牛传染性鼻气管炎病毒的繁殖的冰冻蚀刻研究

冰冻蚀刻技术在病毒学研究中有其独到的长处,但很少有人把它应用到疱疹病毒研究中来,我们用这种方法对牛传染性鼻气管炎病毒(牛疱疹病毒Ⅰ型)在牛肾培养细胞中的繁殖进行了观察。在细胞核内同时存在着与病毒有关的3种形式的装配:裸露的核心的装配,空心衣壳的装配和有核心的核壳     

应用电镜研究病毒与细胞骨架关系的几种简单方法

本文介绍了研究病毒与细胞骨架关系的几种简便的电镜方法。同时应用这些方法从多种角度对样品进行观察,不仅可以互相印证,而且能获得更多的信息。观察到了病毒感染的细胞骨架的某些变化。本文还报告了这些方法在研究动物病毒与细胞骨架关系方面的应用,并讨论了其优缺点。     

非细胞体系核重构的过程及重构核活性的研究

我们首先利用 Lambda DNA 与活化的非洲爪蟾卵提取物进行了非细胞体系核重构,并在此基础上对核重构过程的超微结构与重构核的功能进行了研究。将活化约半小时后的非洲爪蟾卵在10,000G分离心除去脂类,卵黄,色素及卵核后得到卵提取物(extracts),它们由大量的线粒体,各种大小的膜泡及均匀的基质构成;将它们在22℃温育一定时间后,可以观察到有很多环形片层结构出现;在活化体系中加入 Lambda DNA 后温育,可以观察到核重构现象。重构核具有完整的双层膜及典型的核孔结构。电镜核酸分子原位杂交结果证明重构核     

非细胞体系诱导小鼠肝细胞核凋亡的超微观察

非细胞体系诱导小鼠肝细胞核凋亡的超微观察蒋争凡卞婕翟中和（北京大学生命科学学院，北京１００８７１）细胞编程性死亡，又称细胞调亡，是细胞的一种基本生命现象，在多种生理和病理过程中具重要作用，可保证有害细胞或多余细胞从多细胞生物体中被清除［１］。肿瘤转化...     

非洲爪蟾卵提取物中200nm膜泡与环形片层及核被膜上核孔复合体形成的关系

将ＬａｍｂｄａＤＮＡ引入活化的非洲爪蟾卵提取物中，在由磷酸肌酸与磷酸肌酸激酶构成的ＡＴＰ再生系统的参与下，在这种非细胞体系中能够围绕由ＬａｍｂｄａＤＮＡ诱导形成的染色质重建核被膜结构，同时在染色质外出现类似核被膜结构的环形片层。在这两种膜结构中核孔复合体的形成都与直径２００ｎｍ左右的单层圆形小膜泡密切相关，这些小膜泡可以附着在染色质表面或独立于染色质之外相互融合成扁平囊状的双层膜片层，双层膜进一步融合形成核孔，与此同时，核孔复合体在核孔上完成装配。     

应用冷冻蚀刻技术研究几种病毒的超微结构

采用冷冻蚀刻技术研究了GPV、IBRV和NDV等几种病毒的超微结构,初步取得如下结果: 一、在冷冻蚀刻样品中,GPV呈球形(在细胞质内)或近似球形(释放到细胞外),直径约300nm,这与在超薄切片或负染色样品中所见的病毒形态和大小有很大的不同。二、IBRV囊膜的PF和EF面上,均可见到直径5—9nm的膜内微粒。GPV囊膜膜内微粒的数量及其在PF面和EF面上的分布与IBRV不同。细胞质内与细胞外成熟的GPV囊膜的膜内微粒也有明显的差异。三、在GPV毒浆基质中,可观察到由直径5—10nm颗粒的聚集或规则排列形成的弓形、环形、及直径150—400nm大小不等的球形结构。实验结果显示了冷冻蚀刻技术在病毒形态结构和形态发生,尤其在病毒囊膜结构研究中的优越性。对这一技术在病毒学中的应用进行了讨论。     

核骨架—中间纤维系统的扫描电镜研究

应用扫描电镜,结合选择性细胞抽提技术制备核骨架—Lamina—中间纤维系统的方法,对牛肾继代组培细胞进行了观察。发现牛肾细胞中间纤维交织成密集的网络,遍布整个细胞质,并且从三维空间上清晰地显示了中间纤维与核膜下蛋白质性质的Lamina连结的关系。同时观察到核骨架纤维有若干根单纤维融合成粗大纤维的现象,并且核骨架纤维也与Lamina相连。文中对中间纤维可能的功能特别是其骨架功能,核骨架、Lamina、中间纤维的关系,以及使用扫描电镜观察这些结构的优点进行了讨论。还对牛传染性鼻气管炎病毒感染后的细胞的核骨架纤维做了初步观察。     

核体及其贴壁过程的超微结构研究

核体是松胞素诱导组织培养细胞排核的产物。近年来已有许多学者利用核体来研究细胞生命活动的一些基本问题。本文利用透射电镜和扫描电镜对核体及其贴壁过程的超微结构进行了研究。将核体制成超薄切片,可以观察到用松胞素B与冲刷法制备的核体是由完整的质膜和不等量的胞质及其所包被的细胞核组成,其细胞核内精细结构保存完好(图1),显而易见核体具有完整的质膜和少量的胞质的保护,这对于维持细胞核的精细结构是非常重要的。裸核由于缺乏质膜和胞质,其内部结构则发生退行性变化。在静置培养条件下,核体仍具贴壁的能力。用扫描电镜观察,可看到核体在贴壁过程中,能形成与基质面接     

山羊痘病毒囊膜的超微结构与形态发生

痘病毒可以作为研究生物膜形态发生的很好材料。我们应用冷冻蚀刻技术并附以超薄切片、负染色,细胞表面复型和扫描电镜等技术,对一种复制周期很长的痘病毒——山羊痘病毒囊膜的精细结构和发生过程进行了比较研究。病毒发育早期,毒浆周围出现的弧形膜样结构在冷冻蚀刻样品中呈现出间距为15—20nm均匀排列的二层颗粒;未成熟病毒囊膜为圆形,直径约400nm,因其常常从病毒中部断裂,因而可清楚地显示出病毒周缘仍由二层颗粒围绕;细胞质内成熟病毒囊膜为直径320—340nm的规则球体,其的PF面和EF面上均可见到大量直径为7—10nm的膜内微粒。释放到细胞外的成熟病毒囊膜的PF或EF面仅有少量的膜内微粒,囊膜形态呈不规则的球体     

冰冻蚀刻胶体金标记技术

冰冻蚀刻技术主要的优越性之一是可以显示出镶嵌在细胞膜内的蛋白质颗粒,而对这些种类,数量繁多的膜内微粒的定性与定量研究,则是近几年刚刚建立的一个重要的电镜新技术。本实验用直径5nm的胶体金一羊抗兔抗体和直径20nm的胶体金一蛋白A的复合物,以及抗辛德毕斯病毒(sbv)表面糖蛋白E和抗sbv的抗体及抗水泡性口炎病毒(vsv),表面糖蛋白的抗体,分别标记了sbv或vsv感染的BHK—21单层细胞,经固定和甘油处理后,再把长有细胞单层的盖玻片小心裁成大小1～2mm的小块,在Balzars冰冻蚀刻仪中断裂、喷镀复型膜。仅用蒸馏水将复型膜连同细胞碎片漂起,即可捞在400目的载网上。