服用肌酸对肌肉运动能力的影响

目的 研究增加肌酸摄入量后肌肉组织中肌酸和肌酸激酶（ｃｒｅａｔｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ,ＣＫ）含量的变化,探讨补充肌酸对肌肉工作能力的影响。方法 小鼠饲养１周后,取得肌肉提取液,用联乙酰－α奈酚反应测定法和逆向反应肌酸比色法分别测定肌酸和ＣＫ的含量。结果 实验组和对照组肌酸和ＣＫ含量经ｔ检验（Ｐ〈０．０１）,差异显著。结论 增加肌酸摄入量,能改善肌肉生化基础,增强组织细胞代谢能力。     

儿童中药制剂常用剂型及共性技术应用研究现状及思考

目前儿童中药制剂剂型选择、辅料优选、工艺设计、包装装置等成人化倾向比较普遍, 导致给药剂量不准、患儿用药顺应性差, 药物有效性和安全性难以保证, 药品不良反应事件频发。因此, 研究开发符合儿童用药特点的制剂, 突破儿童制剂关键技术迫在眉睫。分析了口服液、糖浆剂、颗粒剂等常用剂型, 探讨其在儿童中药制剂中的应用情况, 并针对儿童中药制剂中存在的药物溶解度低、服用口感差、给药剂量不准确等问题, 探讨增溶、掩味和定量给药等共性技术的特点及应用, 以期为儿童中药制剂的研发奠定基础并提供依据。      

丹参酮ⅡA-甘草酸自组装纳米胶束的制备及体外抗脑胶质瘤评价

  目的  将丹参酮ⅡA(Tanshinone ⅡA, Tan ⅡA)封装于甘草酸(Glycyrrhizic acid, GL)中自组装得到胶束, 考察其制备工艺并对产物进行表征, 同时进行体外抗胶质瘤细胞活性评价。  方法  采用薄膜分散法制备载丹参酮ⅡA-甘草酸自组装胶束(Tan ⅡA-GL/Micelle, TGM)。测定TGM的粒径、多分散系数以及Zeta电位；透射电子显微镜观察TGM的形态特征；高效液相色谱法测定TGM的包封率；透析袋法考察TGM的药物释放情况。倒置荧光显微镜考察TGM体外跨血脑屏障(Blood-brain barrier, BBB)的能力; 定量考察细胞摄取的具体机制; MTT法考察游离Tan ⅡA、游离GL和TGM分别对鼠源性脑胶质瘤细胞GL261的细胞毒性; 流式细胞仪检测游离Tan ⅡA、游离GL及TGM对GL261的细胞凋亡作用。  结果  薄膜分散法是制备载丹参酮ⅡA-甘草酸自组装胶束的最佳工艺方法; TGM粒径约为(121.87±5.85)nm, Tan ⅡA包封率为(88.54±14.27)%, 呈类球形形态, 制剂均一稳定; 可在5 h左右释放包载药物。TGM具有良好的跨BBB能力; 脑胶质瘤细胞摄取自组装胶束的机制为通过网格蛋白介导的胞吞来进行制剂的摄取; 对于脑胶质瘤细胞GL261具有良好的细胞毒性; 细胞凋亡实验结果表明, TGM相较于Free TanⅡA、Free GL组显著提高细胞凋亡水平, 促细胞凋亡率分别由12.28%、13.32%上升至31.16%。  结论  GL与Tan IIA通过自组装形成了纳米胶束，有效克服TanⅡA生物利用度低、水溶性差等缺点。TGM可有效跨越BBB，通过网格蛋白介导的胞吞途径被脑胶质瘤细胞摄取，具有良好的细胞毒性与促细胞凋亡能力。      

抑癌基因p15对人胆管癌细胞增殖影响与基因治疗适合靶点选择的相关性(英)

背景:对于胆管癌的治疗目前临床缺乏有效的诊治手段,抑癌基因替代疗法正逐步成为一种新型的、重要的抗肿瘤措施。P15作为一种重要的抑癌基因,发现可抑制肝癌细胞生长。但是对于其在胆管癌中的作用的相关研究尚在探索阶段,本研究为预防人胆管癌的发生提供一个理论框架。目的:通过构建稳定高表达抑癌基因p15的人胆管癌细胞模型,研究p15对胆管癌细胞增殖的影响。设计:完全随机,设立实验对照组,开放性实验研究。地点和对象:实验地点在南京医科大学生化与分子生物学研究室,研究对象为人胆管癌细胞系。干预:以稳定高表达p15的人胆管癌细胞模型为实验组,稳定表达空载体的细胞模型为对照组。将抑癌基因p15的cDNA构建到高效真核表达的质粒载体pcDNA3-neo中的EcoRⅠ/XbaⅠ位点,构建成p15真核表达质粒pcDNA3p15;通过脂质体法将pcDNA3p15质粒转染人胆管癌细胞系QBC939,经G-418筛选,获得稳定高表达p15的人胆管癌细胞模型及相应的表达空载体的细胞模型,并经Western分子杂交分析证实。主要观察指标:观察实验组和对照组细胞增殖速率、细胞克隆形成能力、细胞周期、c-Fos蛋白表达水平的差异结果:与对照组相比,p15高表达的人胆管癌细胞QBC939的增殖受到明显抑制;克隆形成实验结果表明,高表达p15人胆管癌细胞所形成的克隆明     

胸苷磷酸化酶在瘢痕疙瘩中表达的初步研究

由于胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase，TP，E．C．2.4.2．4)的酶促产物2-脱氧核糖有促血管生成的活性，也曾被称为血小板衍化内皮细胞生长因子(PD—ECCF)，其在体内的主要生物学活性是特异性地催化胸苷生成胸腺嘧啶和1-磷酸-2-脱氧核糖，为核酸补救合成途径提供原料，从而保证体内核酸代谢池的稳定。TP／PD—ECCF在许多肿瘤组织中均有异常的高表达，是促进肿瘤血管生成和肿瘤转移的一个重要因素，并在肿瘤的临床检测和治疗中有着潜在的应用价值。本研究通过逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)和免疫组化在核酸及蛋白水平检测TP在瘢痕疙瘩组织中的表达情况，以探讨其在瘢痕疙瘩发病机制中的可能作用。     

载三氧化二砷pH敏感型脂质体的制备及体内外评价

目的  将三氧化二砷制备为pH敏感型脂质体,并进行体外抗胶质瘤活性与体内安全性评价。方法  采用反相微乳法制备疏水性修饰的锰砷共沉淀,后采用乳化蒸发法进行负载制备脂质体(Liposome/MnAs)。测定Liposome/MnAs的粒径、PDI以及Zeta电位;透射电镜观察Liposome/MnAs的形态;ICP-MS测定包封率;透析袋法考察其体外不同pH条件下的释药特性;考察酸性条件下体外MRI成像能力。共聚焦显微镜观察鼠源性脑胶质瘤GL261细胞对Liposome/C6的摄取情况和胞内分布情况;MTT法考察游离三氧化二砷及Liposome/MnAs对GL261的毒性;流式细胞仪检测游离三氧化二砷及Liposome/MnAs对GL261细胞的凋亡作用。结果  制备的锰砷共沉淀具有疏水性,可较好地被氯仿溶解;Liposome/MnAs呈规整的类球型,粒径约为(286.43±6.41)nm,As包封率为(48.32±5.95)%;可在pH5.4条件下迅速响应释放As3+及Mn2+,具有良好的体外MRI成像能力。GL261细胞对C6标记的脂质体的摄取情况较好,且主要分布在细胞质。Liposome/MnAs抑制GL261细胞生长的作用(IC₅₀=2.99μmol/L)较游离三氧化二砷(IC₅₀=4.74μmol/L)有所上升;细胞凋亡实验也表明Liposome/MnAs较游离三氧化二砷有更好地促进GL261细胞凋亡的作用,促凋亡率由13.73%提高至21.42%。给药周期内,Liposome/MnAs对小鼠体内主要脏器无明显毒性。结论  以反相微乳法制备的锰砷共沉淀具有良好的疏水性,被脂质体包载制备为Liposome/MnAs,具有pH响应释药的特性,能有效增强GL261细胞对脂质体摄取。可增强三氧化二砷对胶质瘤细胞GL261的毒性,且具有一定的体内安全性。      

血管生成抑素的原核表达及多克隆抗体的制备

目的：研究CpG联合非复制重组痘苗病毒在肿免疫治疗中的效果。方法;构建非复制重组痘苗病毒v△11β75,联合应用免疫刺激寡核苷酸和重组痘苗病毒v△11β75进行肿瘤免疫治疗。结果：重组痘苗病毒v△11β75在人源143细胞中的不能正常繁殖,Southern-blot证实痘苗病毒天坛株HindⅢC,K片段间基因的缺失,在Wistar大鼠的Walker's肿瘤模型中,联合应用CpG-ODN和非复制痘苗病毒修饰的WRC256细胞裂解物进行免疫治疗,可以延长荷瘤鼠的生存期,肿瘤生长速度降低。结论：CpG-ODN可以增强非复制痘苗病毒修饰的肿瘤细胞裂解物的抗肿瘤治疗效果,为肿瘤免疫治疗提供了一种新的途径。     

IκB-α基因的克隆及其真核表达载体的构建

目的：克隆ＩκＢ－α基因，构建ＩκＢ－α的真核表达载体。方法：ＲＴ－ＰＣＲ扩增ＩκＢ－α的ｃＤＮＡ，然后将其克隆入真核表达载体ｐＳｈｕｔｔｌｅ，并转入大肠杆菌ＪＭ１０９。结果：通过ＰＣＲ和重组质粒酶切分析等方法，筛选出重组阳性克隆。结论：此重组质粒可用于真核表达等进一步研究。     

Expression of Lecithin: Cholesterol Acyltransferase and/or apoA-I Mediated by Recombinant Adeno-associated Virus in Myogenic Cell

Ａｓａｋｅｙｐａｒｔｉｃｉｐａｎｔｉｎｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｒｅｖｅｒｓｅｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ (ＲＣＴ)ａｎｄｐｌａｙｉｎｇａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｍａｔｕｒａｔｉｏｎｏｆＨＤＬａｎｄｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ     

p15、p16对人胆管癌细胞增殖影响的实验研究

目的 研究抑癌基因p15、p16对人胆管癌细胞的生长抑制作用。方法 将抑癌基因p15、p16的cDNA构建到真核表达的质粒载体pcDNA3-neo中形成p15真核表达质粒pcDNA3 p15及p16真核表达质粒pcDNA3 p16。通过脂质体法将重组质粒pcDNA3 p15,pcDNA3 p16质粒分别转染人胆管癌细胞系QBC939，获得稳定高表达p15或p16的人胆管癌细胞模型。用MTT法测定细胞生长曲线，流式细胞光度术测定细胞生长周期。结果 p15、p16高表达的人胆管癌细胞QBC939的增殖受到抑制，p15、p16均明显阻遏细胞由G1期向S期的转换。结论 抑癌基因p15、p16均参与了细胞周期的阻抑作用。