牛传染性鼻气管炎病毒的繁殖的冰冻蚀刻研究

冰冻蚀刻技术在病毒学研究中有其独到的长处,但很少有人把它应用到疱疹病毒研究中来,我们用这种方法对牛传染性鼻气管炎病毒(牛疱疹病毒Ⅰ型)在牛肾培养细胞中的繁殖进行了观察。在细胞核内同时存在着与病毒有关的3种形式的装配:裸露的核心的装配,空心衣壳的装配和有核心的核壳     

应用电镜研究病毒与细胞骨架关系的几种简单方法

本文介绍了研究病毒与细胞骨架关系的几种简便的电镜方法。同时应用这些方法从多种角度对样品进行观察,不仅可以互相印证,而且能获得更多的信息。观察到了病毒感染的细胞骨架的某些变化。本文还报告了这些方法在研究动物病毒与细胞骨架关系方面的应用,并讨论了其优缺点。     

四膜虫CDA（Cell Division Arrest）突变株的超微形态

四膜虫 CDA(Cell Division Arrest)突变株是 Frankel 筛选出来的一组细胞分裂抑制温度敏感突变株,它是研究细胞核周期与细胞质周期之间相互关系以及研究细胞质分裂机制的理想模型。本文以CDA突变株SB2120为材料,用常规扫描电镜技术、冰冻蚀刻和超薄切片技术,详细比较了在CDA转化过程中细胞在超微结构方面的变化,进而用电镜放射自显影技术显示了其DNA与RNA合成动态并运用显微注射技术检测和证实了四膜虫CDA突变基因产物的存在。在限制温度下,突变株四膜虫在形态结构上发生的最明显的变化是:1>体积变大,形状不规则,纤毛带走向紊乱,不同部位产生多个口器,口器的形态各异(图1、2);2>细胞骨架体     

纯化的膀胱上皮细胞不对称单位膜的超微结构与成份分析

纯化的膀胱上皮细胞不对称单位膜的超微结构与成份分析粱凤霞丁明孝翟中和孙同天＊（北京大学生命科学学院，＊纽约大学医学院）不对称单位膜（ＡｓｙｍｍｅｔｒｉｃＵｎｉｔＭｅｍｂｒａｎｅ，简称ＡＵＭ）是存在于哺乳动物膀胱上皮细胞中的独特的膜结构。在前人工作的基...     

辛德毕斯病毒（Sindbis Virus）成熟过程的电镜研究

辛德毕斯病毒(Sindbis Virus,以下简称 SbV)属于披盖病毒科,是最小结构最简单的有囊膜的病毒之一,其结构蛋白仅有三种即衣壳蛋白、囊膜蛋白E_1和E_2。病毒的核衣壳在宿主细胞的细胞质中装配,然后转移到细胞质膜下,以出芽的方式披上一层囊膜,发育成为成熟的病毒粒子,出芽成熟过程的动力来自于核衣壳上的衣壳蛋白与细胞质膜上的病毒囊膜蛋白的相互作用。SbV的这种成熟模式十几年前就已提出并得到后来的一些电镜观察结果的支持。近几年来分子生物学的研究结果进一步表明:病毒成熟过程是囊膜蛋白E_2(一种跨膜蛋白)在细胞质中的部分(C末端)与衣壳蛋白相互作用的结果。     

应用冷冻蚀刻技术研究几种病毒的超微结构

采用冷冻蚀刻技术研究了GPV、IBRV和NDV等几种病毒的超微结构,初步取得如下结果: 一、在冷冻蚀刻样品中,GPV呈球形(在细胞质内)或近似球形(释放到细胞外),直径约300nm,这与在超薄切片或负染色样品中所见的病毒形态和大小有很大的不同。二、IBRV囊膜的PF和EF面上,均可见到直径5—9nm的膜内微粒。GPV囊膜膜内微粒的数量及其在PF面和EF面上的分布与IBRV不同。细胞质内与细胞外成熟的GPV囊膜的膜内微粒也有明显的差异。三、在GPV毒浆基质中,可观察到由直径5—10nm颗粒的聚集或规则排列形成的弓形、环形、及直径150—400nm大小不等的球形结构。实验结果显示了冷冻蚀刻技术在病毒形态结构和形态发生,尤其在病毒囊膜结构研究中的优越性。对这一技术在病毒学中的应用进行了讨论。     

核体及其贴壁过程的超微结构研究

核体是松胞素诱导组织培养细胞排核的产物。近年来已有许多学者利用核体来研究细胞生命活动的一些基本问题。本文利用透射电镜和扫描电镜对核体及其贴壁过程的超微结构进行了研究。将核体制成超薄切片,可以观察到用松胞素B与冲刷法制备的核体是由完整的质膜和不等量的胞质及其所包被的细胞核组成,其细胞核内精细结构保存完好(图1),显而易见核体具有完整的质膜和少量的胞质的保护,这对于维持细胞核的精细结构是非常重要的。裸核由于缺乏质膜和胞质,其内部结构则发生退行性变化。在静置培养条件下,核体仍具贴壁的能力。用扫描电镜观察,可看到核体在贴壁过程中,能形成与基质面接     

山羊痘病毒囊膜的超微结构与形态发生

痘病毒可以作为研究生物膜形态发生的很好材料。我们应用冷冻蚀刻技术并附以超薄切片、负染色,细胞表面复型和扫描电镜等技术,对一种复制周期很长的痘病毒——山羊痘病毒囊膜的精细结构和发生过程进行了比较研究。病毒发育早期,毒浆周围出现的弧形膜样结构在冷冻蚀刻样品中呈现出间距为15—20nm均匀排列的二层颗粒;未成熟病毒囊膜为圆形,直径约400nm,因其常常从病毒中部断裂,因而可清楚地显示出病毒周缘仍由二层颗粒围绕;细胞质内成熟病毒囊膜为直径320—340nm的规则球体,其的PF面和EF面上均可见到大量直径为7—10nm的膜内微粒。释放到细胞外的成熟病毒囊膜的PF或EF面仅有少量的膜内微粒,囊膜形态呈不规则的球体     

冰冻蚀刻胶体金标记技术

冰冻蚀刻技术主要的优越性之一是可以显示出镶嵌在细胞膜内的蛋白质颗粒,而对这些种类,数量繁多的膜内微粒的定性与定量研究,则是近几年刚刚建立的一个重要的电镜新技术。本实验用直径5nm的胶体金一羊抗兔抗体和直径20nm的胶体金一蛋白A的复合物,以及抗辛德毕斯病毒(sbv)表面糖蛋白E和抗sbv的抗体及抗水泡性口炎病毒(vsv),表面糖蛋白的抗体,分别标记了sbv或vsv感染的BHK—21单层细胞,经固定和甘油处理后,再把长有细胞单层的盖玻片小心裁成大小1～2mm的小块,在Balzars冰冻蚀刻仪中断裂、喷镀复型膜。仅用蒸馏水将复型膜连同细胞碎片漂起,即可捞在400目的载网上。     

应用电镜放射自显影技术研究病毒DNA的复制及宿主细胞内RNA的转录

应用电镜放射自显影技术研究了鸭瘟病毒(DPV)DNA复制及宿主细胞内RNA的转录功能,并扼要报导了我们的主要实验结果: 1.DPV的DNA合成是在核内电子密度较低的均匀基质中进行的,随后,转移到电子致密的毒浆结构中装配病毒核壳体。从病毒DNA复制到发育成熟的病毒仅需3小时。 2.DPV的DNA复制的持续时间较长。病毒DNA的复制与核壳体的装配及病毒的成熟与释放可同时进行。 3.DPV在细胞核内装配,也可在细胞质内装配。 4.宿主细胞的核仁依然存在,并保持其转录RNA的功能。