人原发性肝癌中p16基因表达及CpG岛甲基化状态的研究

目的　进一步探讨人原发性肝癌中 p16基因 m RNA转录水平变化与其基因启动子区 Cp G岛甲基化的关系 ,及其在肝癌发生中的意义。方法　采用狭缝印迹杂交检测 2 0例人原发性肝癌及相应的癌旁、远癌组织及 2例正常人肝组织中 p16基因 m RNA表达水平 ,以甲基化特异性 PCR分析各组织中 p16基因启动子区 Cp G岛的甲基化状况 ,并进行统计分析。结果　 2 0例人原发性肝癌中 14例 (70 % ) p16 m RNA水平比远癌组织显著降低 ;13例 (6 5 % )显示 p16基因启动子区 Cp G岛甲基化 ,其中 84 .6 % (11例 )伴 p16 m RNA转录水平降低。结论　人原发性肝癌中存在高频率的 p16基因表达失活 ,其主要机制可能是启动子区 Cp G岛甲基化抑制了基因的转录 ,在人原发性肝癌的发生发展中有重要作用。其临床诊断和治疗意义有待进一步深入研究。     

采用MDA-MB-231细胞膜进行表皮生长因子受体活性的检测

目的　探讨能否直接利用肿瘤细胞膜进行表皮生长因子受体 (Epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)催化活性检测。方法　首先筛选出EGFR基因表达水平相对较高的细胞株MDA MB 2 31,通过差速离心制备细胞膜 ,采用Westernblotting检测EGFR催化磷酸化的程度。结果　底物被磷酸化 ,加入特异性拮抗剂AG14 78后 ,磷酸化被抑制。结论　利用肿瘤细胞膜检测EGFR活性的设想是成立的 ,并且其方法简便、经济。     

人原发性肝癌中p16基因表达及CpG岛甲基化状态的研究

目的：进一步探讨人原发性肝癌中p16基因mRNA转录水平变化与其基因启动子区CpG岛甲基化的关系，及其在肝癌发生中的意义。方法：采用狭缝印迹杂交检测20例人原发性肝癌及相应的癌旁、远癌组织及2例正常人肝组织中p16基因mRNA表达水平，以甲基化特异性PCR分析各组织中p16基因启动子区CpG岛的甲基化状况，并进行统计分析。结果：20例人原发性肝癌中14例（70％）p16 mRNA水平比远癌组织显著降低；13例（65％）显示p16基因启动子区CpG岛甲基化，其中84．6％（11例）伴p16 mRNA转录水平降低。结论：人原发性肝癌中存在高频率的p16基因表达失活，其主要机制可能是启动子区CpG岛甲基化抑制了基因的转录，在人原发性肝癌的发生发展中有重要作用。其临床诊断和治疗意义有待进一步深入研究。     

人原发性肝癌胰岛素样生长因子2基因的印迹状态

目的研究人原发性肝癌中胰岛素样生长因子2(insulin like growth factor Ⅱ,IGF2)基因印迹状态,为进一步研究肝癌发生机理提供线索。方法用限制性片段长度多态性检测IGF2基因杂合状态,用逆转录-酶联聚合反应半定量检测IGF2基因在肝癌及癌旁组织中的表达,分析IGF2印迹状态、表达量与人原发性肝癌的关系。结果55．6％(10／18)的肝癌组织存在IGF2基因印迹的重新获得,与之相对的远癌组织有60％(6／10)也发生了IGF2基因印迹的重新获得。50％(9／18)的癌组织IGF2基因过度表达,但表达量与基因印迹的改变没有显著相关性。结论IGF2基因印迹的重新获得可能参与了肝癌的发生。     

非小细胞肺癌患者淋巴结、外周血及骨髓微转移分子诊断在肺癌外科治疗中的作用

目的 探讨检测肺癌患者区域淋巴结、外周血和骨髓中微转移在肺癌外科治疗中的临床意义,以及区域淋巴结、外周血和骨髓肺癌微转移三者之间的相关性。方法 应用巢式RT－PCR技术,对29例肺癌患者和11例肺良性病变患者的淋巴结、外周血和骨髓中CK19基因mRNA表达进行联合检测。结果 本实验建立的巢式RT－PCR技术的敏感性可达到10^-6。术前10例患者检测到外周血微转移,6例患者检测到骨髓肺癌微转移,101枚纵隔淋巴结中55枚检测到肺癌微转移。肺癌患者淋巴结、外周血和骨髓中微转移阳性检出率分别为54．5％、34．5％和20．7％,三者之间存在显著正相关（P＜0．05）,外周血和骨髓微转移与肺癌组织学类型、细胞分化程度及P－TNM分期均存在密切关系（P＜0．05或P＜0．01）。结论 RT－PCR法是一种特异性,敏感性均较高的肿瘤微转移检测方法;检测CK19 mRNA表达应用于肺癌微转移的分子诊断有助于选择外科手术适应证,并具有广阔的临床应用前景。     

p16INK4A和 p15INK4B对人肝癌细胞增殖和凋亡影响的研究

目的　为探讨抑癌基因 p16 INK4 A和 p15 INK4 B对 Rb基因状态不同的人肝癌细胞系增殖和凋亡的影响。方法　在分析细胞系遗传背景鉴定基础上采用脂质体将构建的 p XJ- p16、p XJ- p15重组质粒转染人肝癌细胞系 BEL74 0 2 (p16 / p15 Rb )和 SMMC772 1(p16 / p15 / Rb- )。应用 PCR、RNA斑点印迹、MTT、集落形成、流式细胞仪等技术检测外源性 p16和 p15基因、m RNA表达及其对肝癌细胞增殖、凋亡的影响。结果　经转染的 BEL74 0 2 - p16 ,BEL74 0 2 - p15细胞 ,分别存在外源性 p16、p15基因 ,在含外源基因细胞中相应的 m RNA表达增强 ;BEL74 0 2 - p15细胞生长速度、集落形成率显著低于对照细胞 BEL 74 0 2 (P<0 .0 1) ;细胞周期分析观察到与亲本细胞比较 ,BEL 74 0 2 - p15的 G1期细胞由 37.7%增高到 4 3.6 % ,S期细胞由 2 2 %下降到 13% (P<0 .0 5 ) ,并出现 G1亚峰 (凋亡峰 )。与此相反 ,BEL74 0 2 - p16细胞增殖未见抑制 ,细胞周期分布无明显差异 ,集落形成率也未见减少。此外 ,SMMC772 1- p16细胞增殖也无抑制。结论　外源性 p15 INK4 B具有抑制人肝癌细胞生长 ,诱导细胞凋亡的作用 ,其作用不受内源性p15影响。而 p16 INK4 A对肝癌细胞生长抑制的作用可能依赖于 RB途径的完整性。     

胰腺组织p15、p16抑癌基因CpG岛甲基化研究

Objective： To detect the aberrant methylation patterns in the CpG islands of p16 and p15 tumor suppressor genes, and to analyze its correlation with pancreatic carcinogenesis and with clinicopathological characteristics of patients with pancreatic cancer （PC）. Methods： The methylation-specific polymerase chain reaction （MSP） method was used to monitor methylation patterns in the CpG islands of p15 and p16 genes from 29 cases of PC and 3 cases of chronic pancreatitis （CP） paraffin-embedded tissue, as well as 2 cases of normal liver tissues and 12 cases of normal blood samples. Results： p15 and p16 genes were detected to show unmethylation patterns and no amplification using methylation-specific primers in control group. The aberrant methylation rates of p16 in carcinoma tissue and adjacent noncarcinoma tissue were 37.9% （11 of 29 cases） and 34.5% （10 of 29 cases） respectively. Of the 11 aberrant methylated samples, 5 showed complete methylation and 6 hemimethylation. The methylation rates of p15 gene in carcinoma tissue and adjacent noncarcinoma tissue were 27.5% （8/29） and 24.4% （7/29） respectively. Of the 8 aberrant methylated samples, 3 showed complete methylation and 5 hemimethylation. In 6 PC samples, aberrant methylation in CpG islands of both p15 and p16 genes existed simultaneously. The aberrant methylation patterns in CpG islands of p15 and p16 genes had no close correlation with the clinicopathological characteristics （age, sex, smoking, volume of primary tumor, differentiation, clinical stage and histological classification） of the patients with PC （P〉0.05）. Conclusion： The aberrant methylation in CpG islands of p15 and p16 genes could be regarded as an early molecular event in PC and had no close correlation with the clinicopathological characteristics of the patients with PC.