小型猪葡萄糖转运子4外显子4a的基因多态性分析

目的分析我国特有的3个小型猪品系巴马小型猪、中国农大小型猪、五指山小型猪葡萄糖转运子4基因外显子4a的单核苷酸多态性（SNPs）分布特点,为我国小型猪在糖尿病和代谢性疾病研究中提供基础资料。方法以3个品系小型猪基因组DNA为模板,应用特异性引物进行PCR扩增,扩增产物纯化测序,进行BLAST比对分析。结果在小型猪GLUT-4基因外显子4a上有2个SNP位点：SNP1：GCT→GCC（Ala133 Ala）,3个品系均发生了变化,均为纯合突变,其突变率为（22/22,100%）。SNP2：GGC→GGT（Gly146 Gly）,巴马小型猪突变率为（6/6,100%）,均为纯合突变;五指山小型猪突变率为（6/6,100%）,均为纯合突变;中国农大小型猪突变率为（10/10,100%）,其中包括6例纯合突变（6/10,60%）和4例杂合突变（4/10,40%）。结论SNPs1,在所有测定的小型猪品系中检出,这可能是所测小型猪的共有特征。SNPs2可能是小型猪品系之间的差异。     

小型猪胰淀素基因的多态性分析

目的探讨我国3个特有的小型猪品系,巴马小型猪,五指山小型猪,中国农大小型猪胰淀素（IAPP）基因多态性分布,为我国小型猪在2型糖尿病及代谢性疾病研究中的应用提供基础资料。方法提取3个品系小型猪血液基因组DNA,针对IAPP基因外显子3~内含子3的部分序列进行PCR扩增,产物鉴定、测序,统计分析基因多态。结果在所扩增的片段中共检测出2个SNPs位点,SNPs1：43G→A,位于外显子上,未引起的氨基酸的改变,突变发生在五指山猪（G/A杂合突变为16.7%,A纯合突变为83.3%）和中国农大猪（G/A杂合突变60%,A纯合突变为20%两个品系中。SNPs2：214C→T,位于内含子上,发生在五指山猪（T/C杂合突变为16.7%,T纯合突变为83.3%）和中国农大猪（T/C杂合突变为20%,T纯合突变为60%）两个品系中。结论在IAPP基因外显子3-内含子3的部分扩增序列中发现了2个SNPs位点,在3个品系小型猪中的分布不同。     

乙烯利处理对葡萄花色苷合成相关基因表达的影响

利用荧光定量PCR技术分析‘京优’葡萄果实成熟过程中,花色苷生物合成途径相关酶基因mRNA转录水平的变化以及乙烯利处理对果皮中花色苷含量和关键酶基因转录水平的影响。结果显示,葡萄果实发育进入着色期,花色苷合成过程中主要相关基因(CHSs、CHIs、F3Hs、F3′H、F3′5′H、DFR、LDOX、UFGT、OMT和GST)和转录因子(MybA1和MybA1-2)转录水平都显著提高,其中UFGT、GST、MybA1和CHSs、CHIs、F3Hs基因家族中的CHS3、CHI2、F3H2随着花色苷合成而大量转录;乙烯利处理能够增强花色苷合成相关基因的转录,使其转录时期前移和转录水平提高,其中对GST、UFGT和MybA1转录的促进作用最明显。相关性分析表明,花色苷合成与一些花色苷合成相关基因(CHS3、CHI2、F3H2、F3′5′H、UFGT、GST)和转录因子(MybA1)的转录水平呈显著或极显著正相关;与CHS1、CHS2、CHI1、F3H1、DFR、F3′H、LDOX和OMT转录水平的相关性均不显著。本研究结果为进一步阐明花色苷生物合成机理和花色苷类色素的生产应用提供一定的理论依据。     

一种简单、快速的血和组织中DNA的提取法

一种简单、快速的血和组织中ＤＮＡ的提取法赵权,方刚,王咏梅（南京军区南京总医院临床分子生物学实验室,南京２１０００２）关键词ＤＮＡ提取通常由血液中提取ＤＮＡ的方法是：先得到淋巴细胞,再用蛋白酶Ｋ、ＳＤＳ消化,然后用酚氯仿抽提、乙醇沉淀。这里介绍的一种...     

山葡萄果实发育过程中花色苷和非花色苷酚成分及其含量的变化

以‘双红’山葡萄果实为试材,采用HPLC—MS／MS技术,分析山葡萄果实发育过程中果皮中花色苷和非花色苷酚成分及其含量的变化。结果表明,转色期前果皮内没有花色苷积累,随着果实的成熟,花色苷含量逐渐增加,成熟期的含量最高;非花色苷酚自花后2周至成熟期间的含量变化呈下降趋势。在山葡萄果实发育过程中检测出花色苷10种,其中双糖苷5种、单糖苷5种;非花色苷酚类物质检测到14种,其中苯甲酸类2种、肉桂酸类3种、黄烷-3-醇类2种、黄酮醇类5种、白藜芦醇类2种。     

γ-珠蛋白基因表达调控机制与临床应用

成人体内的血红蛋白是由2个 α-珠蛋白和2个β-珠蛋白组成的四聚体,负责氧气的运输。珠蛋白基因在基因组中成簇分布,其表达受到多种顺式作用元件和反式作用因子的共同调控,具有高度的组织特异性和发育时序性。β-地中海贫血和镰刀型细胞贫血是两种最常见的由于β-珠蛋白基因突变引起的常染色体隐性遗传病。γ-珠蛋白是一种主要在胎儿时期表达的类β-珠蛋白,同样具有载氧功能,但编码该蛋白的基因在上述贫血患者中却保持完好。因此,临床上优选的治疗方案之一是重新激活患者体内沉默的γ-珠蛋白基因的表达来弥补缺损的β-珠蛋白,从而缓解临床症状。目前已有多种能提高γ-珠蛋白基因表达的药物,在临床上用于治疗β-地中海贫血和镰刀型细胞贫血。随着基因组编辑技术的发展,针对这两种贫血的精准基因治疗研究也在进行中。本文着重介绍了参与γ-珠蛋白基因调控的转录因子和表观遗传修饰分子,以及目前相关的β-地中海贫血和镰刀型细胞贫血的临床治疗药物和手段,以期为深入阐明γ-珠蛋白基因的转录表达分子调控机制提供参考。     

环孢素A亲合素—Cyclophilin研究进展

环孢互Ａ亲合素广泛存在于生物体内,是细胞内环孢互Ａ的受体,具有催化另速蛋白质折叠和转运等生物学功能,ＣｙＰ与ＣａＡ结合抑制了钙离子,钙纱依赖的神经钱蛋白磷酸酶活性,民ＩＬ－２等Ｔ细胞增殖必需的一些细胞因子的转录,介导了ＣｓＡ免疫抑制作用。ＣｙＰ在自身免疫性疾病和器官移植排斥研究中具有应用价值。     

重组人亲环素A的表达、纯化及活性测定

将RT－PCR扩增得到的亲环素A（CyPA）基因片段插入原核表达载体pET11c中,得到重组质粒pET11／CyPA,转入大肠杆菌获得高效表达。Spe－PAGE分析表明,重组CyPA表达量占菌体可溶性蛋白的40％以上。经50％硫酸铵沉淀和DEAESepharoseCL－6B柱层析可纯化重组CyPA。用糜蛋白酶偶联法测定显示重组CyPA具有肽基脯氨酸顺／反异构酶活性。     

扩增阻滞突变系统的应用

扩增阻滞突变系统能检测ＤＮＡ分上任何点突变和小的缺失,其方法简单、快速、可靠,不依赖于任何特殊标记,越来越多地应用于遗传分析、突变鉴定、ＨＬＡ分型等方面。     

佛山市几种绿地植物氟化物时空累积特征

对佛山市的防护绿地、公园绿地、生产绿地及附属绿地等城市绿地系统中的大叶榕、细叶榕、芒果、白兰、垂叶榕和尖叶杜英的叶片和各绿地系统中的大气氟化物含量进行了测定,并对其相互关系进行了研究。结果表明:四季中各绿地系统的大气氟化物含量均值的大小依次为防护绿地的工业区、交通区、附属绿地、生产绿地和公园绿地;工业区的大气氟化物浓度约为公园绿地的3.4倍,不同城市绿地系统的1、2年生植物叶片含氟量均随时间的延长而逐渐增加;大气氟化物与叶片含氟量之间存在密切相关性,反映了植物氟化物的空间累积特征,其中细叶榕和垂叶榕的1年生和2年生叶片、芒果的1年生叶片、白兰的2年生叶片中的氟化物浓度能较好地表征城市绿地系统中大气氟化物的浓度。