抗Glycophorin A单链抗体基因的构建及酵母表达研究

目的　制备人红细胞表面血型糖蛋白A单链抗体。方法　从可分泌抗人红细胞表面血型糖蛋白A单克隆抗体的杂交瘤细胞中 ,分别扩增出编码其轻、重链可变区基因的cDNA ,通过连接序列组建单链抗体基因 ,将该基因导入毕赤酵母中 ,筛选工程菌株。结果　构建了抗GPA单链抗体基因 ,获得了分泌型表达单链抗体的毕赤酵母菌株 ,工程菌株可表达 30kD蛋白 ,ELASA证明其具有与GPA特异结合活性。结论　该单链抗体保留了亲本抗体的活性 ,为研制红细胞抗体快速诊断试剂奠定了基础     

输血后丙型肝炎病毒血症,抗体及转氨酶动态研究

对１０例输血后丙型肝炎进行了病毒血症、抗体及丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）动态研究。用套式ＰＣＲ法检测丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ，首次检出时间为输血后１５～８７天，平均４０．３±２０．１天，持续或间歇阳性超过１年者７例。抗ＨＣＶＣ１００．Ｎ１４、Ｐ２２和ＳｃＮＳ３／４和５抗体首次阳转时间分别为输血后３３～４３７（１１９．７±１１９．５）天、５２～１６６（７７．９±３５．６）天、３３～１０３（５５．０±２３．８）天和３３～６６（４０．１±１３．５）天，该４种抗体阳转后都持续１年以上。ＡＬＴ首次异常时间为输血后１５～６０天，平均３７．９±１３．９天，异常超过１年者６例。     

乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)在大肠杆菌中的合成及用于抗HBc和抗HBcIgM的检测

采用基因工程技术,使克隆到大肠杆菌质粒上的 HBV 基因,经过体外切割重组,使其中的 HBcAg基因能在大肠杆菌中表达。以这种工程菌裂解液作为抗原,建立了检测血清中抗-HBc 和抗-HBcIgM的 ELISA方法。在与用美国Abbott厂的同类试剂盒进行的对比测定中,38份标本的抗 HBc检测结果,除 1份外,22份阳性和 15份阴性全部符合。40价标本抗HBcIgM检测结果,20份阳性和20份阴性亦完全相符。     

简易环氧乙烷气体消毒法

<正> 在卫生医疗工作和工业生产过程中,有时需要对大量忌热忌湿的物品进行消毒处理。为改进对这类物品的消毒方法,我们曾对环氧乙烷气体消毒和灭菌的方法进行了研究。环氧乙烷(C_2H_4O)在温度高于其沸点(10.8℃)时是一种无色气体,具有杀菌谱     

白介素-Ⅱ基因片段核苷酸顺序分析

本文采用~(35)S标记的脱氧三磷酸核苷酸,以双脱氧核苷酸链终止法,分析了克隆于M13噬菌体的白介素-Ⅱ(以下简称IL-Ⅱ)DNA AluI片段的序列。其中包括XbaⅠ、HaeⅢ、B_(st)NI、HinfI限制性核酸内切酶位点。对于研究IL-Ⅱ基因重组、探针制备以及基因表达具有一定的意义。     

登革病毒E蛋白区段基因克隆及高效表达

目的进行登革病毒Ｅ蛋白区段的高效表达,制备抗原,为分析Ｔ、Ｂ细胞表位及免疫功能的研究奠定基础。方法以含有Ｄ２ＶＥ区的质粒ｐ３０．ＶＤ２为模板,ＰＣＲ扩增了编码Ｄ２ＶＥ蛋白３０８～４６８ａａ区段的基因片段,以ｐＭＹ为表达载体,构建了表达质粒ｐＤＥ１,并用酶切法使之缺失跨膜区疏水ａａ较多的编码序列,又构建了表达质粒ｐＤＥ２,分别转化大肠杆菌,获得了不同的工程菌株。经诱导培养,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,免疫印迹及酶联检测分析表达产物。结果含ｐＤＥ１质粒工程株只能表达微量的特异性蛋白;而含ｐＤＥ２质粒的工程菌株则能高效表达Ｄ２Ｖ特异性Ｅ蛋白,重组表达产物占菌体蛋白的２５．３１％。用４ｍｏｌ／Ｌ尿素溶解包涵体,上清中Ｅ蛋白纯度可达８０％。以粗提物包板进行酶联检测,结果表明,该重组Ｅ蛋白具有ＤＶ４个型交叉抗原的特性。结论缺失Ｃ末端疏水区编码序列的Ｄ２ＶＥ基因片段,可在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得高效表达,其表达产物具有ＤＶ属特异性。     

丙型肝炎病毒5’非编码区PCR产物单链构象多态性分析及序列测定

目的：研究慢性肝炎病人血清、肝细胞肝癌组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５＇非编码区变异情况．方法：收集１０例慢性肝炎病人及４例肝细胞肝癌病人血清和肝细胞肝癌组织，检测抗ＨＣＶ抗体阳性，进行ＨＣＶ５＇非编码区ＲＮＡ的逆转录ＰＣＲ扩增，ＰＣＲ产物进行单链构象多态性分析，并对部分病例序列进行测定．结果：６例慢性肝炎病人血清及３例肝细胞肝癌组织中检测到ＨＣＶＲＮＡ，单链构象多态性分析显示各例条带之间无明显差异，对１例肝细胞肝癌组织中ＨＣＶ５＇非编码区ｃＤＮＡＰＣＲ产物的序列测定表明它与ＨＣＶ－１的同源性为９７．３％，与ＨＣＶ－ＢＫ的同源性为９７．７％．结论：我们的结果提示在西安地区ＨＣＶ５＇非编码区几乎是一样的，并进一步证实不同地区ＨＣＶ５＇非编码区的高度保守性．     

丙型肝炎病毒5‘非编码区PCR产物单链构象多态性分析及序…

研究慢性肝炎病人血清，肝细胞肝癌组织中丙型肝炎病毒５‘非编码区变异情况。方法：收集１０例慢性肝炎病人及４例肝细胞肝癌病人血清和肝细胞肝癌组织，检测抗ＨＣＶ抗体阳性，进行ＨＣＶ５’非编码区ＲＮＡ的逆转录ＰＣＲ扩增，ＰＣＲ产物进行单链构象多态性分析，并对部分病例序列进行测定。     

输血后丙型肝炎病毒非结构区抗体和丙氨酸转氨酶的动态分析

利用重组的丙型肝炎病毒非结构区（ＨＣＶＮＳ５）抗原建立了酶免疫试验（ＥＩＡ），对２５例输血后丙型肝炎进行了不同区抗体及丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）的动态研究，同时对１５６例慢性丙型肝炎患者血清进行ＨＣＶＲＮＡ和抗－ＮＳ５平行检测，两者符合率为６４．１％。抗－ＮＳ５抗体首次检出时间为３０～５７５天（１８２．９±１６８．５），晚于ＡＬＴ异常和其他区抗体的出现时间。在感染后１，３，６，１２和２４个月后抗－ＮＳ５的阳性率分别为２８％，４０％，５２％，６８％和７６％。抗－ＮＳ５的动态变化类型为四种：一过性阳性、间歇性阳性、持续性阳性和２年内持续阴性     

α_1－抗胰蛋白酶PCR定点突变体的构建与分析

利用一对寡核苷酸引物，对含有α＿１－抗胰蛋白酶（α＿１－ＡＴ）ｃＤＮＡ基因的质粒进行定点诱变，使３５８Ｍｅｔ－ＡＴＧ突变为Ａｒｇ－ＡＧＧ。经过Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链要末端终止法进行ＤＮＡ序列测定，表明α＿１－ＡＴ被成功地定点突变。将突变得到的α＿１－ＡＴＰｉｔｔｓ基因克隆入ｐＢＶ２２０载体中并进行表达，得到了有抗原活性的凝血酶抑制剂α＿１－ＡＴＰｉｔｔｓ表达产物。以一对引物代替两对引物，节省了引物合成的费用，方法简便、快速、经济。