黑曲霉葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的表达及其高效发酵研究

葡萄糖氧化酶是一类能催化β-D-葡萄糖生成葡萄糖酸-δ-内酯的酶类,在食品、药品以及生物传感器等领域具有广泛的应用前景。从黑曲霉中克隆出葡萄糖氧化酶编码序列,在毕赤酵母中实现了组成型和诱导型表达并分析了其酶学性质和发酵条件。结果表明:黑曲霉葡萄糖氧化酶的编码基因长度为1 818 bp,编码605个氨基酸,具有21个氨基酸组成的信号肽。毕赤酵母组成型表达葡萄糖氧化酶的发酵上清液中葡萄糖氧化酶的酶活可达1.2 U/m L,利用镍离子亲和层析纯化后得到了分子质量约为100 kDa的葡萄糖氧化酶。利用糖苷内切酶H(Endo H)对葡萄糖氧化酶去糖基化后,其分子质量约为70 kDa,与推测的分子质量相近。对黑曲霉葡萄糖氧化酶的酶学性质研究表明,该酶的最适反应pH 6.0,最适反应温度35℃,比活力60.9 U/mg。为了进一步提高葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的表达量,构建了诱导型表达的毕赤酵母菌株并通过G418抗生素筛选获得了高效表达菌株。对该菌株进行高密度发酵(湿菌体200 g/L),甲醇添加量为2.5%,发酵至第7天时葡萄糖氧化酶发酵量可达133 U/m L,蛋白表达量约1.9 g/L。     

小麦病程相关蛋白wheatwin 1的表达及其对黄曲霉生长及产毒的影响

黄曲霉在储粮中的大量生长可严重危害粮食的储藏品质甚至产生真菌毒素。研究表明,小麦籽粒中含有多种病程相关蛋白,具有较强储藏霉变抗性的小麦品种胚部含有较多的病程相关蛋白,但其对储粮霉菌的生长和产毒的影响尚不清楚。通过PCR手段扩增从小麦基因组DNA中扩增出了病程相关蛋白wheatwin 1基因并将其在大肠杆菌中进行了表达,对wheatwin 1蛋白进行复性和纯化后分析其对黄曲霉生长及产生毒素的影响。结果表明编码成熟wheatwin 1蛋白的DNA序列长度为378 bp,将其在大肠杆菌中与谷胱甘肽转移酶融合表达可获得包涵体蛋白。将包涵体蛋白复性并利用Thrombin酶切后获得了具有核酸酶活性的wheatwin 1,其可降解黄曲霉RNA;进一步研究表明100 g/m L wheatwin蛋白可显著抑制黄曲霉孢子的萌发和黄曲霉毒素的积累。为进一步揭示wheatwin蛋白对黄曲霉生长和产毒的机理研究奠定了基础。     

抗菌肽Hst5抑制串珠镰刀菌生长及作用机制研究

摘要:目的 研究抗菌肽Hst5对串珠镰刀菌的抑制作用,探究其作用机制。方法 通过扫描电子显电镜（SEM）、透射电子显微镜（TEM）、钙荧光白（CFW）、碘化丙啶（PI）、4'',6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）、线粒体膜电位检测染料（JC-1）染色和活性氧ROS荧光探针（CFH-DA）等分析不同浓度Hst5处理后的串珠镰刀菌细胞结构及胞内氧化还原状态的改变。结果 Hst5处理过后,导致串珠镰刀菌孢子细胞壁破损、细胞膜通透性改变、细胞核受损、细胞器聚集等一系列现象;同时造成线粒体膜电位下降、琥珀酸脱氢酶(SDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)酶活性降低以及胞内活性氧（ROS）水平升高。结论 Hst5抑制串珠镰刀菌生长是多方面协同作用的结果,抗菌肽破坏了细胞壁的完整性和细胞膜的通透性,同时造成线粒体功能紊乱进而导致胞内ROS水平升高、细胞核DNA出现片段化,最终减弱了串珠镰刀菌在玉米和西红柿中的致病性。本研究为防治串珠镰刀菌提供了新的途径,为制备新的抗真菌剂提供了潜在可能。     

小麦储藏过程中温度对劣变起始位点及生理酶活性的影响

对小麦在储藏过程中发生生理劣变的起始位点及与呼吸作用相关酶活性变化进行研究。通过设定不同储藏温度对小麦进行正常储藏和人工陈化,研究小麦储藏变质过程中生理酶活动状态。同时,显微观察小麦胚结构变化,确定劣变起始位点。结果表明,小麦的生理劣变最早发生于胚部组织的根冠部位,继而向胚根发展,最后到胚芽。在不同储藏温度下,小麦在劣变过程中其过氧化氢酶活性逐渐降低,最后维持在一个较低的水平,脱氢酶和淀粉酶在储藏初期活性升高,随后则逐渐降低。在几个设定的储藏温度中,温度越高,生理酶活性变化越剧烈。     

芽胞杆菌XM-1产酸性淀粉酶发酵条件研究

通过单因素试验及响应面分析,对基础发酵培养基配方进行了优化,确定了枯草芽孢杆菌XM-1产酸性α-淀粉酶液体发酵培养基的最佳配方为:可溶性淀粉8.1g/L,花生饼34.3g/L,NH.4NO3 6g/L,KH2PO4 3g/L,CaCl2·2H2O 2.94g/L,培养基起始pH值为5.0.菌株XM-1在优化后的培养基中发酵产酶达最高为534.2U/mL,约是优化前的2.2倍.     

芽麦储藏吸湿性及其生物活性变化研究

对2个品种芽麦分别在25℃和30℃、RH70%环境条件下进行模拟储藏,定期测定芽麦含水量、发芽率、呼吸作用及微生物活动等,研究芽麦储藏吸湿过程中主要生物学活性的变化情况。结果表明:芽麦在储藏初期表现较强的吸湿性5,d后达到水分平衡2,5℃时的平衡水分较30℃的高。萌动芽麦仍具有较高的发芽率,但随储藏时间延长,芽麦发芽率明显下降。微生物在芽麦吸湿时表现出较高活性,当芽麦达到平衡水分后,微生物活性随储藏时间延长而下降。在2个试验温度下,含水量12%的芽麦呼吸强度弱,而含水量14.5%的芽麦呼吸速率较12%的高,且在30℃时的呼吸强度较25℃高。芽麦脂肪酸值在芽麦快速吸湿时增速明显,当达到水分平衡时上升缓慢。     

黄孢原毛平革菌的固态培养条件及菌剂干燥保存条件研究

对白腐菌的典型种黄孢原毛平革菌(P.chrysosporium)的固态培养条件及最优培养条件下培养的固态菌剂的干燥保存条件进行了研究.结果表明,37℃培养7d多碳少氮条件更利于该菌的生长和产孢,分别在第10 d和第12d其产Lip和Mnp酶活力达到最高;相关性分析表明,菌剂的含水量与其活孢子含量之间呈强正线性关系,实际应用中可根据不同要求而采用不同的干燥方法.     

一株酸性脂肪酶高产菌株的筛选与鉴定

目的分离筛选出一株酸性脂肪酶高产菌株并对其进行鉴定。方法通过溴甲酚紫酸碱指示剂进行平板初筛,甘油三丁酸酯透明圈法以及摇瓶培养复筛,筛选获得了一株酸性脂肪酶产生菌株;利用平板透明圈法、橄榄油乳化液滴定法和对硝基苯酚比色法3种方法对所筛菌株进行酶活力测定。结果分离获得一株具有高产酸性脂肪酶活力的菌株,将其命名为菌株WY19。经过检测,其粗酶活力达到11000 U/L。通过对菌株WY19进行形态学鉴定、生理生化实验以及分子生物学鉴定,结合系统发育树分析,确定本研究获得的酸性脂肪酶产生菌为克雷伯氏菌。结论菌株WY19所产脂肪酶为酸性脂肪酶,在食品、医药、油脂加工等领域方面具有较好的应用前景。     

制药工程专业药物化学教学改革的实践与探索

药物化学是制药工程专业的核心主干课程,本文拟为制药工程专业药物化学教学实践提供积极有益的借鉴。根据专业培养目标与课程的特点,我们探索了药物化学教学的新思路,从学生学习积极性、教学内容、教学方法与手段、考核方式等方面入手,进行改革与探索。通过以上措施,提高了学生学习该课程的积极性,取得了良好的教学效果。根据专业和学生特点,有针对性地进行课程教学的改革,可以显著提高教学质量。     

黄瓜连作土壤微生物区系变化研究

研究了黄瓜根部土壤主要微生物类群随连作茬次的反应,并着重用变性梯度凝胶电泳(DGGE)监测黄瓜根际未培养优势菌群的动态变化。结果表明:随着连作茬次增加,土壤可培养微生物数量减少,其中细菌数量降低更为明显,对连作表现出较高的敏感性,放线菌对黄瓜连作反应稍滞后,至第三茬时开始呈现降低趋势。黄瓜连作致使少数真菌种群富集,同时多种真菌类群数量减少,种群变化呈现单一化趋势,多样性水平降低。DGGE分析结果表明黄瓜连作引起根际Bacillus sp.、Pseudom onas sp.和另一未培养细菌种群数量减少,而同时引起Sphingom onas sp.类群数量增加。实验结果暗示,黄瓜连作破坏根部微生物种群生态平衡,使其多样性水平降低。