2019－2021年长春市儿童急性呼吸道感染病例中鼻病毒感染状况及其分子分型研究

  目的   为了解2019年6月至2021年5月吉林省长春市急性呼吸道感染住院儿童病例中鼻病毒感染状况并对鉴定出的鼻病毒进行分子分型研究。  方法   采用实时荧光聚合酶链式反应技术对采集的1 251份咽拭子标本进行常见8种呼吸道病毒的检测。 针对鉴定结果为阳性的鼻病毒标本,使用巢式反转录聚合酶链式反应扩增VP1区并进行序列测定和分析。   结果   61.87%（774/1 251）的标本至少检出有1种呼吸道病毒,其中呼吸道合胞病毒和鼻病毒检出率较高,分别为19.18%（240/1 251）和18.63%（233/1 251）。 男女性间鼻病毒检出率比较差异无统计学意义,检出年龄主要集中在1～3岁组,占所有鼻病毒感染病例的67.81%;呈现为以夏秋季为感染高峰的季节性流行,9—10月为鼻病毒的检出高峰。 本研究从233份阳性鼻病毒标本中共获得161条鼻病毒VP1序列,通过分子分型鉴定属于55个型别,其中A种鼻病毒37个,B种鼻病毒4个,C种鼻病毒14个。 RV-A12和RV-A49两个型别检出数目最多,均为12条。   结论  2019年6月至2021年5月长春市急性呼吸道感染病例咽拭子标本中鼻病毒检出阳性率位居第二,仅次于呼吸道合胞病毒。 长春市儿童急性呼吸道感染相关的鼻病毒流行以A种鼻病毒为主,C种次之,B种最少;RV-A12和RV-A49是长春市2019—2021年流行的优势型别。     

河南省漯河市急性呼吸道感染病例人博卡病毒检出情况及病毒基因特征分析

目的 分析河南省漯河市急性呼吸道感染(ARI)病例中人博卡病毒(HBoV)的检出情况及病毒基因特征。方法 使用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)对2018年6月至2020年12月收集的1 185例ARI病例咽拭子标本进行呼吸道多病毒检测。对HBoV核酸阳性的标本进行VP1基因巢式PCR扩增和序列测定,同时结合GenBank下载的中国地区HBoV1 VP1基因序列,进行病毒基因特征分析。结果 在1 185例ARI病例标本中,共有32例(2.70%)为HBoV阳性,其中17例(53.13%)同时检出≥2种病毒。96.88%(31/32)HBoV阳性病例为5岁以下的儿童,其中以12～23月龄患儿的检出率最高(5.52%),其次是6～11月龄(3.39%)。HBoV阳性病例主要集中在夏、秋、冬3个季节,但三者间差异无统计学意义(P>0.05)。HBoV的单一感染和混合感染均可引起上呼吸道或下呼吸道感染,但差异无统计学意义(P>0.05)。本研究所获得的21条HBoV序列均属于HBoV1。Ⅰb分支是2018—2020年河南省漯河市HBoV1主要优势流行株,与我国其他地区一致...     

HPV31 L1 C端截短基因可在昆虫细胞表达体系中高水平制备L1 VLP疫苗

目的利用昆虫细胞表达体系制备人乳头瘤病毒(HPV)31 L1病毒样颗粒(VLP)疫苗。方法化学合成法获得昆虫Sf9细胞偏性密码子优化的、C端删除27个氨基酸编码序列的HPV31 L1截短基因(HPV31 L1MΔC),构建重组杆状病毒,感染Sf9细胞进行表达;分别采用超声破碎、含离子型表面活性剂(1%SDS等)或含非离子型表面活性剂(0.5%TritonX-100)的裂解缓冲液,制备细胞裂解上清;氯化铯超速离心法纯化后经动态光散射及透射电子显微镜鉴定;0.1μg的HPV31 L1MΔC VLP于第0和2周肌肉免疫BALB/c小鼠,第4周采集血清分析中和活性。结果 3种裂解方法制备的上清均显示HPV31 L1MΔC蛋白的特异表达,其表达量约占裂解上清总蛋白的10%;采用非离子型表面活性剂获得的裂解上清纯化后,目的蛋白纯度高,产量达11.5 mg/L;纯化蛋白的水化分子直径为103.3 nm,均一性好;电镜分析为直径50～60 nm的VLP。免疫血清中HPV31中和抗体滴度为1 440。结论 HPV31 L1MΔC在昆虫细胞表达体系制备的VLP产量高、免疫原性好,可用于生产含HPV31 L1 VLP的多价疫苗。     

2017—2021年河南省漯河市急性呼吸道感染病例肠道病毒感染型别分析

目的了解2017—2021年河南省漯河市急性呼吸道感染(ARIs)病例中肠道病毒(EV)的感染状况, 分析EV在ARIs中的流行情况及型别组成。方法于2017年10月至2021年5月, 采集河南省漯河市中心医院1 828例ARIs患者的咽拭子样本, 并收集相关临床流行病学资料。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)筛选EV阳性样本, 随后对阳性样本采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增5′非翻译区(5′UTR), 使用Enterovirus Genotyping Tool在线定型工具初步定型后采用RT-PCR法进行VP1区全长扩增, 再次比对确定EV分型。结果 1 828例ARIs病例中, 男性占56.7%(1 036例);年龄M(Q1, Q3)为3(1, 5)岁;5岁以下人群占71.6%(1 309例)。1 828例ARIs病例中, 通过qPCR检测鉴定EV阳性样本共有71例, 检出率为3.88%(71/1 828);男、女性EV检出率分别为3.28%(34/1 036)和4.67%(37/792), 差异无统计学意义(χ2=2.32, P=0.14)。2～<6岁、6...