MassARRAY基因分型技术在新生儿遗传代谢病诊断中的应用

目的探讨MassARRAY基因分型技术应用于新生儿遗传代谢病诊断的准确性、时效性及可行性。方法回顾性研究。收集2016年12月至2020年1月在浙江省新生儿筛查中心应用串联质谱筛查的疑似阳性患儿7 922例, 采用MassARRAY技术进行27种遗传代谢病的常见变异位点检测, 通过Sanger或二代测序验证并进一步寻找潜在变异。结果共1 408份样本送检MassARRAY, 307例确诊为遗传代谢病患儿, 其中高苯丙氨酸血症检出率最高, 其次为原发性肉碱缺乏症、短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症和甲基丙二酸血症。经Sanger测序验证100%(307/307)符合。287例检测为携带者, 49.1%(141/287)经Sanger测序确认为携带者, 以SLC22A5、MCCC1基因为主。50.8%(146/287)还检测到另一个等位基因变异, 以PAH、PTS和ACADS基因为主。814例未发现变异, 对其中158例复查后串联质谱特征性指标持续阳性、尿有机酸及其他生化检测等异常的样本进行二代测序, 38%(60/158)检测到2个等位基因变异。最终确诊513例遗传代谢病患者, MassARRA...     

单纯性圆锥动脉干畸形22q11.2微缺失发生率及临床表型研究

目的 探讨单纯性圆锥动脉干畸形(CTD)染色体22q11.2微缺失发生率及临床表型分析.方法 应用多重连接探针扩增法(MLPA)对77例0～10岁单纯性CTD患儿进行染色体22q11.2微缺失筛查,并对阳性样本进行荧光原位杂交(FISH)验证.采用Fisher精度检验,P＜0.05有统计学意义.结果 用MLPA对77例单纯性CTD患儿进行了22号染色体微缺失筛查,其中55例法乐四联症(TOF),4例肺动脉闭锁伴室间隔缺损(PA-VSD),8例右室双出口(DORV),10例大动脉转位(TGA).6例(7.8%)患儿存在染色体22q 11.2微缺失,其中4例为TOF,1例为PA-VSD,1例为DORV;10例TGA患儿中均未发现22q11.2缺失.结论 单纯性CTD染色体22q 11.2微缺失发生率约为7.8%.单纯性CTD患儿中,PA-VSD,DORV及TOF比TGA更易发生染色体22q11.2微缺失.应加强对单纯性CTD患儿的遗传筛查及咨询.     

ACTB基因变异致Baraitser-Winter综合征一例

1例主诉为生长迟缓、特殊面容患儿就诊于遗传代谢科,经过染色体核型分析、头颅磁共振成像及高通量测序平台等检查,诊断为Baraitser-Winter综合征。Baraitser-Winter综合征临床罕见,存在典型的面部特点与头颅核磁共振改变,高通量基因测序是确诊的重要手段。     

染色体22q11微缺失综合征的临床表现与荧光原位杂交诊断结果

目的研究22q11微缺失综合征（22q11 microdeletion syndrome,22q11 DS）的临床特征与荧光原位杂交技术（fluorescencein situhybridization,FISH）诊断结果的意义。方法评估临床表型,应用FISH技术检测外周血标本22q11区域的微缺失;对FISH结果和临床特征进行多因素Logistic回归分析。结果64例疑似患儿中FISH检测微缺失为14例,阳性率21.9%。确诊患儿广泛存在多发畸形。建立了以面容异常（x1）、先天性心脏畸形（x2）、免疫问题（x3）为变量的FISH诊断结果（y）的Logistic回归预测方程：y=-8.206＋2.324x1＋2.725x2＋1.674x3,P=exp（y）/[1＋exp（y）]。结论精确的临床评估可以初次筛选有22q11微缺失危险性的患儿,其FISH检查结果可通过Logistic回归方程进行预测。     

应用引物原位标记技术快速检测18三体综合征

目的　探索应用改良的引物原位标记技术快速检测未培养羊水细胞间期核的可能性。方法采用改良的引物原位标记 (primed in situ labeling,PRINS)技术 ,对 2 6 2份羊水细胞中 18号染色体进行分析检测。结果　在未培养羊水细胞间期核和培养细胞的中期分裂相中 ,PRINS技术均能特异性地检测 18号染色体 ,PRINS反应的成功率为 95 %。并发现两个样本为 18三体综合征。结论　引物原位标记技术是一种简便、快速、经济的染色体检测方法 ,具有较强的敏感性和特异性 ,有助于对传统细胞遗传学的分析。     

评价多重连接探针扩增法诊断染色体22q11.2微缺失结果研究

目的 对多重连接探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)诊断染色体22q11.2微缺失结果进行评价.方法 应用MLPA及荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)两种方法分别检测了32份儿童(男16例,女16例;年龄1～13岁,平均3.6±3.1岁)血样本,其中16例为染色体22q11.2微缺失患儿组(阳性对照组),16名为体检正常儿童组(阴性对照组).采用灵敏度、特异度及Kappa分析来评估结果.结果 MLPA检测32份样本中,16例阳性对照样本均有染色体22q11.2微缺失,且缺失片段长度约3-Mb;16名对照样本中未发现22号染色体缺失.FISH证实16例22q11.2微缺失患儿均存在缺失,16名对照样本不存在缺失.因此,MLPA诊断染色体22q11.2微缺失的灵敏度及特异度高.结论 MLPA是一种快速、可靠、高通量及相对经济的诊断染色体22q11.2微缺失的有效方法,弥补了FISH技术的不足,可用于临床实验室快速诊断染色体22q11.2微缺失,具有较高的临床诊断价值.

Abstract：

Objective To evaluate multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) assay detection in analysis of chromosome 22q11.2 microdeletion. Methods Between March 2008 and September 2009, thirty-two patients including 10 males and 16 females aged between years (3.6±3.1) were selected and evaluated by history, physical examination and medical records. Of these patients, sixteen patients who were previous diagnostic as 22q11.2 microdeletion were in positive control group, the other 16 healthy children were in negative control group. All the patients were detected by MLPA and fluorescence in situ hybridization (FISH) for the presence of a 22q1 1.2 microdeletion after informed consent. Diagnostic efficacy was assessed by sensitivity, specificity and Kappa analysis. Results We have applied the two assays of detection of chromosome 22q11.2 microdeletion in 32 patients. Sixteen patients in positive control group were found to have a 22q11. 2 deletion and, with the deletion size of 3-Mb. However, as expected,chromosome 22q11.2 deletion was not found in negative control group. The MLPA results were in good agreement with that by FISH. Therefore, MLPA has high sensitivity and specificity. Conclusion MLPA is a rapid, reliable, high-throughput and relatively economical alternative to FISH technology for the diagnosis of 22q11.2 microdeletion. It can provide reliable and helpful information for clinical diagnosis of 22q11.2 microdeletion syndrome.     

18号染色体短臂缺失综合征一例

患儿男，4岁，2002年12月因发现心脏杂音就诊。检查发现动脉导管未闭（patent duetus arteriosus，PDA），行PDA伞片封堵术。患儿13个月会独走，35个月会叫爸、妈，平时胃纳差，不偏食。家长诉与同龄人相比，记忆力较差，数字操作特别差。韦氏学龄前智商测量表测验，测得总智商78分，语言智商75分，操作智商85分。查体：体重12．5kg，身高94cm，面容异常，表现为圆脸，人中长，低位耳，耳廓异常，牙齿排列不整齐，     

威廉斯综合征儿童的视觉注意功能

目的 探讨威廉斯综合征(WS)儿童的视觉注意功能.方法 2004年7月至2007年1月共135例儿童参加了测试.WS组22例,平均12(6～16)岁,其中男13例,女9例;唐氏综合征(Ds)组25例,平均年龄12(7～16)岁,男21例,女4例;同年龄对照组45名,平均年龄12(6～16)岁,男27名,女18名;同智龄对照组43名,平均年龄4(2～8)岁,男23名,女20名.采用皮勃迪图片词汇测试(PPVT)进行智龄匹配.使用一套视觉搜索任务测试4组儿童的选择性注意、转移性注意和持续性注意功能并进行比较.结果 (1)单目标搜索任务中,没有与目标相似的干扰因素存在时,WS组儿童的正确反应率比同年龄对照组儿童低(71%±25% vs 87%±14%,P=0.001),平均反应时间长(5 s vs 3 s,P=0.000),平均反应距离长(相对单位:25 vs 18,P=0.000),与DS组儿童比较,WS组儿童平均反应时间较长(5 s vs 3 s,P=0.022),但是与同智龄对照组儿童的表现相当;错误类型分析发现仅形状错误发生率比同年龄对照组儿童高(15%vs 0,P=0.000).在增加与目标刺激颜色相同、形状相近的干扰刺激后,WS组儿童的表现比同年龄对照组及同智龄对照组都差,表现为正确反应率低(39%±20%vs 77%±23%vs 66%±23%,均P=0.000),平均反应时间长(13 s vs 3 s vs5 s,均P=0.000),搜索距离长(41 vs 20 vs 27,P=0.000、P=0.004),形状错误发生率比同年龄对照组及同智龄对照组都高(14% vs 0 vs 7%,P=0.000、P=0.017),但是与DS组儿童差异无统计学意义.(2)双目标交替搜索的转移性任务显示WS组儿童的转移性注意正确反应率较同年龄对照组低,平均反应时间长,搜索距离长(52%±28%、11 s、54±27 vs 78%±22%、4 s、31±13,均P=0.000),各指标与DS组儿童及同智龄对照组儿童差异均无统计学意义.WS组转移错误发生率比同年龄对照组和同智龄对照组儿童高(13%、0、4%,P=0.000、P=0.004).(3)警觉任务发现WS组儿童持续性注意的正确反应率较同年龄对照组儿童低(52%±25%vs 80%±21%,P=0.000),平均反应时间长(4 s±1 s vs 3 s±1 s,P=0.000),错误点击数高(8 vs 3,P=0.000),但和DS组比较差异无统计学意义.结论 WS组儿童存在视觉注意功能缺陷.     

串联质谱法检测结果阴性的甲基丙二酸血症合并同型半胱氨酸血症cblX型患儿一例

一例甲基丙二酸血症合并同型半胱氨酸血症cblX型患儿在婴儿早期出现局灶性癫痫发作和癫痫性痉挛发作,多种抗癫痫药物治疗效果不佳,患儿于4月龄时死亡。新生儿筛查和急性发作期串联质谱法检测均未见明显异常,超高效液相色谱-串联质谱法检测提示血甲基丙二酸和同型半胱氨酸增高,全外显子组测序显示HCFC1基因存在c.202C>G（p.Q68E）半合子突变,遗传自其母亲。     

导致脑病及心肌病的原发性肉碱吸收障碍二例

例1 女,1月22天,第1胎.因反复抽搐20 d于2009年5月21日入院,出生后1月反复抽搐,表现为意识丧失、双眼凝视,持续10 s左右,共发作6次.有出生前缺氧史,否认家族及遗传病史.查体:体重5 kg,神清,精神可,心肺及腹部无异常发现,神经系统检查阴性.辅助检查:脑电图及头颅核磁共振正常.实验室检查血糖1.9 mmol/L,血红蛋白97 g/L,血乳酸2.5 mmol/L(正常参考值:0.5～1,6 mmol/L).