大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的体内外遗传毒性评价

目的:评价大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷(EG)的体内外遗传毒性,并比较体外细胞试验及大鼠体内实验评价结果的差异。方法:采用体外二维(2D)、三维(3D)细胞培养法分别构建2D、3D HepaRG细胞模型,造模成功后,分别将2D、3D HepaRG细胞分为空白对照组[0.5%二甲基亚砜(DMSO)]、丝裂霉素C组(阳性对照,0.1μg/mL)和EG低、中、高剂量组(10、50、200μg/mL),然后检测各组HepaRG细胞的微核形成率和尾DNA百分含量。将SD大鼠分为空白对照组(0.5%羧甲基纤维素钠)、甲磺酸乙酯组(阳性对照,200 mg/kg)和EG低、中、高剂量组(100、300、1 000 mg/kg),每组6只,连续灌胃给药15 d,每天1次;15 d后检测各组大鼠骨髓嗜多染红细胞、肝细胞的微核形成率及外周血淋巴细胞、肝细胞的尾DNA百分含量、尾距。结果:在体外2D HepaRG细胞模型中,与空白对照组比较,丝裂霉素C组HepaRG细胞的微核形成率和尾DNA百分含量均显著升高(P<0.01),EG各剂量组HepaRG细胞的微核形成率和尾DNA百分含量差异无统计学意义(P>0.05);在3D HepaRG细胞模型中,与空白对照组比较,丝裂霉素C组HepaRG细胞的微核形成率和尾DNA百分含量均显著升高(P<0.01或P<0.001),EG高剂量组HepaRG细胞的尾DNA百分含量显著升高(P<0.01)。在大鼠体内实验中,与空白对照组比较,甲磺酸乙酯组大鼠骨髓嗜多染红细胞、肝细胞的微核形成率和外周血淋巴细胞、肝细胞的尾DNA百分含量、尾距均显著升高(P<0.01),EG高剂量组大鼠外周血淋巴细胞尾DNA百分含量显著升高(P<0.01),EG各剂量组大鼠骨髓嗜多染红细胞、肝细胞的微核形成率和肝细胞尾DNA百分含量、尾距差异无统计学意义(P>0.05),但随剂量增加有升高趋势。结论:本研究结果提示在2D细胞模型中,EG未导致染色体断裂及DNA损伤,但3D细胞模型长期给药和体内重复给药结果均显示EG存在一定DNA损伤风险,故3D HepaRG细胞模型的评价结果更接近大鼠体内实验结果。     

西黄丸组分中药调节肿瘤微环境中Treg细胞PI3K/AKT通路的抗肿瘤作用机制研究

目的 研究西黄丸组分中药是否与西黄丸具有相似的抗癌作用及机制。方法 4T1乳腺癌细胞荷瘤建立动物模型,西黄丸低、中、高剂量（0.39、0.78、1.95 g/kg）和西黄丸组分中药0.3 mL （74.5 mg/kg榄香烯、2.73 mg/kg牛磺酸、0.52mg/kg麝香酮和4.75 mg/kg 11-羰基-β乙酯乳香酸混合物,对应于西黄丸高剂量组） ig给药14 d,剥离肿瘤组织,称质量,匀浆,制备单细胞悬液,免疫磁硃分离Treg细胞。流式细胞术和免疫组化检测肿瘤微环境中Treg细胞数量变化情况,Western Blotting检测肿瘤微环境中Treg细胞磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B （PI3K/AKT）蛋白表达情况,实时荧光定量PCR （qRT-PCR）检测肿瘤微环境中Treg细胞PI3K、AKT mRNA表达情况。结果 与模型组及西黄丸低、中剂量组比较,西黄丸组分中药组肿瘤质量显著减少（P<0.05）;流式细胞术和免疫组化结果显示,肿瘤微环境中Treg细胞数量显著减少（P<0.05）;Western Blotting和qRT-PCR结果显示,肿瘤微环境中Treg细胞PI3K、AKT蛋白及mRNA表达显著下降（P<0.05）。与西黄丸高剂量组比较,西黄丸组分中药组肿瘤质量、Treg细胞数量和PI3K、AKT蛋白及mRNA表达均明显升高（P<0.05）。结论 西黄丸组分中药通过抑制肿瘤微环境中Treg细胞PI3K/AKT信号通路的表达减少Treg细胞数量,进而表现与西黄丸相似的抗癌作用和机制。     

哺乳动物细胞染色体畸变试验的标准化与背景数据采集

染色体畸变试验作为保健食品、化妆品、药品、医疗器械上市前常规开展的毒理学试验项目,是检测化学物质对染色体数量和结构影响的基本方法。确立标准化试验方法并积累一定的背景数据,是试验系统和数据真实可靠性的有力保障,可为科研人员和审评专家的数据分析提供有力依据。首先就影响染色体畸变试验结果的因素进行简要综述,继而通过回顾国内外2012-2017年期间发表的47篇有关哺乳动物细胞染色体畸变试验的研究来讨论如何规范化试验条件,并以国家药物安全评价监测中心2002-2017年汇总的背景数据为例阐释建立历史背景数据的要点。总之,严格参考OECD指导原则开展规范化的染色体畸变试验并通过长期积累建立一套对照受试物的背景数据是临床前遗传毒性研究的关键环节,有利于更好地对药物等受试物的潜在致染色体损伤作用进行合理而有效的判断。     

Ames波动试验和GADD45a-GFP GreenScreen两种快速筛选方法评价大黄素和芫花素的遗传毒性

目的 使用Ames波动试验和GADD45a-GFP GreenScreen两种快速筛选方法,对有毒中药芫花和了哥王的主要单体成分大黄素和芫花素的遗传毒性进行评价。方法 （1）Ames波动试验：在非代谢活化（-S9）和代谢活化（+S9）条件下使用鼠伤寒沙门菌TA100开展基于96孔液态培养法的细菌回复性突变试验,大黄素和芫花素（终质量浓度范围均为0.1~10 μg/mL）与菌液充分混合后在37℃下培养72 h。（2）GADD45a GreenScreen高通量筛选试验：在非代谢活化（-S9）和代谢活化条件下（+S9）将表达GADD45a基因的TK细胞（GenM-T01和GenM-C01）与大黄素（0.13~32.0 μg/mL）和芫花素（0.07~16.0 μg/mL）分别作用48 h（-S9）和3 h（+S9）,之后通过酶标仪和流式细胞仪检测绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）的荧光强度。结果 有无代谢活化条件下,10 μg/mL大黄素均可诱导TA100的回复性突变率显著性升高（P<0.05、P<0.001）;代谢活化条件下,10 μg/mL芫花素可诱导TA100的回复性突变率显著性升高（P<0.001）,16.0 μg/mL芫花素诱导TK6细胞表达的GADD45a-EGFP荧光强度也超过了遗传毒性阈值（1.3倍）。结论 当前研究提示大黄素和芫花素为可疑遗传毒性,需要开展深入研究明确其遗传毒性及机制。Ames波动试验和GADD45a GreenScreen是良好的高通量筛选备选试验,可极大优化浩繁的药物的毒性筛选工作,尤其适宜诸如中药等成分和配伍复杂的药物。     

体内彗星实验联合微核实验检测化合物的遗传毒性

目的:考察体内彗星实验联合微核实验检测化合物遗传毒性的可行性。方法:以阳性化合物N-乙基-N-亚硝基脲为模型药物,取♂大鼠随机分为空白对照组和给药组[40 mg/(kg·d)],每组5只,灌胃给药3次,末次给药后3 h处死大鼠。进行彗星实验,收集大鼠外周血、肝、胃、睾丸组织经前处理制备成单细胞凝胶玻片进行电泳,使用Komet 6.0软件分析单细胞显微图像,每种组织分析100个细胞(胃组织50个细胞),计算尾部DNA百分含量。进行微核实验,收集大鼠骨髓细胞进行涂片,计数2 000个嗜多染红细胞(PCE)中含微核细胞(MNPCE)的数目及嗜多染红细胞微核率。结果:与空白对照组比较,模型药物可使大鼠外周血淋巴、肝、胃、睾丸细胞组织的尾部DNA百分含量明显增加(P<0.05),并可使大鼠骨髓嗜多染红细胞微核率明显升高(P<0.05)。结论:彗星实验可用于动物体内多种脏器遗传毒性的检测;微核实验可用于动物骨髓细胞的遗传毒性检测。     

中西医结合治疗糖尿病病足概述

糖尿病足是糖尿病的并发症之一,也是全球关注的医学热点。本文综述了国内近年来中、西医结合在糖尿病足治疗方面所作的研究报道,可为临床应用提供借鉴。     

运用小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验测定4,4′-二甲基二苯基碘鎓盐六氟磷酸盐的遗传毒性

目的研究运用小鼠淋巴瘤试验(MLA)对4,4′-二甲基二苯基碘鎓盐六氟磷酸盐(IHT-PI820)作为食品外包装上油墨使用安全性的评价。方法采用L5178Y细胞,处理3h,表达48h后测定突变细胞频率及小集落比例。同时进行添加和未添加代谢活化系统的试验,每个条件下设6个剂量组,阴性(二甲亚砜)、阳性(甲磺酸甲酯或环磷酰胺)对照组及IHT-PI8204个剂量组(37.5,75.0,150.0和300.0mg·L-1),在相同条件下,每组设定两个平行样。结果IHT-PI820各剂量组和阳性对照组的突变频率均显著性高于阴性对照组,并且IHT-PI820各剂量组间存在明确的剂量反应关系,小集落的比例也随剂量的升高呈上升趋势。结论IHT-PI820可以诱发小鼠淋巴瘤细胞Tk基因突变,故将其作为食品外包装上的油墨使用时,应严格按照相关的行业规定操作。     

中药与微量元素联合应用治疗冠心病的效果观察

目的探讨中药葛根、山楂、决明子与微量元素硒、锌联合应用治疗冠心病的效果。方法将上述成分制成内服液体制剂。225例冠心病住院患者服用该液体制剂,每次40mL,每日2次,疗程4周。观察患者治疗后心绞痛改善情况,心电图以及左室舒张功能的变化。结果中药葛根、山楂、决明子与微量元素硒、锌联合应用对心绞痛的总有效率为94.6%,心绞痛发作频率及持续时间比治疗前明显减少(P<0.001),心电图ST段、T波以及左室舒张功能均明显改善。结论中药葛根、山楂、决明子与微量元素硒、锌联合应用治疗冠心病疗效较好。     

龟分枝杆菌引起菌血症一例

患者 ,男 ,75岁 ,因胸闷、气急 ,不能平卧 ,彻夜未眠于1999年 12月 15日急诊入院 ,经用培氟沙星 ,头孢唑啉以及对症治疗 ,症状曾一度减轻好转 ,体温恢复正常。 2周后 ,患者突感畏寒、发热 ,体温达 38.9℃ ,查白细胞 12×10 9/Ｌ、中性粒细胞 0 .76 ,改用头孢他啶及其他综合性治疗 ,未见好转 ,2周后 ,出现低氧血症 ,低蛋白血症 ,多脏器功能衰竭死亡。既往患有慢性支气管炎 ,伴肺心病、糖尿病 ,曾多次住院治疗。此次入院前因不慎受凉 ,咳嗽 ,白色泡沫痰 ,无发热。发热期间抽血 5ｍｌ,直接注入血液增菌培养基中 ,35℃温育 ,3ｄ后 ,肉眼见有轻微…     

合并发作性脑部症状的遗传性运动感觉性神经病3例临床报道及文献复习

目的总结合并发作性脑部症状的遗传性运动感觉性神经病又称Charcot-Marie-Tooth病(CMT1X)的临床特征,结合文献复习探讨其出现发作性脑部症状的可能病因。方法回顾分析3例经基因确诊为CMT1X患者的临床和影像资料,结合中国类似的5例报道进行总结分析。结果共计8例CMT1X患者起病年龄在9~23岁,均伴有发作性脑部症状,同时合并有周围神经系统受累的临床症状体征或电生理表现,发作期6例患者头颅MRI提示双侧对称性脑白质病变。8例患者均存在缝隙连接蛋白β1(GJB1)基因突变。结论合并发作性脑部症状及周围神经病变患者临床需考虑CMT1X可能,出现发作性脑部症状的原因可能与缝隙连接通道关闭导致水弥散障碍有关。