聚肌苷酸胞苷酸诱导C57小鼠产生抗核抗体和抗线粒体抗体

目的:探讨聚肌苷酸胞苷酸(polyinosinic polycytidylic acid,polyI:C)注射C57小鼠对其自身抗体产生的影响.方法:50只6～8周龄雌性C57小鼠随机分为药物组和阴性对照组(n=25),药物组按5 mg/kg剂量腹腔注射polyI:C,每周注射2次,阴性对照组注射等量PBS,每4周每组取5只小鼠眼眶采血,间接免疫荧光法测定血清抗核抗体(ANA)和抗线粒体抗体(AMA)水平.结果:随着药物注射次数的增多,药物组在第8周ANA阳性率达到100%,最高滴度达到1:10 000,阴性对照组随着饲养时间的延长也出现ANA阳性,并且在12周达到100%,但是始终没有出现滴度为1:10 000的高滴度自身抗体;随着药物注射次数的增多,药物组血清AMA阳性率逐渐增高,16周达到80%,最高滴度达到1:10 000,对照组未出现AMA阳性.结论: polyI:C注射C57小鼠可以刺激机体产生自身抗体ANA和AMA,并且其对AMA的诱导具有特异性.     

Bradford比色法简便,快速测定微量蛋白

本文应用自制的Ｂｒａｄｆｏｒｄ蛋白定量试剂进行微量蛋白测定。根据Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ染料能与蛋白质定量结合的特点，通过比色测知蛋白浓度。蛋白含量在１０￣１００ｍｇ／Ｌ范围内。该法的实测值与吸光度间呈良好线性关系，敏感性可达１ｍｇ／Ｌ以下，稳定性、重复性均好，批内与批间试验无明显差异（ＣＶ〈６．５）。与经典的Ｌｏｗｒｙ蛋白测定法相比，Ｂｒａｄｆｏｒｄ比色法的敏感度和重复性均优于前者，两种方法的相关系数     

抗SSA、SSB抗体的荧光特点和临床意义

目的评价SSA、SSB抗体的荧光特点和临床意义,并探索在进行临床抗核抗体(ANA)筛查的过程中,鉴定这些抗体的必要性。方法对所有送检标本进行ANA和可提取性核抗原(ENA)检测,选择SSA、SSB阳性标本进行实验室和临床分析。结果在4 978个送检样本中,259个样本抗SSA、SSB阳性,阳性样本分为SSA+SSB-、SSA-SSB+和SSA+SSB+三组。与SSA+SSB-组和SSA-SSB+组比较,SSA+SSB+组ANA阴性样本比例(0.5%)明显降低(P<0.01),而高滴度样本比例(53.5%)明显增高(P<0.01)。SSA和(或)SSB阳性样本除呈现颗粒型荧光外,还出现各种荧光核型。SSA+SSB+组颗粒型荧光的比例明显高于SSA+SSB-和SSA-SSB+(P<0.01)。与SSA+SSB-组相比,SSA+SSB+组患有干燥综合征(SS)的比例明显增高,患有其他疾病的比例明显降低。SSA-SSB+组共8例患者,所患疾病各不相同。结论临床上检测SSA、SSB抗体具有必要性,联合检测SSA和SSB抗体可以提高SS诊断特异性。     

三种方法纯化生物工程抗体片段的比较

比较3种不同纯化体系纯化生物工程抗－HBsFab的效率和效果，寻求高效，经济的生物工程产品批量纯化方法，采用增菌发酵抗－HBsFab阳性克隆，超声破菌法制备Fab上清，分别缓冲平衡抗Fab -Sepharose亲合胶，链球菌蛋白G（prot.G)-Sepharose胶和Ni-NTA离子螯合胶，对Fab上清进行过柱纯化，紫外光检测目的蛋白得率，SDS－PAGE鉴定产物的纯度并用HBsAg包被ELISA检测其生物活性，结果显示，等容积不同类别的胶体对目的蛋白的纯化效率依次为：Ni-NTA离子螯合胶＞prot.G-Sepharose胶＞抗－FabSepharose亲合胶；在各胶体饱和结合能力之内，3种方法中获高纯度产品，在SDS－PAGE中呈现单一区带：HBsAg包被ELISA检测结果为3种方法纯化制备的Fab在抗原结合能力上未显示明显差别，提示，3种纯化方法各有优势和应用限制，Ni-NTA法在经济性，实用性和纯化效率上明显优于其他两种方法。     

人源抗-HBs Fab与IFN-α融合蛋白的克隆与原核表达

目的:构建人源单克隆抗-HBs Fab-IFN-α表达载体,探讨该融合蛋白原核表达的可行性及其生物学活性.方法:用PCR体外扩增目的基因IFN-α,单酶点插入已含人源抗-HBsFab基因的载体,插入点位于轻链基因3‘未端,利用酶切、PCR鉴定筛选正确插入的阳性克隆,转化大肠杆菌,挑选单克隆表达、纯化目的蛋白,用ELISA方法检测融合蛋白IFN-α的抗原性及其抗体亲和性,用WISH细胞检测IFN-α生物学活性.结果:利用插入了人源抗-HBs Fab基因及IFN-α基因的pBAD/gⅢA原核表达系统,成功表达了具生物活性的λ轻链与IFN-α的融合蛋白,其既具有与抗-HBs Fab相近的HBsAg的亲和力,又具有干扰素的活性.结论:λ轻链与IFN-α融合蛋白的成功表达表明,应用原核系统能够同时表达某些特异抗体和其介导的部分生物活性因子,是一种经济、有效的方法,为特异抗体及其介导融合蛋白的制备和临床应用提供了线索.     

不同泌乳期人乳中乳铁蛋白、溶菌酶、C3及免疫球蛋白的动态观察

<正> 近年来,国内外非常重视对于母乳的研究。随着免疫学的进展,强调了母乳中免疫成分对于小儿健康成长的积极作用。关于母乳中免疫球蛋白的研究,国内外已有报道,     

人源抗-HBs Fab表达系统的转换与效果

目的:重新克隆抗-HBs Fab基因于pBAD载体,改变诱导方式与表达条件,提升原核表达人源抗体片段的经济性与实用性.方法:经3次基因扩增,分步克隆,将Fd、Lc与pBAD/Lc基因先后插入到pBAD载体中,形成单载体双启动、定向表达形式.筛选双重插入菌落,阿拉伯糖诱导表达,PAGE和Western印迹鉴定抗-HBs Fab的表达效果.结果:酶切克隆载体,琼脂糖电泳证实Fd和pBAD/Lc基因的正确插入;PAGE可见明显的相对分子质量近50 000的蛋白区带,Western印迹显示该区带确为Fab;HBsAg特异印迹表明表达产物具有抗原结合活性.结论:比较原pComb3表达系统,改变后的pBAD表达系统明显提高了抗-HBs Fab的表达量(可达70 mg/L)并保持了抗体活性,为该抗体的批量制备与临床应用提供了条件.     

ANA和ENA检测在自身免疫性疾病中的应用评价

探讨抗核抗体和抗可溶性核抗原抗体的不同检测方法对自身免疫性疾病诊断的指导意义。回顾性分析2007年1月至2009年10月间在长征医院就诊的患者血清自身抗体的检测结果,549位患者,其中自身免疫病患者224例,非自身免疫病325例,所有患者血清同时检测ANA和ENA。以Hep-2细胞/肝组织为基质的间接免疫荧光法检测ANA,免疫印迹法检测ENA。两种检测方法产生4种检出模式:ANA+/ENA+、ANA-/ENA-、ANA+/ENA-和ANA-/ENA+。前两种模式共占检测的62.84%。ANA和ENA在自身免疫病患者中的阳性率(63.4%和58.5%)显著高于非自免病患者(16.9%和25.2%),ANA和ENA在自身免疫病组和非自身免疫病组间阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.01)。两检测结果仅在MCTD和SLE患者中存在相关性(P<0.01),在其他观察组中不存在相关性(P>0.05)。间接免疫荧光法相对费时,而且需要操作者具备一定的经验,作为初筛实验,ANA的检测较ENA有更高的灵敏度,两者联合检测则将有利于提高检测的灵敏度和可靠性。     

游离与总前列腺特异性抗原及其比值对前列腺癌鉴别的临床意义

目的了解总前列腺特异性抗原(T-PSA,总-PSA)、游离前列腺特异性抗原(F-PSA,游离-PSA)以及F-PSA和T-PSA比值(F-PSA/T-PSA,F/T),对良性前列腺增生(BPH)和前列腺癌患者的鉴别价值。方法采用微粒子酶免疫技术,测定BPH和前列腺癌患者的血清T-PSA、F-PSA,并计算F/T比值。结果123例BPH者的T-PSA为(6.5±3.1)μg/L,小于4μg/L占66.7%;F-PSA为(1.38±1.18)μg/L,小于0.93μg/L占63.4%;F/T为(21.2±3.3)%。59例前列腺癌患者的T-PSA为(36.41±22.17)μg/L,大于4μg/L的占93.2%;F-PSA为(2.26±2.18)μg/L大于0.93μg/L的占76%;F/T为(11.9±4.4)%。统计上F/T比值显著低于BPH组。T-PSA在4～10μg/L时,F/T比值差异更明显。结论以T-PSA4μg/L、F-PSA0.93μg/L为临界值有意义;对T-PSA在4～10μg/L时,结合应用F/T比值有利于对低T-PSA的前列腺癌患者及早作出鉴别。