荷人卵巢癌严重联合免疫缺陷鼠腹腔移植模型的建立

目的 :建立荷人卵巢癌细胞株 SKOV3严重联合免疫缺陷小鼠 (SCID)动物模型。方法 :SCID鼠腹腔注射人 SKOV3卵巢癌细胞 1× 10 7个 /只 ,饲养在无特定病原体环境中 ,观察其生物学特性。结果 :实验组 3只 SCID小鼠腹腔内均见肿瘤生长 ,并形成以横膈、肠系膜、肝周、腹膜为主的转移灶 ,其中 1只肺部有镜下转移灶。移植后肿瘤细胞在形态、生长、分泌 CA12 5功能方面均与原细胞株保持一致。结论 :建立的荷人 SKOV3卵巢癌 SCID鼠腹腔移植模型能较好地模拟人卵巢癌腹腔播散的生物学特征。     

人白细胞介素7基因克隆及其真核表达载体的构建

目的：构建人白细胞介素7（hIL-7）的真核表达载体。方法：从人脾脏组织的总RNA中，用RT－PCR方法扩增出编码成熟hIL-7的cDNA，将其克隆于pMD18-T质粒中，并进行序列测定。再将hIL-7cDNA以正义及反义插入真核、原核双重表达载体pBK-CMV质粒，转化至大肠杆菌DH5α。最后将表达的lacz-hIL-7重组蛋白行SDS－PAGE电泳，并作考马斯亮蓝染色分析，western blot鉴定。结果：hIL-7序列测定结果与预期一致。pBK-CMV-hIL-7（正义插入）的无隆表达重组蛋白，western blot证实此蛋白为IL－7。结论：成功构建了hIL-7的真核表达载体，为进一步研究hIL-7的抗肿瘤作用创造了条件。     

卵巢癌细胞株冻融抗原负载的树突状细胞诱导CTL抗卵巢癌免疫应答的体外研究

目的研究卵巢癌冻融抗原负载的树突状细胞(dendriticcells,DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)体外杀伤卵巢癌细胞的细胞毒性效应。方法利用免疫磁珠分离法(MACS)分离纯化脐血CD34 细胞并在体外诱导分化为DC,用反复冻融法从卵巢癌细胞系SKOV3中提取的可溶性相关抗原负载DC。流式细胞学检测负载抗原后DC表面各种分化相关抗原的表达,ELISA法检测DC上清中IL12的表达,混合淋巴细胞反应(MLR)测定DC体外刺激T细胞增殖的能力,MTT法检测抗原负载DC激活的抗原特异性CTL对卵巢癌细胞的杀伤作用。结果与未经抗原负载的DC相比,经卵巢癌抗原负载的DC不仅能更高地表达各种DC分化相关抗原CD1α(73.35%±2.94%vs34.1%±2.35%)、CD83(73.9%±8.46%vs54.68%±3.26%)、CD80(91.95%±2.48%vs52.53%±3.18%)、HLADR(70.05%±2.35%vs48.7%±2.07%)以及CD54(88.9%±5.52%vs71.45%±2.29%),同时具有更强的刺激同种异体T淋巴细胞增殖和IL12分泌的能力(P均<0.05)。此外,卵巢癌细胞SKOV3冻融抗原负载DC激活的CTL在体外对SKOV3的杀伤率为77.35%,显著高于未经抗原负载的DC(P=0.0001)。结论经卵巢癌细胞冻融抗原负载DC激活的CTL在体外具有更强的增殖能力和杀伤卵巢癌细胞的作用。     

IL—2基因转染对人卵巢癌细胞增殖、凋亡和MHC—II的影响

目的：研究白介素－2（IL－2）基因转梁对人卵巢癌细胞增殖,凋亡和主要组织相容性复合－II（MHC－II）的影响,方法：将IL－2基因质粒DNA导入人卵巢癌细胞系（3AO）,用逆转录PCR（RT－PCR）观察转梁后3AO细胞IL－2mRNA表达,细胞免疫化学SP法观察细胞增残和MHC－II表达,原位末端标志法观察凋亡,结果：显示3AO细胞转梁60h后可表达IL－2mRNA,增残细胞核抗原表达减弱,MHC－II抗原表达增强,未观察到凋亡改变.结论：IL－2基因导入3AO细胞可通过抑制瘤细胞增残,增加MHC－II抗原表达而发挥其抗肿瘤作用。     

乳头瘤病毒分类进展

乳头瘤病毒广泛存在于自然界中，随着大量乳头瘤病毒的发现、测序，以及历次种系分类的进行，使乳头瘤病毒的分类逐渐自然化、系统化，乳头瘤病毒的分型标准也从1978年的杂交分型标准更新成以核酸序列同源性为基础的分型标准。     

肿瘤细胞死亡形式对巨噬细胞功能的影响及其机制

肿瘤的非手术治疗手段多以诱导肿瘤细胞死亡作为治疗终点。但越来越多的研究表明，肿瘤细胞不同的死亡形式对于免疫细胞，特别是巨噬细胞功能有着完全不同的影响，凋亡的肿瘤细胞抑制巨噬细胞的抗肿瘤作用，而坏死的肿瘤细胞则完全相反。现综述这一现象及其可能的机制。     

11q22-q25区候选抑癌基因OPCML、POU2F3、CUL-5启动子CpG岛甲基化与子宫颈癌的发生

目的 研究11q22-q25区候选抑癌基因OPCML、POU2F3、CUL-5 启动子CpG岛甲基化和子宫颈癌的发生.方法 以甲基化特异性PCR（MSP）检测子宫颈正常组织和癌组织中OPCML、POU2F3、CUL-5 启动子CpG岛甲基化.结果 16例子宫颈正常组织中均未检测到OPCML、POU2F3、CUL-5启动子CpG岛甲基化;63.9%（23/36）子宫颈癌组织中存在OPCML甲基化,但未检测到POU2F3、CUL-5甲基化.结论 OPCML在子宫颈癌中存在高度的启动子CpG岛甲基化,其可能为子宫颈癌相关候选抑癌基因.     

卵巢上皮癌IL-7mRNA表达的研究

目的 :研究卵巢上皮癌组织及细胞株中IL 7mRNA的表达 ,探讨IL 7是否参与了卵巢癌的局部免疫调节 ,为IL 7用于卵巢癌基因治疗提供实验基础。方法 :以 6例正常卵巢组织为对照 ,采用RT PCR方法测定 4 2例卵巢上皮癌组织及 2株卵巢癌细胞株SKOV3和 3AOIL 7mRNA的表达。结果 :6例正常卵巢组织未能检测到IL 7mRNA的表达 ,4 2例卵巢上皮癌组织只有 2例表达IL 7mRNA ,表达率为 4 .8% ,SKOV3和 3AO均不表达IL 7mRNA。结论 :卵巢上皮癌组织IL 7mRNA表达率低 ,推测IL 7未能在卵巢癌癌灶和腹腔局部发挥重要抗肿瘤作用。     

人乳头瘤病毒基因型检测方法的研究进展

人乳头瘤病毒(HPV)的不同基因型有不同的致病性,基因型的检测和分型对了解病情、指导治疗和判断预后有重要价值。第2代杂交捕获法(HCⅡ)是目前惟一通过FDA批准的可在临床使用的检测方法,但由于其存在不能分型以及其他不足之处而要求发展更好的分型检测方法。现就人乳头瘤病毒的基因型分型方法的研究进展情况作一综述。     

宫颈癌人乳头瘤病毒疫苗研究现状

人乳头瘤病毒 (HPV)感染与宫颈癌的发生密切相关 ,HPV感染的防治已成为研究热点。目前各种HPV试验疫苗已建立了动物模型和 (或 )已进入临床试验。本文就当前HPV预防性和治疗性疫苗的研究进展及趋势阐述如下。1　预防性疫苗1 1　HPV病毒样颗粒　利用HPV晚期编码基因L1与L2表达于真核细胞中 ,可自行装配成形态与野生型病毒颗粒极为相似的病毒样颗粒 (VLP) ,具有良好的抗原性及免疫原性 ,可诱发高滴度抗体产生 ,是目前最理想的预防性疫苗。理想的预防性疫苗必须具备以下特点 :①必须具有安全、稳定、费用合理并可在粘膜表面产生有效…