经心内膜致颤建立兔心室纤颤心肺复苏模型的方法及质控要点

通过交流电经心内膜诱导心室纤颤（室颤）建立心肺复苏（CPR）动物模型用于心脏停搏时间测量精确,对全身干扰小,更符合临床实际,因此是目前最常采用的动物实验致颤方式［1-2］。在动物选择方面,美国Weil危重病医学研究所创立并发展了大鼠的经心内膜交流电诱导室颤模型,但他们通常选用体质量在450～550 g的大鼠,而且常另备大鼠作为供血者,以避免抽血后造成低血容量或稀释性贫血［3］。在我国,对多数研究者而言,难以经济地得到这样体质量的大鼠,另取大鼠作为供血者也费力费钱。犬、猪等大动物存在价格昂贵、操作不方便等缺陷,家兔兼具了大、小动物的优点而成为近期常用的研究CPR的动物［4-8］。根据Weil危重病医学研究所和本课题组前期实验过程中的经验及教训,我们总结出了经心内膜致颤建立兔室颤和CPR模型的方法及质控要点,重点在于排除可能影响CPR成功率和CPR研究质量的因素,为国内广大CPR研究者提供有益的借鉴。     

人工气道方式对心脏骤停模型复苏的影响

目的观察人工气道建立方式对大鼠心跳骤停模型自主循环恢复后呼吸功能、存活率的影响及改良经口气管插管法的可行性。方法建立窒息法大鼠心跳骤停模型;30只SD大鼠随机分成经口气管插管组（n=15）和气管切开插管组（n=15）两组。观察复苏后大鼠在机械通气与自主呼吸状况下动脉血气值的变化,比较复苏后6、24、72h生存率。结果经口气管插管组在机械通气与自主呼吸状态下的pH值比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,而气管切开组在机械通气与自主呼吸状态下的pH、PaCO2比较,差异均有高度统计学意义（均P〈0.001）;同期两组间pH、Pa-CO2、PaO2比较,差异均有高度统计学意义（均P〈0.001）;气管切开组6、24h存活率有明显下降趋势,72h存活率比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论对于观察时间长、需要脱机或撤除人工气道的大鼠心跳骤停模型,经口气管插管法建立人工气道优于气管切开插管法;且改良经口气管插管法是值得推荐的一种大鼠气管插管方法。     

亚低温对心肺复苏后大鼠脑组织AQP4表达的影响

目的 探讨亚低温对心肺复苏后大鼠脑组织AQP4表达的影响。方法 42只雄性SD大鼠随机分为3组：假手术组（6只），常温复苏组及亚低温组，后2组再分为3个亚组，即自主循环恢复（ROSC）后1、3、6h组，每个亚组均为6只大鼠，亚低温组复苏后即予亚低温干预。应用免疫组化法测脑组织AQP4表达．干湿重法测脑含水量。结果 亚低温组ROSC后1小时BWC与同一观察时点复苏组比较。无显著性差异。但AQP4表达水平下降已有显著性差异（P〈0．05）。亚低温组ROSC后3h和6h，BWC和AQP4表达水平与相同观察时点复苏组比较，均明显降低，差异性显著（P〈0．05）。结论 亚低温可减轻心肺复苏后脑水肿，其机制可能为：亚低温使大鼠脑组织AQP4表达下调。     

亚低温对心搏骤停大鼠大脑皮质水通道蛋白4基因表达的影响

人工亚低温治疗已成为脑复苏的重要治疗措施之一~([1-4]),但其促进神经功能恢复或脑保护的机制尚未完全阐明.多项研究表明,水通道蛋白4(AQP-4)与脑水肿的形成关系密切,提示AQP-4蛋白表达水平下调可能是减轻脑水肿的机制之一~([4-5]).本研究中通过观察亚低温对复苏后大鼠脑皮质组织AQP-4 mRNA表达及皮质含水量变化的影响,旨在阐明AQP-4与脑水肿间的关系.     

经右心室电刺激致颤建立家兔心脏骤停模型

目的：建立一种简单、有效、稳定的家兔电刺激致颤心脏骤停（ CA）后脑复苏模型。方法选用20只新西兰雄性家兔,采用体表胸壁及心内膜下交流电诱发室颤的方法制作CA模型,CA 4 min后开始心肺复苏（CPR）。记录手术操作时间（TOP）、自主循环恢复时间（TROSC）、恢复率,除颤、肾上腺素次数,24 h、72 h存活率以及进行72 h大脑皮质凋亡细胞检测。另取10只兔为对照组,只进行致颤前手术操作。结果①20只家兔全部诱发CA成功,室颤发生率为100％。自主循环恢复率为80％;24 h、72 h存活率为50％、30％;除颤和肾上腺素次数为1．20±0.89、1．60±0．75;TOP和TROSC分别为（79±25）min、（268±33）s。②血浆神经元特异性烯醇化酶（NSE）水平显著升高,ROSC 72 h略有回降,但仍高于造模前（P＜0．05）。③与对照组比较,ROSC后72 h大脑皮质区出现了较多神经细胞的凋亡（P＜0．05）。④神经功能评分（NDS）在复苏后3 h时最低,以后渐趋好转。结论该模型操作简单、结果稳定、复苏成功率高,是一个较为理想的心肺脑复苏研究模型。     

艾芬地尔对大鼠心肺复苏后脑组织含水量和水通道蛋白-4表达的影响

目的 探讨艾芬地尔(NMDA)对大鼠脑组织含水量和水通道蛋白-4(AQP4)表达的影响.方法 78只雄性sD大鼠随机分为三组:对照组、复苏组及NMDA治疗组.每组再分为三个亚组,即自主循环恢复(ROSC)后1、3、6 h组,除对照组各时问点为6只大鼠外,另两组大鼠各时间点均为10只.NMDA治疗组在复苏后立即行NMDA干预.应用免疫组化测定脑组织AQP4表达,干湿质量法测定脑组织含水量(BWC).结果 NMDA治疗组ROSC后1、3和6 h BWC和AQP4表达水平与相同时点复苏组比较均明显降低(P＜0.05).另外,复苏和NMDA治疗组BWC和AQP4两者的变化呈正相关,相关系数分别为0.58和0.48.结论 艾芬地尔可减轻心肺复苏后脑水肿,其机制可能是艾芬地尔降低了AQP4的表达.     

亚低温对心跳骤停大鼠内毒素受体的影响

目的:研究心跳骤停大鼠内毒素受体的变化及亚低温对其影响.方法:建立大鼠心跳骤停模型,SD大鼠24只,随机分为3组:对照组、常规心肺复苏组、亚低温心肺复苏组.每组8只:三组大鼠分别在手术或复苏后24 h静脉注射3 mg/Kg LPS;并于手术或复苏后6 h、12 h、24 h,及注射LPS后1.5 h、3 h、6 h静脉取血;采用ELISA法,测定血浆可溶性内毒素受体CD14(sCD14)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;免疫组织化学法测定注射LPS后6 h左肺肺泡及肺间质巨噬细胞表面内毒素受体CD14(mCD14)蛋白表达;观察肺组织病理改变.结果:与对照组比较,复苏组在复苏和注射LPS后血浆sCD14水平明显升高,但亚低温组低于常规组(P<0.05);注射LPS后,各组TNF-α水平均增高,且与sCD14水平成正相关(r=0.92,P<0.01);常规组肺泡巨噬细胞mCD14表达明显高于亚低温组(P<0.01);常规组肺损伤评分也大于亚低温组(P<0.05).结论:心肺复苏后大鼠存在内毒素受体的上调,伴随着对内毒素敏感性的增强;亚低温对其有抑制作用,减轻复苏后内毒素对肺的损害.