免疫扫描电镜样品的简单制备方法

本文介绍一种用免疫扫描电镜技术研究病毒感染的细胞表面的简易制样方法。适当控制镀金膜的厚度(约5nm厚),即可观察到直径仅20nm胶体金标记物的二次电子图象。与近年来发展起来的背散射成象法比较,细胞表面甚至病毒粒子的形貌更为清晰。     

辛德毕斯病毒囊膜蛋白的免疫标记

辛德毕斯病毒(Sindbis Virus,简称SbV)是最小的有囊膜的RNA病毒之一(图1),其囊幕含有二种病毒特异的囊膜蛋白(图1箭头)。病毒囊膜蛋白是在宿主细胞粗面内质网上合成的,经高尔基体加工后转运到细胞质膜上。研究SbV囊膜蛋白在细胞膜上的分布有助于进一步了解病毒的成熟与释放过程及其机制。我们曾参照P.Pinto da Silva的方法用抗病毒囊膜蛋白的抗体对SbV感染的细胞进行胶体金免疫标记,然后制备冰冻断裂复型样品,获得了宿主细胞质膜EF面复型与ES面的标记金颗粒的叠加图象(图2),进而我们探索了标记一复型技术和获得PF面复型与PS面标记金颗粒的叠加图象的方法,前者更有效地显示SbV囊膜蛋白在细胞质膜上的分布(图3),后者则可以把细胞内的免疫标记与冰冻蚀刻技术相结合,以对膜内微粒中的SbV囊膜蛋白进行定性定位的研究(图4),从而在一定程度上弥补了P.Pintoda Silva方法的不足。     

纯化的膀胱上皮细胞不对称单位膜的超微结构与成份分析

纯化的膀胱上皮细胞不对称单位膜的超微结构与成份分析粱凤霞丁明孝翟中和孙同天＊（北京大学生命科学学院，＊纽约大学医学院）不对称单位膜（ＡｓｙｍｍｅｔｒｉｃＵｎｉｔＭｅｍｂｒａｎｅ，简称ＡＵＭ）是存在于哺乳动物膀胱上皮细胞中的独特的膜结构。在前人工作的基...     

辛德毕斯病毒（Sindbis Virus）成熟过程的电镜研究

辛德毕斯病毒(Sindbis Virus,以下简称 SbV)属于披盖病毒科,是最小结构最简单的有囊膜的病毒之一,其结构蛋白仅有三种即衣壳蛋白、囊膜蛋白E_1和E_2。病毒的核衣壳在宿主细胞的细胞质中装配,然后转移到细胞质膜下,以出芽的方式披上一层囊膜,发育成为成熟的病毒粒子,出芽成熟过程的动力来自于核衣壳上的衣壳蛋白与细胞质膜上的病毒囊膜蛋白的相互作用。SbV的这种成熟模式十几年前就已提出并得到后来的一些电镜观察结果的支持。近几年来分子生物学的研究结果进一步表明:病毒成熟过程是囊膜蛋白E_2(一种跨膜蛋白)在细胞质中的部分(C末端)与衣壳蛋白相互作用的结果。     

膀胱上皮细胞表面糖被的电镜研究

应用电镜钌红染色与植物凝集素标记技术对小鼠和牛的膀胱上皮的糖被及其在发育中的变化进行了研究，结果显示膀胱表层细胞的腔面质膜上存在丰富的糖被结构，其厚度为４０－６０ｎｍ。它可为钌红染色，但对Ｃｏｎ Ａ和ＷＧＡ的标记不敏感。在胚胎发育的早期，膀胱表层细胞可被ＷＧＡ特异标记，但其标记程度随ＡＵＭ蛋白的增加而迅速下降，揭示在发育过程中膀胱上皮腔面质膜的糖被成分可能发生明显的改变。     

冰冻蚀刻胶体金标记技术

冰冻蚀刻技术主要的优越性之一是可以显示出镶嵌在细胞膜内的蛋白质颗粒,而对这些种类,数量繁多的膜内微粒的定性与定量研究,则是近几年刚刚建立的一个重要的电镜新技术。本实验用直径5nm的胶体金一羊抗兔抗体和直径20nm的胶体金一蛋白A的复合物,以及抗辛德毕斯病毒(sbv)表面糖蛋白E和抗sbv的抗体及抗水泡性口炎病毒(vsv),表面糖蛋白的抗体,分别标记了sbv或vsv感染的BHK—21单层细胞,经固定和甘油处理后,再把长有细胞单层的盖玻片小心裁成大小1～2mm的小块,在Balzars冰冻蚀刻仪中断裂、喷镀复型膜。仅用蒸馏水将复型膜连同细胞碎片漂起,即可捞在400目的载网上。     

油管抽油杆偏磨机理研究与措施探讨

随着我国的改革开放,油田的生产在进几十年得到了飞速发展,但也有许多的油田油井在向老龄井过渡。并伴随着许多新的问题在油田采油工程中出现,其中最为严重的就是油管与抽油杆等机械的磨损。它们的出现严重的影响了油田向高效率、低耗能的生产方向发展。     

透光阻燃型不饱和聚酯树脂TZ-2

叙述了透光阻燃不饱和聚酯树脂TZ 2的合成方法、原料选择及该树脂的基本物理性能、阻燃性。对TZ 2树脂浇铸体和TZ 2树脂玻璃钢性能也进行了介绍 ,其中包括力学性能、阻燃性能和光学性能。讨论了影响性能因素和树脂及固化物折射率的设计原理     

DGD包埋－去包埋样品的免疫标记

小鼠膀胱上皮细胞经细胞选择性抽提和ＤＧＤ包埋后，制备超薄切片，并对其进行免疫标记。结果表明，ＤＧＤ包埋－去包理样品中的ＡＵＭ蛋白仍可特异地被抗体所识别，这一结果为证明小鼠膀胱上皮细胞中由ＡＵＭ蛋白组成的梭形泡以及腔面不对称单位膜结构均与中间纤维相连提供了证据。本文还对ＤＧＤ白埋后样品免疫标记技术进行了讨论。     

辛德比斯病毒6K蛋白在宿主细胞内的分布

6k蛋白是Sindbis病毒(SbV)26S基因组编码的一个仅有55个氨基酸的小分子蛋白质,其生物学功能甚至在细胞内的分布至今尚不清楚。最近在M.Schlesinger实验室中用人工合成的6k多肽得到抗6k蛋白的抗体,使我们的上述工作得到进行。本实验用直径20nm的胶体金—proteinA和直径为5nm的胶体金—羊抗兔抗体的复合物,用常规的免疫电镜技术,先后标记了SbV感染的整装细胞及用于冰冻蚀刻的样品,以观察6k蛋白在细胞表面的分布,又标记了Triton×100处理的整装细胞以研究6k蛋白与细胞骨架的关系。同时还标记了低温包埋剂(LK4M)