let-7a-5p在急性呼吸窘迫综合征中作用

目的探讨let-7a-5p靶向调节转化生长因子-β受体1(transforming growth factor-βreceptor 1,TGF-βR1)在急性呼吸窘迫综合征中作用及机制。方法 NIH3T3细胞经转染let-7a-5p mimics或let-7a-5p inhibitor等后,分为let-7a-5p增强组、let-7a-5p增强对照组、let-7a-5p抑制组、let-7a-5p抑制对照组和阴性对照组,检测各组细胞中let-7a-5p的相对表达量,转染成功后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中TGF-βR1、Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢmRNA相对表达量,采用Western blot法检测各组细胞中TGF-βR1、Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢ蛋白相对表达量。将HEK293细胞分为实验组和对照组,分别转染let-7a-5p mimic和阴性对照,采用双荧光素酶报告基因检测系统测定2组相对荧光素酶活性的荧光值。结果转染后let-7a-5p增强组let-7a-5p相对表达量(191 215.66±115 55.57)高于阴性对照组(251.85±85.12)和let-7a-5p抑制组let-7a-5p(1.14±0.22)(P0.05),阴性对照组高于let-7a-5p抑制组(P0.05);let-7a-5p增强组细胞中Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢmRNA相对表达量低于阴性对照组和let-7a-5p抑制组(P0.05),阴性对照组低于let-7a-5p抑制组(P0.05);let-7a-5p增强对照组和let-7a-5p抑制对照组Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢmRNA相对表达量与阴性对照组比较差异无统计学意义(P0.05),5组细胞中TGF-βR1mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P0.05);let-7a-5p增强组细胞中TGF-βR1、Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢ蛋白表达灰度值低于阴性对照组和let-7a-5p抑制组(P0.05),阴性对照组低于let-7a-5p抑制组(P0.05),let-7a-5p增强对照组和let-7a-5p抑制对照组细胞中TGF-βR1、Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢ蛋白表达灰度值与阴性对照组比较差异无统计学意义(P0.05);双荧光素酶报告基因检测结果显示,对照组细胞相对荧光素酶活性(1.00±0.00)高于实验组(0.34±0.13)(P0.05)。结论 let-7a-5可通过抑制TGF-βR1蛋白翻译而减轻肺纤维化,进而延缓急性呼吸窘迫综合征进程。     

体外膜肺氧合在儿童脓毒症休克中的临床应用

［摘要］　脓毒症休克目前仍是全球范围内导致儿童死亡的重要原因,脓毒症休克可导致低血压和低灌注,导致氧输送（DO₂）减少,从而出现氧供/氧耗失衡。体外膜肺氧合（ECMO）可以增加DO₂,增加氧供,所以ECMO有救治脓毒症休克的理论基础。ECMO救治脓毒症休克的疗效欠佳,主要与ECMO启动时机、ECMO中心的经验、是否为中央插管和ECMO高流量等相关。该文对ECMO在儿童脓毒症休克中的临床应用进行综述。     

静脉注射丙种球蛋白无反应不完全川崎病并巨大冠状动脉瘤一例

患儿,男,1岁,以“发热12 d”入院。12 d前患儿无诱因出现发热,体温最高38.5℃,当地医院给予退热药物治疗（具体不详）无效,7d前出现口唇皲裂,肛周脱皮,当地医院彩超示：右侧冠状动脉远端3.4 mm;按“川崎病”给予丙种球蛋白2 g／kg治疗,仍发热,热峰达39.2℃,3 d前出现咳嗽,为求进一步诊治转我院,门诊以“川崎病？肺炎？”收入我科。病程中无皮疹,无浅表淋巴结肿大。既往史、个人史、家族史无特殊。入院查体：T 37.8℃,P 134次／min,R 58次／min,体重10 kg。神志清楚,全身皮肤潮红,浅表淋巴结无肿大。双眼球结膜无充血,口唇红,口腔黏膜无充血。心肺腹部神经系统检查无异常。肛周脱皮。辅助检查：血常规：WBC 26.29×109／L,N 51.80％,L 31.50％,Hb 81 g／L,PLT 527×109／L,CRP 46.31 mg／L;肝功能：ALT 86 U／L,谷草转氨酶73 U／L,总蛋白64.8 g／L,白蛋白22.5 g／L,PT 14.30 s,APTT 89.40 s,凝血酶原时间19.00 s,Fib 2.50 g／L,FDP 5.02μg／ml,D-二聚体0.6 mg／L。ESR 62 mm／h。免疫全套、G 试验、LPS 正常。T细胞亚群：CD3＋40.27％［（69.8±7.06）％］, CD4＋25.05％［（37.65±6.18）％］, CD8＋11.19％［（28.50±6.23）％］,CD4＋／CD8＋2.24（1.53±0.59）。心脏彩超示：右冠状动脉主干内径约6.2~8.4 mm,RCA／AO＝0.49,左冠状动脉主干内径约4.8 mm,前降支内径约4.8 mm, LCA／AO＝0.28。心包腔内可探及液性暗区。彩超提示：左、右冠状动脉增宽;心包少量积液。入院后考虑静脉注射丙种球蛋白无反应不完全川崎病,再次给予免疫球蛋白2 g／kg、双嘧达莫片3 mg／（ kg·d）、阿司匹林片40 mg／（ kg·d）,患儿体温降至38.2℃。入院第2天,患儿仍有发热,体温最高37.9℃,加用口服中成药治疗。查体：球结膜稍充血,口唇皲裂,肛周有脱皮。浅表淋巴结无肿大。右手拇指、食指及左手拇指指甲与指腹交界处膜状脱皮。入院第6天,双手十指指甲与指腹交界处大片膜状脱皮,结膜充血症状消失,“阿斯匹林片”减量为5 mg／（ kg·d）。入院第11天,体温波动于36.0~37.6℃之间,肛周皮肤稍红,已无脱皮。血沉20 mm／h;心脏彩超：左侧冠状动脉内径5.0 mm,前降支内径4.7 mm,右侧冠状动脉内径6.2~8.4 mm（巨大冠状动脉瘤）。入院第17天,体温正常,浅表淋巴结未触及肿大。口唇无皲裂。咽部黏膜无充血,肛周皮肤稍红,已无脱皮。双手脱皮完全。住院27 d出院,继续口服双嘧达莫及小剂量阿司匹林。1年后随访心脏彩超：左侧冠状动脉开口处内径2.5 mm,前降支内径2.2 mm,主干内径6.5 mm,局部呈瘤样扩张,最宽处约10 mm,右侧冠状动脉开口处内径2.7 mm,主干内径5.7 mm,局部呈瘤样扩张,最宽处约15 mm。血常规血小板正常,CRP、ESR正常。     

缺氧再灌注斑马鱼胚胎脑部细胞凋亡及c-fos基因的表达

背景：国外已经有学者使用斑马鱼胚胎开始进行缺氧再灌注的研究,但还没有关于c-fos基因在斑马鱼脑缺氧再灌注过程中的表达及其作用机制的报道。 目的：观察缺氧再灌注后斑马鱼胚胎脑部细胞凋亡及脑组织中c-fos基因的表达情况。 方法：取48 hpf的斑马鱼胚胎进行缺氧实验,模拟新生儿缺氧再灌注损伤环境,通过向水中通入99.999%高纯氮气制造缺氧环境,分别经过6,12,24 h的缺氧处理后,在正常氧体积分数下进行6 h恢复。对照组为正常通气组(溶解氧浓度在7.0 mg/L左右)。采用吖啶橙染色方法,观察不同缺氧时间对斑马鱼神经细胞凋亡的影响,同时采用实时荧光定量核酸扩增检测系统(qPCR),对c-fos基因表达情况进行定量分析,比较缺氧再灌注前后c-fos基因表达水平的变化。 结果与结论：对照组脑部能检测到微量细胞凋亡,c-fos基因呈低水平表达;实验组经过6,12,24 h缺氧后,脑部凋亡细胞逐渐增多,缺氧24 h组凋亡细胞增幅最大(P < 0. 05),c-fos基因表达有不同程度升高(P < 0.05),尤其是缺氧6 h后,该基因的表达上调幅度最高。结果表明缺氧会导致斑马鱼脑细胞内c-fos基因表达上调,可能是导致缺氧后期脑细胞凋亡激增的机制之一。     

安宫牛黄丸对小儿严重脓毒症体外膜肺氧合脑损伤的脑保护作用

目的 探讨安宫牛黄丸对小儿肺炎合并严重脓毒症体外膜肺氧合(ECMO)支持下的生化指标、危重程度、免疫指标及脑部并发症的作用。方法 选择2017年2月1日—2020年4月30日河南省人民医院儿童重症监护病房(PICU)收住20例肺炎合并严重脓毒症需ECMO支持并脑部并发症患儿,通过信封编码法随机分为Ⅱ组和Ⅲ组,每组10例。同时收住10例小儿肺炎合并一般脓毒症为Ⅰ组,Ⅰ组给予常规治疗。Ⅱ、Ⅲ组均给予重症常规干预,Ⅲ组患儿入组初始即同时给予鼻饲安宫牛黄丸10天。观察外周血生化指标及危重程度,流式细胞法分析外周血中性粒细胞和巨噬细胞各种亚群、CD4⁺、CD8⁺T细胞的变化;ELISA、RT-PCR和ELISPOT检测外周血免疫因子和适应性免疫应答的变化。结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组和Ⅲ组C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、碱剩余(BE)绝对值、乳酸(Lac)、平均住院天数均升高(P<0.01),氧分压/氧浓度(PF值)降低(P<0.01),危重评分降低(P<0.01);外周血CD63⁺单核细胞比例、CD4     

microRNA-646在脂多糖处理后的A549细胞中的表达及功能分析

目的 检测microRNA-646(miR-646)在不同浓度脂多糖处理后的A549细胞中表达量的变化,并探讨其可能机制.方法 实验分为对照组及实验组,对照组以RPMI-1640培养液处理A549细胞24 h,实验组分别以5、10、15 mg/L的脂多糖处理A549细胞24 h.通过免疫细胞化学染色、Western blot法检测各组细胞中的肺表面活性蛋白A(SP-A)、肺表面活性蛋白C(SP-C)的表达量.实时荧光定量PCR法检测各组细胞中miR-646的表达量.结果 实验组不同浓度脂多糖处理细胞的SP-A的表达量较对照组均下降,差异具有统计学意义(P均＜0.05),且SP-A的下降呈药物浓度依赖性；实验组不同浓度脂多糖处理细胞的SP-C的表达量较对照组均下降,差异具有统计学意义(P均＜0.05),其中10 mg/L脂多糖处理组的SP-C表达量最低.miR-646在对照组的相对表达量为0.9597±0.0200,5 mg/L脂多糖处理组的相对表达量为1.6319±0.1325,10 mg/L脂多糖处理组的相对表达量为2.4762±0.1380,15 mg/L脂多糖处理组的相对表达量为1.6642±0.0938,实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01).结论 miR-646可能通过抑制SP-C的翻译,在急性呼吸窘迫综合征过程中发挥生物学功能.     

miRNA-24-3P靶向调节SP1对RAW264.7细胞功能的影响

目的 探讨miRNA-24-3P(miR-24-3P)在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)过程中的作用机制.方法 在RAW264.7细胞中分别转染miR-24-3P mimics、miR-24-3P inhibitor及各自阴性对照,检测各组细胞中miR-24-3P的相对表达水平,检测各组细胞中肿瘤坏死因子-a(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、SP1、核因子-κB(NF-κB)的相对表达水平,并通过双荧光素酶报告基因检测系统验证miR-24-3P对SP1的靶向作用.结果 TNF-α mRNA、IL-6 mRNA在各组细胞中的表达水平差异有统计学意义(P＜0.05).SP1 mRNA、NF-κBmRNA在各组细胞中的相对表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).SP1在各组细胞中的表达水平差异有统计学意义(P＜0.05).NF-κB在各组细胞中的相对表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).双荧光素酶报告基因分析表明,共同转入miR-24-3P与SP1野生型会显著抑制HEK293细胞中的荧光酶表达(P＜0.05).结论 miR-24-3P可通过影响SPI基因的翻译进而影响炎性介质的释放,在ARDS过程中发挥作用.     

儿科体外膜肺氧合期间院内感染防控

体外膜肺氧合（ECMO）是一种应用于呼吸衰竭和循环衰竭重症患儿的有创的、挽救性的生命支持技术。ECMO期间院内感染是ECMO的严重并发症之一,其发生率为16.6%~22.1%,研究发现ECMO支持时间是院内感染的独立危险因素,院内感染对ECMO患者预后和病死率的影响尚不确定。凝固酶阴性葡萄球菌、念珠菌、肠杆菌是ECMO期间院内感染的常见致病菌,预防性使用抗菌药物是常见做法。ECMO期间抗菌药物的药代动力学发生变化,要根据药物浓度测定结果调整其剂量。     

1例基于治疗药物监测干预伏立康唑药物相互作用分析

伏立康唑是目前治疗侵袭性曲霉菌病的一线用药，该药既是细胞色素P450（cytochrome P450 proteins，CYP）2C9、2C19、3A4的底物也是其抑制剂，临床上与许多药物存在相互作用；而且已有大量研究表明CYP2C19基因多态性、性别、年龄等因素都会显著影响伏立康唑的血药浓度，因此临床使用伏立康唑需要进行治疗药物监测（therapeutic drug monitoring，TDM）。本文通过对1例曲霉菌中枢感染患儿应用伏立康唑的监测与干预，探讨临床药师基于治疗药物监测在识别药物相互作用中发挥的作用。