组化染色法、免疫荧光法和RT-PCR等方法,检测FcγRII及其表达。结果:未经细胞因子刺激的正常HU-VEC可表达低水平的FcγRIIa;经2×105U/L TNF-α和1×105U/L IFN-γ联合刺激3d后,FcγRIIa的表达提高16倍(P<0.01)。免疫荧光法检测显示,TNF-α和IFN-γ诱导的FcγRIIa表达于HUVEC表面。RT-PCR结果显示,FcγRIIamRNA表达量在TNF-α和IFN-γ刺激24h后有明显提高。结论:TNF-α和IFN-γ可通过调节FcγRIIa的转录和翻译,增强其在HUVEC上的表达。FcγRIIa的表达可能与血管炎条件下,免疫复合物在血管上的特异性定位有关。 相似文献
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同工酶谱是研究细胞基因表达的良好指标。近年来国外已广泛利用同工酶谱的变化来观察个体发育或组织癌变时的基因表达,其中以丙酮酸激酶(PyK)的研究较为活跃。丙酮酸激酶至少有三种同工酶;L型主要存在于哺乳动物肝脏、肾皮质等与糖异生有关的组织中;M(或 M_1)型存在于骨胳肌、心肌和脑中;而K(或M_2)型则广泛存在于除骨胳肌 相似文献
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目的 研究纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)的两种不同突变体抵抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导Hela细胞凋亡的活性差异,探讨PAl-2CD螺旋间区的空间构象对其抗凋亡功能的影响。方法 分别构建突变体PAI-2D和PAI-2M真核表达质粒。转染Hela细胞,RT-PCR鉴定,筛选出能稳定表达PAI-2D和PAI-2M的阳性细胞株。用MTT法检测PAI-2的这两个突变体抗凋亡的活性,并利用计算机同源模建,比较PAI-2的这两个突变体空间构象的变化。结果 突变体PAI-2M能抑制TNF-αa诱导的Hela细胞凋亡,而PAI-2D则不能。PAI-2M较好地保持了野生型PAI-2的空间构象,而PAI-2DCD螺旋间区的空间构象则发生了较大的变化。结论 PAI-2抑制TNF-α诱导的细胞凋亡依赖于其CD螺旋间区空间构象的完整性,而与PENF结构域(PENF73~76)无关。 相似文献
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目的研究建立大肠杆菌表达的重组人PAI-2(rhPAI-2)的纯化方法,并对rhPAI-2蛋白进行理化和生物学性质的研究。方法工程菌被高压匀浆后,经硫酸铵分级沉淀,用分子筛、离子交换和疏水性色谱进行分离,得到了rhPAI-2蛋白。对rhPAI-2进行了复性,对rhPAI-2的温度、pH、盐浓度、氧化剂敏感性、二级速率常数及抗SDS复合物形成等理化性质和生物学特性进行了测定。结果每升菌液可获得约30mg纯度达90%的蛋白质,比活性为11866AIU/mg,得率为19.2%。当温度高至60℃时,rhPAI-2迅速失活;当pH小于3时,rhPAI-2完全失活;当盐浓度和H2O2浓度分别在1.5和0.5mol/L时,rhPAI-2的活性仍维持在90%以上;rhPAI-2可与尿激酶形成抗SDS复合物。结论成功地从大肠杆菌中分离纯化了rhPAI-2。rhPAI-2与天然PAI-2在理化性质和生物学特性上基本一致。 相似文献
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