检测丙型肝炎患者NS5区抗体的临床意义探讨

目的检测慢性丙型肝炎患者和１４例ＨＣＶ原发感染后ＮＳ５抗体长达一年半的动态变化，探讨ＮＳ５抗体的临床意义。方法应用重组ＮＳ５抗原，建立ＥＩＡ方法进行检测。结果慢性丙型肝炎患者抗－ＮＳ５抗体阳性率为６０．４８％，ＨＣＶ感染后一月抗－ＮＳ５抗体阳性率为１６．３５％，三月为７５％。结论抗－ＮＳ５抗体无早期诊断价值。抗－ＮＳ５抗体持续阳性者，血清ＡＬＴ多明显升高，抗－ＮＳ５抗体与肝脏疾病活动性相关。丙型肝炎患者中存在抗－Ｃ、抗－ＮＳ３、抗－ＮＳ４抗体阴性，而抗－ＮＳ５抗体单独阳性，表明检测抗－ＮＳ５抗体具有独特的诊断价值     

输血后丙型肝炎病毒血症,抗体及转氨酶动态研究

对１０例输血后丙型肝炎进行了病毒血症、抗体及丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）动态研究。用套式ＰＣＲ法检测丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ，首次检出时间为输血后１５～８７天，平均４０．３±２０．１天，持续或间歇阳性超过１年者７例。抗ＨＣＶＣ１００．Ｎ１４、Ｐ２２和ＳｃＮＳ３／４和５抗体首次阳转时间分别为输血后３３～４３７（１１９．７±１１９．５）天、５２～１６６（７７．９±３５．６）天、３３～１０３（５５．０±２３．８）天和３３～６６（４０．１±１３．５）天，该４种抗体阳转后都持续１年以上。ＡＬＴ首次异常时间为输血后１５～６０天，平均３７．９±１３．９天，异常超过１年者６例。     

52 例病毒性肝炎患者肝组织中丙型肝炎病毒 RNA 和 HCAg-NS3 的测定

应用地高辛标记探针原位杂交法和单克隆抗ＨＣＶ－ＮＳ３－ＨＲＰ建立直接酶标免疫组化法分别测定５２例肝炎患者肝组织ＨＣＶＲＮＡ和ＨＣＡｇ－ＮＳ３。结果抗ＨＣＶ阳性组ＨＣＶＲＮＡ检出率５７．１％（１６／２８），ＨＣＡｇ－ＮＳ３检出率５３．６％（１５／２８）；抗ＨＣＶ阴性组其两项检出率均为１２．５％（３／２４）。肝组织中ＨＣＶＲＮＡ阳性物呈蓝紫色细小颗粒存在于肝细胞核或胞浆内，其在肝小叶中的分布可分为３型，即弥漫型、局灶型、散在型。肝组织中ＨＣＡｇ－ＮＳ３阳性物呈棕黄色细小颗粒分布于肝细胞核或胞浆内，以单个或数个阳性细胞散布于肝小叶中。２３例ＨＣＶＲＮＡ或／和ＨＣＡｇ－ＮＳ３阳性病例以肝炎后肝硬化（ＬＣ）病例占多数（１４／２３），其次为慢性重型肝炎（ＣＳＨ）和中度慢性肝炎（ＣＡＨ）。此两种检测方法具有较高符合率（９０．４％，４７／５２），表明病毒核酸及其表达产物均存在于肝细胞内，与ＨＣＶ感染密切相关。这为ＨＣＶ感染诊断提供了直接依据，有利于研究ＨＣＶ感染中病毒复制、慢性化进程、抗病毒治疗监测及重叠感染时病毒相互关系。     

输血后丙型肝炎与抗丙型肝炎病毒（HCV）阳性献血？…

采用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５’－非编码区（５’－ＮＣＲ）和Ｃ区具有型特异性的引物建立的逆转录－聚合酶链反应方法检测了２５例丙型肝炎（ＨＣ）和２６例抗－ＨＣＶ阳性献血员的ＨＣＶ ＲＮＡ及基因型。结果２５例ＨＣ患者ＨＣＶ ＲＮＡ阳性率为１００．０％，２６例抗－ＨＣＶ阳性献血员ＨＣＶ ＲＮＡ阳性率为８４．５％，（２２／２６）。２５例ＨＣ中Ｉ、Ⅱ和混合型（Ｉ＋Ⅱ、Ⅱ＋Ⅲ、Ｉ＋Ⅲ、Ｉ＋Ⅱ＋Ⅲ）分别占８．０％     

HCV感染后NS5区抗体的动态观察与检测意义

本文报道用ＨＣＶＮＳ５区两段抗原性较好的合成肽研制的ＥＬＩＳＡ试剂盒及ＵＢＩＨＣＶＮＳ５区抗体检测ＥＬＩＳＡ试剂盒观察１４例ＨＣＶ感染者ＮＳ５区抗体的动态变化，证实ＮＳ５区抗体如同ＮＳ４区抗体一样比Ｃ及ＮＳ３区抗体出现晚。ＮＳ５区抗体总体检出率近似于ＮＳ４区抗体；１．５５％的血清为单独ＮＳ５区抗体阳性；存在ＮＳ５区抗体与其他区抗体滴度有互补作用的标本等提示ＮＳ５区抗体仍有一定的诊断价值。采用ＵＢＩＮＳ５区抗体检测试剂盒发现，９５．６５％（２２／２３）ＵＢＩ试剂盒诊断为ＮＳ５区抗体阳性的标本中含ＨＣＶＲＮＡ，６／１４ＨＣｖ感染者用ＵＢＩ试剂盒检出的抗体出现在ＡＬＴ再次异常升高或剧烈升高（高于参考值的３倍以上）前后，４／１４的感染者抗体出现于ＡＬＴ首次升高前后（其余４／１４的感染者未检出抗ＮＳ５抗体），因此ＵＢＩ抗ＨＣＶＮＳ５抗体诊断试剂盒检测的抗体似与疾病的活动有关。     

输血后丙型肝炎病毒感染的前瞻性研究

对６４例受血者进行了半年前瞻性调查，发生输血后丙型肝炎（ＰＴ－ＨＣ）８例，亚临床（ＰＴ－ＨＣ）１例，丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）隐性感染３例，ＨＣＶ总感染率为１８７５％，丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）首次异常时间为输血后２８～９１（５１９±２０９）天；抗－ＨＣＶ首次阳转为输血后２３～７６（４２４±１５９）天。发生巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染２例，病原待定的非乙、非丙ＡＬＴ异常者５例。     

聚合酶链反应鉴定丙型肝炎病毒母婴传播的状态及其意义

采用多种方法，动态检测了１１例丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染的孕妇所生的婴儿血抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ。发现用合成肽酶联免疫吸附试验（ｓｐＥＬＩＳＡ）检测婴儿抗－ＨＣＶ阳性率（２３．５２％）显著低于第二代重组抗原ＥＬＩＳＡ（２ｎｄＥＬＩＳＡ）（４１．１８％）（Ｐ＜０．０５）；用２ｎｄＥＬＩＳＡ检测，６例婴儿脐血和静脉血抗－ＨＣＶ阳性，５例持续１～５月阴转，１例阳性持续１３个月。经重组免疫印迹试验（ＲＩＢＡ）鉴定，４例阳性，２例可疑阳性。用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＣＶＲＮＡ，５例阳性，３例于生后１～６个月自然阴转，２例持续阳性分别达９个月和１３个月。提示检测抗－ＨＣＶ判断ＨＣＶ母婴传播的状态受到婴儿抗－ＨＣＶ产生水平低下、母体抗－ＨＣＶ的被动输入和不同检测方法的影响，用ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ是判断母婴传播更可靠的指标。     

从基因分型看血液透析及肾移植患者丙型肝炎病毒感染状况

采用国产和美国Ｏｒｔｈｏ公司第２代抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）试剂对１００例维持性血透及肾移植患者进行血清丙型肝炎病毒抗体（抗－ＨＣＶ）对比检测。阳性标本用聚合酶键反应（ＰＣＲ）法检测ＨＣＶＲＮＡ并采用型特异的ＨＣＶ亚基因探针对其非结构蛋白ＮＳＳ区扩增产物进行了杂交基因分型。结果表明，这组病人中抗－ＨＣＶ阳性率为４１％，肾移植术后再透析者达５６．５２％，且与透析时间、输血次数、受血量成正相关；国产抗－ＨＣＶ试剂同美国Ｏｒｔｈｏ公司试剂比较阳性符合率达９１．４３％；抗－ＨＣＶ阳性患者中有３１．４３％（１１／３２）血清ＨＣＶＲＮＡＮＳ５阳性；透析患者中，ＨＣＶ基因型各型均有，以混合型为主，占６３．６４％。     

丙型肝炎患者肾小球病变的观察

为了明确丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染与肾脏疾病的关系，采用免疫组化技术和抗－ＨＣＶＮＳ３和抗－ＨＣＶＮＳ５单克隆抗体，检测了２１例丙肝患尸解肾组织中的ＨＣＡｇ，结果１３例阳性（６１．９％），其中１１例为膜增殖性肾炎（ＭＰＧＮ），１例为系膜增殖性肾炎（ＭｓＰＧＮ），１例肾组织大致正常。８例ＨＣＡｇ检测阴性，其中膜性肾病（ＭＮ）１例，膜增殖性肾炎２例，毛细血管内增殖性肾炎１例，余４例肾组织未见明显异常。与乙型肝炎对照组（３３．０％）相比，丙肝患者肾脏病变更为多见，形态多样，以ＭＰＧＮ为主。同时对丙肝患者有肾脏病变者的临床资料进行了分析，病人可表现为高血压，蛋白尿，血尿及早期血清尿素氮（ＢＵＮ）增高，因此认为同乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染后相同，也存在着丙肝相关性肾炎     

丙型肝炎病毒（HCV）E2／NS1相对保守区多肽抗原在检？…

目的 研究（ＨＣＶ）Ｅ２／ＮＳ１相对保守区多肽抗原在检测抗－ＨＣＶ中的意义。方法 利用ＨＣＶＥ２／ＮＳ１基因编码的膜区糖蛋白合成Ｅ２／ＮＳ１相对保守区多肽抗原,建立酶免疫试验（ＥＩＡ）,对９６例ＨＣＶ感染者及４０例正常献血员进行ＨＣＶＥ２／ＮＳ１抗体的检测,同时平行检测ＨＣＶＲＮＡ肝炎为１３．５５％,慢性丙型肝炎为２５．０４％,无症状感染者为２．０８％;正常献血员中发现３例抗ＨＣＶＥ２／ＮＳ１抗体     

初次及再次感染HCV后不同功能区抗体的研究

１４例初次ＨＣＶ感染者及１１例再次ＨＣＶ感染者系列血清系在无法检测ＨＣＶ时留存的２８９位手术受血者系列血清中筛选获得。系列血清包括受血前、受血后不同时期收集的血清。回顾性地研究其不同功能区抗体出现的动态变化，抗Ｃ与抗ＮＳ３抗体有早期诊断价值。抗ＮＳ３、抗Ｃ、抗ＮＳ５及抗ＮＳ４抗体在ＨＣＶ感染后系列血清中检出率分别为８４．７６％、７９．２７％、７２．５４％和６８．３９％。感染过程中各区抗体可以全部出现、部分出现或单独出现抗Ｃ、抗ＮＳ３及抗ＮＳ５抗体，未发现单独含抗Ｅ、抗ＮＳ１及抗ＮＳ４区抗体的血清。抗Ｅ、抗ＮＳ１及抗ＮＳ４抗体消失较早。研究表明：以ＨＣＶＣ区、ＮＳ３区及ＮＳ５区编码的优势抗原包被的ＥＬＩＳＡ抗体诊断试剂盒将提高ＨＣＶ的诊断。     

丙型肝炎患者血清抗丙型肝炎病毒抗体IgM及HCVRNA检测结果的比较

用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）对住院病人抗丙型肝炎病毒抗体（抗－ＨＣＶ）阳性血清标本进行抗－ＨＣＶＩｇＭ的检测，并与ＨＣＶＲＮＡ检测结果比较。结果表明，ＨＣＶＲＮＡ阳性、抗－ＨＣＶ阳性，ＨＣＶＲＮＡ阳性、抗－ＨＣＶ阴性及ＨＣＶＲＮＡ阴性、抗－ＨＣＶ阳性三种类型中均有抗－ＨＣＶＩｇＭ阳性者。结果还表明ＨＣＶＲＮＡ阳性病例的抗－ＨＣＶＩｇＭ阳性率明显高于ＨＣＶＲＮＡ阴性的病例（Ｐ＜０．０５），在临床诊断上ＨＣＶＲＮＡ阳性与阴性病例的肝病大多数为急性肝炎（ＡＨ）和慢性活动性肝炎（ＣＡＨ），ＨＣＶＲＮＡ阳性与阴性比较，各类肝病的病例数无明显差别。     

多重引物聚合酶链反应扩增丙型肝炎病毒基因及基 …

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的５’－非编码区（５’－ＮＣＲ）、Ｃ及ＮＳ４基因区的３对引物分别及同时扩增，检测８０例抗－ＨＣＶ阳性患者的血清ＨＣＶ ＲＮＡ，并进行了ＨＣＶ基因分型研究。各不同引物所介导的ＰＣＲ检出ＨＣＶ ＲＮＡ的结果为：５’－ＮＣＲ基因区６０％（４８／８０），Ｃ基因区３７％（３０／８０），ＮＳ４基因区３０％（２４／８０）。以上３对引物同时扩增仅４２％（３４／     

散发性丙型肝炎患者病毒学和临床特点

调查了１６例散发性丙型肝炎（ＳＨＣ）患者丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染原因：３例为外科医生；３例的配偶为慢性输血后丙型肝炎（ＰＴＨＣ）患者；５例有拔牙、注射或接种史；５例感染途径不明。ＳＨＣ患者的病毒血症水平明显低于ＰＴＨＣ患者（血清稀释倍数前者为１０～１００倍；后者为１００～１００００倍，Ｐ＜０．０１）。仅１例ＳＨＣ患者抗－ＨＣＶ阳性。与ＰＴＨＣ患者相比，ＳＨＣ患者肝脏损害程度较轻，转氨酶水平较低，且多无自觉症状。     

丙型肝炎病毒核心抗原C33的测定

目的探索丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｃ３３抗原在正常人群及各类临床病人血清及肝组织中分布状况。方法用人工合成的ＨＣＶ核心抗原Ｃ３３肽（含３３个氨基酸）与小鼠血清白蛋白,经异型双功能交联剂ＳＰＤＰ连接后免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠,制成２株Ｃ３３肽单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,分别用作包被抗体和酶标抗体,建立检测血清中Ｃ３３肽抗原的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）,共检测了１２３６例各类病人。并用免疫荧光及固相免疫酶法检测肝活检组织中的ＨＣＶＣ３３肽抗原。结果急性丙型肝炎（ＨＣ）患者,Ｃ３３肽的阳性检出率为１４．０％（６／４３）;仅抗－ＨＣＶＩｇＧ阳性患者Ｃ３３肽的阳性检出率为８．８％（３５／３９６）;慢性丙型肝炎患者为６．５％（４／６２）;白血病患者为４．３％（１／２３）;血透病人为３．３％（１９／５７６）;普通住院病人为１．５％（２／１３６）;正常供血员为１．４％（６／４３８）。肝活检免疫荧光、固相免疫酶检测显示ＨＣＶＣ３３肽在细胞核、细胞质、细胞膜上均有表达,在胞质中或集中于全胞质一侧或弥散分布于胞质中。结论ＨＣＶＣ３３抗原测定,可以作为ＨＣＶ感染的标志物之一。     

庚型肝炎病毒C型（GBV—C）多肽的抗原性研究及应用

应用Ｇｏｌｄｋｅｙ软件分析ＧＢＶ－Ｃ的氨基酸序列，采用标准的Ｍｅｒｉｆｉｅｌｄ固相法和多中心同步多肽合成技术研究ＧＢＶ－Ｃ多肽抗原，应用抗原反应性好的ＮＳ３区Ｐ１和Ｐ１１多肽以及ＮＳ５区的Ｐ２２多肽研制抗ＧＢＶ－Ｃ检测试剂。９９例ＧＢＶ－ＣＲＮＡ阳性血清的抗ＧＢＶ－Ｃ阳性率为８１．８２％（８１／９９），１０００例单采浆献血员血样的抗ＧＢＶ－Ｃ阳性率为５．１０％（５１／１０００），抗ＧＢＶ－Ｃ阳性血样中的ＧＢＶ－ＣＲＮＡ阳性率为７０．５９％（３６／５１）。结果表明，Ｐ１，Ｐ１１和Ｐ２２可以用于抗ＧＢＶ－Ｃ检测试剂的开发。应尽快对献血员，尤其是献浆员进行抗ＧＢＶ－Ｃ的筛选。     

沈阳地区各型丙型肝炎患者丙型肝炎病毒的基因分型

目的研究沈阳地区丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型分布状况及其临床意义。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对沈阳地区８４例血清抗－ＨＣＶ及ＨＣＶＲＮＡ均阳性的各临床型丙型肝炎患者进行ＨＣＶ基因分型。结果８４例丙型肝炎中,ＨＣＶ－Ⅱ型４５例（５３．６％）,ＨＣＶ－Ⅲ型２６例（３０．９％）,Ⅱ／Ⅲ混合型１３例（１５．５％）;ＨＣＶ不同基因型在各型丙型肝炎中总体分布不一致,经统计学处理,Ｐ＜０．０５;在急性肝炎、慢性肝炎轻度、中度、重度及肝炎后肝硬化中,ＨＣＶ－Ⅱ型感染分别占５５．６％,３６．２％,７５．０％,８５．７％及８８．９％;ＨＣＶ－Ⅲ型感染分别占２２．２％,４６．８％,８．３％,０％骸１１．１％。结论沈阳地区ＨＣＶ感染以Ⅱ型为主,其次为Ⅲ型及Ⅱ／Ⅲ混合型;ＨＣＶ基因型与丙型肝炎严重程度密切相关。     

重组干扰素对慢性丙型肝炎抗病毒疗效5年随访观察

目的观察重组干扰素α－２ａ，α－２ｂ抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的近、远期疗效。方法重组干扰素α－２ａ治疗组７０例，重组干扰素α－２ｂ４６例对照组２８例，治疗后随访５年。结果治疗结束时，ＨＣＶＲＮＡ阴转率和血清ＡＬＴ复常率α－２ａ组分别为６７１４％和７０００％，α－２ｂ组分别为６９５６％和７１７３％，随访５年后，α－２ａ组ＨＣＶＲＮＡ阴转率和血清ＡＬＴ复常率分别为３５７１％和４７１４％，α－２ｂ组分别为３９１３％和５２１７％，均显著高于对照组（Ｐ＜００１和Ｐ＜００５）。基因分型以ＨＣＶⅠ组感染为主（７５８６％），干扰素对ＨＣＶⅡ组感染的疗效优于ＨＣＶⅠ组。结论重组干扰素α－２ａ与α－２ｂ均为有效的抗丙型肝炎病毒药物，慢性丙型肝炎患者干扰素治疗的早期疗效较好。ＨＣＶ基因型有预测干扰素疗效的意义     

丙型肝炎病毒非结构基因5b的变异及与干扰素治疗的关系

以聚合酶链反应直接序列分析方法测定了４例无症状慢性丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者，与９例接受干扰素治疗的慢性丙型肝炎患者血清中ＨＣＶ非结构基因５ｂ（ＮＳ５ｂ）ｃＤＮＡ的序列。发现，与已发表的Ⅱ／１ｂ型ＨＣＶ序列相比，无症状慢性ＨＣＶ感染者的ＨＣＶ在核苷酸水平的同源性高于干扰素治疗有效的慢性丙型肝炎患者（９５．６５％±２．６１％比９４．３５％±２．２９％），后者又高于干扰素治疗无效的慢性丙型肝炎患者（９２．７０％±１．９０％）。还发现在干扰素治疗后，治疗无效者血清中ＨＣＶＮＳ５ｂｃＤＮＡ序列发生明显变化，在所测定的３８０个核苷酸中有９～４８个发生碱基替换，从而导致所编码的氨基酸中有６～２０个发生突变。结果提示，ＨＣＶＮＳ５ｂ基因变异与病情及干扰素治疗有一定关系。变异较大者常出现明显的临床表现，且干扰素治疗可能趋势于失败。     

检测抗丙型肝炎病毒总抗体的双抗原夹心法的建立

以丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）结构区和非结构区基因工程表达抗原及人工合成多肽包被酶标板，用辣根过氧化物酶标记抗原，建立了检测血清中抗－ＨＣＶ总抗体的双抗原夹心法。与普遍采用的检测抗－ＨＣＶＩｇＧ的间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）比较，其灵敏度（１∶１２８）稍高于间接法（１∶６４），特异性相同，均为１００％。该法可同时检测抗－ＨＣＶ各类抗体，使检出率提高１０％。