叶酸缺乏对斑马鱼胚胎造血系统影响的初步研究

目的观察叶酸缺乏对斑马鱼胚胎造血干细胞发育的干扰作用以及对胚胎造血区凋亡的影响,初步探讨叶酸缺乏导致血液生成异常的机制。方法将二氢叶酸还原酶基因(DHFR)功能阻断构建叶酸缺乏斑马鱼模型,分别用二氢叶酸还原酶抑制剂甲氨蝶呤(MTX)以及DHFR表达阻抑技术处理斑马鱼胚胎,造成胚胎体内叶酸缺乏的模式。在显微镜下观察胚胎发育情况,用胚胎固兰染色观察斑马鱼胚胎血细胞生成量,并用原位杂交和Real-timePCR方法检测血细胞分化和生成密切相关基因FLK-1、GATA1和GATA2的表达情况,利用TUNEL法检测斑马鱼胚胎造血区的凋亡状况。结果与各对照组相比,叶酸缺乏组斑马鱼胚胎的造血区形态学发育异常,血细胞数量明显减少,FLK-1、GATA1和GATA2的表达显著下降,胚胎造血区的凋亡增加。结论叶酸缺乏干扰了血细胞的生成,叶酸缺乏组胚胎FLK-1、GATA1和GATA2的表达降低和造血区的凋亡增加与胚胎血液系统发育异常相关。     

清热消痤汤配合挑治放血拔罐治疗痤疮60例总结

目的:观察清热消痤汤配合挑治放血拔罐疗法治疗痤疮的临床疗效,探讨睾酮(T)水平与痤疮发病之间的相关性。方法:将120例门诊痤疮患者按随机数字表法分为2组各60例,治疗组采用清热消痤汤配合挑治放血拔罐治疗,对照组单用清热消痤汤治疗,观察2组临床疗效以及T值。结果:总有效率治疗组为93. 33%,对照组为86. 67%,2组比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。2组男性和女性T值治疗前后组内比较,差异均有统计学意义(P 0. 05);男性T值治疗后组间比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论:清热消痤汤配合挑治放血拔罐疗法治疗痤疮有较好疗效。     

二氢叶酸还原酶基因在斑马鱼神经系统发育过程中的作用

目的为探明藏酋猴创伤所致多器官功能衰竭的致病机理。方法对一例实验藏酋猴因创伤所致多器官功能衰竭的病例进行了系统的病理学观察。结果藏酋猴的剖检病变主要表现为肝脏肿大,肺萎缩,头部皮下组织大面积出血、坏死,腋下淋巴结、肠系膜淋巴结水肿。病理组织学表现为全身各组织器官不同程度的水肿、变性、坏死,尤以心、肺、肝、肾、肠和脑的病变较为明显。结论颅外组织损伤易导致多器官功能衰竭。     

龙胆泻肝汤激活Bax/Caspase-3通路并诱导人角质形成细胞凋亡

目的：明确龙胆泻肝汤对人角质形成细胞株HaCaT细胞凋亡的影响。方法：Tunel法检测龙胆泻肝汤对HaCaT细胞凋亡的影响; DAPI染色后荧光显微镜观察HaCaT细胞凋亡形态变化; Western blot检测分析HaCaT细胞凋亡相关蛋白表达。结果：龙胆泻肝汤处理组HaCaT细胞形态发生了明显变化，凋亡比例明显高于未处理细胞组。龙胆泻肝汤作用于HaCaT细胞后活化的caspase-3和Bax的表达明显上调， Bcl-2蛋白表达下降。caspase-3特异性抑制剂Z-DEVD-FMK预处理后可降低龙胆泻肝汤诱导的细胞凋亡。结论：龙胆泻肝汤能明显诱导人角质形成细胞的凋亡，其机制可能与下调Bcl-2的表达，增高Bax和caspase-3的表达有关。     

新生儿病理性黄疸病因及诊治分析

目的本研究的主要目的是研究新生儿病理性黄疸的发病的病因,并在此基础上提出相应的诊治措施。方法对本院近年来收治的100例新生儿病理性黄疸的临床资料和治疗的结果进行总结性分析。结果围产因素导致的新生儿病理性黄疸的比例最大,其次是感染所造成的病理性黄疸,还有的表现为多因素混合黄疸以及母乳性黄疸等。结论通过本研究,期望能够加强产期保健工作,同时指出了正确的母乳喂养方法可以减少新生儿病理性黄疸的发生几率。     

英夫利昔单抗治疗川崎病的回顾性分析

目的探讨英夫利昔单抗(IFX)治疗川崎病的有效性和安全性。方法回顾性研究。选择2014年1月至2021年4月复旦大学附属儿科医院收治的68例有IFX应用史的川崎病患儿作为研究对象, 总结IFX应用指征、应用前后实验室指标变化、IFX敏感率、药物不良反应与并发症以及冠状动脉瘤(CAA)的转归。组间比较采用t检验、秩和检验或χ2检验。结果 68例川崎病患儿中男52例(76%)、女16例(24%), 发病年龄2.1(0.5, 3.8)岁。IFX应用指征为:35例(51%)对静脉注射丙种球蛋白(IVIG)或激素等治疗无应答患儿, 其中28例(80%)在IFX应用前已并发CAA;32例(47%)CAA持续进展患儿;1例持续关节炎患儿。IFX均用于挽救治疗[发病至IFX应用时间为21(15, 30)d], 二线、三线、四线及以上治疗分别占29%(20/68)、29%(20/68)、41%(28/68)。IFX治疗后C反应蛋白[8(4, 15)比16(8, 43)mg/L, Z=-3.38, P=0.001]、血清淀粉样蛋白A[17(10, 42)比88(11, 327)mg/L, Z=-2.36,...     

视黄酸影响斑马鱼胚胎心脏房室分化

目的观察外源性视黄酸对斑马鱼心脏前后轴发育即心脏房室分化的影响。方法采用化学遗传学方法在斑马鱼胚胎发育至12.5hpf(hours post fertilization)给予5×10-8mol/L和10-7mol/L外源性视黄酸处理1.5h。应用胚胎整体原位杂交观察视黄酸对心脏特异基因vmhc,amhc,nkx2.5和nppa表达的影响。结果vmhc,amhc探针的整体原位杂交结果显示视黄酸处理会导致斑马鱼胚胎心脏的前后轴发育异常,表现为vmhc表达细胞的范围缩小,amhc表达细胞的范围明显增大。视黄酸可以明显增强nppa在心脏的表达。视黄酸对心脏房室分化的影响在48hpf后表现得明显。结论5×10-8mol/L和10-7mol/L视黄酸在12.5hpf处理斑马鱼胚胎对斑马鱼心脏早期发生没有影响。斑马鱼发育过程中,视黄酸对心脏的房室分化过程起着重要的调控作用,视黄酸支持心房的分化和发育,同时抑制心室发育。     

叶酸缺乏对斑马鱼背主动脉发育的影响

目的 观察叶酸缺乏斑马鱼胚胎的背主动脉(DA)发育情况,初步探讨叶酸缺乏后胚胎DA发育异常的机理.方法 采用将二氢叶酸还原酶(DHFR)功能阻断的方法构建叶酸缺乏斑马鱼模型,分别应用DHFR抑制剂甲氨蝶呤(MTX)以及DHFR基因knock-down技术处理斑马鱼胚胎.在胚胎发育至48 hpf时在显微镜下观察胚胎的整体发育情况,在60 hpf时应用荧光显微造影的方法观察胚胎的背主动脉发育状况.利用胚胎整体原位杂交和real-time PcR的方法检测影响DA发育的关键因子ephrinB2、Ang-1和Radar的表达情况,利用TUNEL法检测胚胎底索的凋亡情况.结果 MTX处理组胚胎以及DHFR knock-down组胚胎有相似的胚胎发育异常表型.荧光显微造影显示叶酸缺乏组胚胎的DA发育异常.叶酸缺乏组胚胎的ephrinB2、Ang-1和Radar表达减弱,底索凋亡增加.结论 叶酸缺乏可导致斑马鱼胚胎背主动脉发育异常,其机理与ephrinB2、Ang-1和Radar的表达减弱以及底索凋亡增加有关.     

叶酸拮抗剂甲氨喋呤导致斑马鱼心脏发育异常及BMP2b HAS2表达下调

目的：该研究利用叶酸拮抗剂甲氨喋呤（MTX）构建叶酸生物学活性受抑制的斑马鱼模型后，观察叶酸生物学活性受抑后对斑马鱼心脏发育的干扰作用以及对斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2表达的影响。 方法：用不同浓度的MTX处理不同发育时段的斑马鱼胚胎，于48 hpf（hours post fertilization）观察胚胎心脏发育情况并计数各组心脏发育异常个体的百分比及心率，评定MTX 对斑马鱼心脏发育的影响程度。用1.5×10-3 M的MTX处理6~10 hpf 发育时段的斑马鱼胚胎作为MTX处理组。于24 hpf及48 hpf 在显微镜下观察MTX处理组斑马鱼胚胎心脏发育情况。借助胚胎整体原位杂交和Real-time PCR 的方法检测BMP2b和HAS2在正常对照组及MTX处理组胚胎的表达水平。结果：胚胎早期发育阶段6~12hpf是斑马鱼胚胎对MTX的敏感时期。显微镜下观察结果显示MTX处理组斑马鱼心脏发育延迟，并有心脏形态发育明显异常。胚胎整体原位杂交结果显示MTX处理组斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2在心脏的表达于36 hpf及48 hpf下调。Real-time PCR 结果显示MTX处理组斑马鱼BMP2b的相对表达量在12，24，36及48 hpf减少，HAS2的相对表达量在24，36及48 hpf减少。结论：叶酸生物学活性受抑对早期胚胎的心脏发育影响较大，可导致斑马鱼心脏发育延迟及心脏形态异常，并下调斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2的表达，这可能是叶酸生物学活性受抑后导致心脏发育异常的机制之一。［中国当代儿科杂志，2007，9（2）：159-163］     

二维电泳分析胎儿酒精综合征斑马鱼模型蛋白表达谱

目的 利用二维电泳分析乙醇诱导斑马鱼胚胎发育畸形的可能分子机制.方法 采用400 mmol/L乙醇在斑马鱼胚胎圆顶期处理3 h,观察乙醇导致的斑马鱼胚胎发育畸形;通过二维凝胶电泳分析受精卵期、圆顶期、胚盾期和5-体节期的胚胎总蛋白,采用差减分析法减少母源性蛋白的干扰,比较5一体节期正常对照组和乙醇处理组斑马鱼胚胎蛋白表达谱的改变;通过原位杂交验证二维电泳的分析结果.结果 400 mmol/L乙醇处理导致62%的胚胎产生体轴发育障碍和60%的胚胎产生独眼畸形.二维电泳分析结果显示,400 mmol/L乙醇处理会导致受精后12 h(12 hours post fertilization,12 hpf)斑马鱼胚胎胶原蛋白2a1和TAR DNA结合蛋白表达分别下调81%和73%.随后原位杂交显示,胶原蛋白2a1在乙醇处理组胚胎体轴的表达明显下调;24 hpf乙醇处理胚胎胶原蛋白2a1在胚胎体轴的表达水平逐渐恢复正常,但神经管结构受到严重影响.结论 乙醇处理后斑马鱼胚胎发育畸形可能是由于乙醇干扰了胚胎发育过程中胶原蛋白2a1和TAR DNA结合蛋白的表达;其中乙醇对胶原蛋白2a1在轴中胚层早期表达的干扰,可能是导致发育后期体轴和神经管畸形的重要原因.