商品大豆饮料胰蛋白酶抑制剂活性的研究

本研究详细测定了未经热处理的生豆奶、各种经现代技术加工的大豆饮料产品、东方传统大豆食品豆腐等样品的胰蛋白酶抑制剂活性（ＴＩＡ）。其中生豆奶的ＴＩＡ（以每克蛋白质所抑制的纯胰蛋白酶毫克数表示）是６６．４ｍｇ／ｇ蛋白质，经巴氏杀菌的商品大豆饮料ＴＩＡ是２３．７ｍｇ／ｇ蛋白质。检验了经超高温灭菌处理的７种不同商标大豆饮品，结果表明这些饮品的ＴＩＡ在１３．３～３１．６ｍｇ／ｇ蛋白质之间。另有两种已知是经灭菌的大豆饮料，其ＴＩＡ最低，分别为４．１ｍｇ／ｇ蛋白质和７．７ｍｇ／ｇ蛋白质。又分析了一种采用东方传统加工方法生产的豆腐，其ＴＩＡ仅为６．４ｍｇ／ｇ蛋白质。上述这些分析结果反映了某些经现代加工方法生产的商品大豆饮料，在消除抗营养因子的处理上是不够充分的。     

两种大豆胰蛋白酶抑制剂的抑制活性及二级结构分析比较

研究了I型Kunitz大豆胰蛋白酶抑制剂(I-KSTI)和Bowman-Birk大豆胰蛋白酶抑制剂(BBTI)对胰蛋白酶的抑制活性及其二级结构的组成差异。发现I-KSTI及　BBTI对胰蛋白酶的抑制曲线分为两部分:活性急剧下降部分和缓慢下降部分。使胰蛋白酶的活性降为原来的一半时的I-KSTI和BBTI浓度为1.5μg/ml　和1.2μg/ml。使胰蛋白酶活性趋向于零(完全钝化)时的I-KSTI浓度为13.5μg/ml,而BBTI则为9μg/ml。两种抑制剂的存在不改变胰蛋白酶的Km值,但其Vmax随抑制剂浓度的增加而下降。表明其对胰蛋白酶的抑制作用是一种非竞争性抑制作用。远紫外圆二色谱的研究发现I-KSTI和BBTI的单一吸收负峰在200nm波长处,I-KSTI的克分子椭圆度[θ]200nm=-2545deg·cm2/d　mol,其二级结构由22.5%β折叠,16.25%β转角和61.4%无规卷曲组成;BBTI的[θ]200nm=-797deg·cm2/d　mol,由52.6%β折叠和47.4%无规卷曲组成。     

豆奶蛋白质中巯基含量的测定

Ellman法是测定蛋白质中游离巯基和二硫键含量的快速、简便的方法,但该法用于测定豆奶等的巯基含量时,由于溶液高度混浊和巯基含量不高,给测定带来了困难。本实验先采用丙酮将豆奶中的蛋白质沉淀分离,再用含8mol/L尿素的Tris-甘氨酸缓冲溶液或不含尿素的Tris-甘氨酸缓冲溶液溶解,使蛋白质溶液的混浊度大大下降,从而能达到用分光度法准确测定豆奶蛋白质中巯基含量的目的。采用大豆分离蛋白作对照实验表明,丙酮处理不会影响蛋白质中的巯基含量,说明丙酮处理是测定高混浊度蛋白质溶液如牛奶、豆奶中的蛋白质巯基含量的一种有效方法。     

pH为中性的大豆分离蛋白膜的制备及特性

以大豆分离蛋白、甘油、阿魏酸为组成成分的成膜溶液调pH为中性,热处理后铺板干燥,揭膜,在相对湿度为52%的环境下平衡48h后测定膜的抗拉强度、断裂伸长率、颜色等。结果表明,阿魏酸的添加方法和添加量对膜的这些特性都有显著影响;阿魏酸的添加可显著增加膜的拉伸张力(20.2%～34.5%)和断裂伸长率(62.5%～94.3%),但也使膜的颜色变深;阿魏酸使pH为中性的大豆分离膜的机械性能可与通常在pH9或以上制备的这类膜相媲美,这使大豆分离蛋白膜有了更广泛的潜在应用前景。     

阿魏酸在大豆分离蛋白制备可食性膜中的应用

在大豆分离蛋白成膜液中添加0.5mmol/100ml的阿魏酸能增加膜的机械强度,降低膜对水蒸气、氧气、二氧化碳和氮气的透性,同时,采用阿魏酸处理较易制备大豆分离蛋白与花生油或玉米淀粉组成的复合膜。阿魏酸能改善大豆分离蛋白成膜特性的可能机理是因为它增加了蛋白分子之间的交联。     

超声处理大豆浆体对提高蛋白质和固形物萃取率的作用

采用低频超声波处理大豆浆体以提高其蛋白质和固形物的萃取率。探讨了处理时间、温度、ｐＨ和超声振幅诸因素对超声处理效果的影响，并初步得出其最佳处理条件。结果表明，采用低频超声波处理大豆浆体及其豆渣能有效地提高蛋白质和固形物的萃取率     

豆浆热处理过程中3种大豆异黄酮苷原的热降解比较

将大豆加工成豆浆并分别用95、121和140℃处理不同时间，以高效液相色谱（HPLC）法检测其中的3种大豆异黄酮皆原，染料木黄酮（genistein）、黄豆苷原（daidzein）和大豆黄素（glycitein）的含量变化，与原粒大豆、生豆浆进行比较。结果发现，染料木黄酮、黄豆苷原和大豆黄素的热稳定性存在较大差异，在95℃下，染料木黄酮在60min的处理时间内稳定，而黄豆苷原和大豆黄素的T（loss0.5）值（损失50％含量的时间）分别为1442s和453s，表明95℃下3种大豆异黄酮的热稳定性表现为：染料木黄酮〉黄豆苷原〉大豆黄素。而在121℃和140℃的处理条件下，3种大豆异黄酮苷原均随着处理时间的延长而出现不同的热降解，黄豆苷原、大豆黄素和染料木黄酮在121℃的T（loss0.5）值分别为26．36、37．88和1015s，而在140℃下，黄豆苷原、大豆黄素和染料木黄酮的T（loss0.5）值则分别缩短为6．94、8．47和369s，结果表明在121℃和140℃下，3种大豆异黄酮的热稳定性表现为：染料木黄酮〉大豆黄素〉黄豆苷原。     

超声波对大豆胰蛋白酶抑制剂活性及二级结构的影响

研究了Kunitz型大豆胰蛋白酶抑制剂(KSTI)和Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制剂(BBTI)经超声波处理后的活性、巯基含量、远紫外圆二色谱的变化。发现KSTI和BBTI的单一吸收负峰在200nm波长处,KSTI的[θ]200nm=-2545deg·cm2·d/mol,, 其二级结构由22.5%β折叠,16.25%β转角和61.4%无规卷曲组成;BBTI的[θ]200nm= -797deg·cm2·d/mol,由52.6%β折叠和47.4%无规卷曲组成。用65%振幅的超声波场处理11 min 后,KSTI 的[θ]200nm值变为-1827 deg·cm2·d/mol,处理20min后,其β转角和无规卷曲的含量分别下降至10.8%和54%,而β折叠的含量则增加至35.2%,同时有约71.5%的二硫化键转变成巯基,对胰蛋白酶的抑制活性则被钝化55%;而BBTI的二级结构则表现稳定,65%振幅的超声波场处理20min后,[θ]200nm值只改变为-700 deg·cm2·d/mol,其β折叠、无规卷曲结构以及对胰蛋白酶的抑制活性基本上不受影响,仅有5.29%的二硫键转化成巯基。超声波可能是通过影响KSTI的二硫键,使其二级结构发生变化,从而影响其活性。     

大豆分离蛋白在成膜后的营养特性变化

采用胃蛋白酶和2，4，6-三硝基苯磺酸分别测定大豆分离蛋白膜的消化率和赖氨酸有效性。结果表明，蛋白质的消化率和赖氨酸有效性随成膜溶液的pH升高而下降，并因一些增加蛋白交联的物质如单宁、阿魏酸和过氧化氢的添加而降低。蛋白膜的机械性与膜蛋白消化率和赖氨酸有效性存在一定负相关，即机械性能较强的膜，其消化率和赖氨酸有效性较低。不过，玉米淀粉似乎是个例外，它在改善机械特性的同时，也保持了大豆蛋白膜的营养。由于大豆分离蛋白制备成膜后，其消化率和赖氨酸有效性下降，因此将大豆蛋白膜称为生物可降解膜似乎比称作可食性膜更科学。     

大豆原料及其分离蛋白的SDS-PAGE图谱研究

将大豆原料制备成脱脂豆粕、“碱提酸沉”分离蛋白和超滤法分离蛋白,采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ技术研究其中的电泳图谱变化。在所有样品的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱中共分离出１７种蛋白组分。其分子量（Ｍｒ）分别是：１号带,２２８４０（２,３）号带,２６０２０：４号带,３００８０;５号带,３２８２０：（６、７）号带,３６８５０：８号带,４６５００：９号带,５１４３０：１０号带,５６９２０：１１号带,６５７９０：１２号带