用重组M2三联体抗原建立原发性胆汁性肝硬化免疫检测法

目的 建立原发性胆汁性肝硬化（PBC）特异性免疫学检测方法。方法 在重组质粒表达的基础上，用亲和层析进一步纯化重组蛋白后，用酶免疫吸附法检测M2抗体。结果 在PBC组11例患者哈部检出M2抗体，阳性率为1005，而非PBC组75例患者中无一检出M2抗体，本法与病理检查和临床诊断的相关性有非常显著意义（P＜0.01）。结论 本法检测M2抗体有较好的敏感性及特异性，为PBC的早期发现和临床诊断提供了有力的工具。     

TRAIL及其受体与隐球菌性脑膜炎的关联性研究

目的研究建立实时荧光定量（RFQ）-PCR法测定TRAIL及其受体DeR1、DcR2、DR4、DR5 mRNA含量的方法，探讨其在隐球菌性脑膜炎患者外周血单个核细胞中表达的检测价值，并分析隐球菌性脑膜炎患者细胞因子与TRAIL及其受体的相关性。方法设计特异性的引物和探针，以人基因GAPDH为内参照，用实时定量PCR的方法检测35例健康人和35例隐球菌性脑膜炎患者外周血单个核细胞中TRAIL及其受体mRNA的表达水平，采用ELISA方法检测血清IL-4、IL-10、TNF-α、IFN-γ浓度。结果与健康人比较，隐球菌性脑膜炎患者外周血单个核细胞中TRAIL mRNA的表达明显下降（P〈0．01）；受体DeR1 mRNA的表达显著升高（P〈0．01），受体DeR2、DR4、DR5 mRNA的变化无统计学意义。隐脑患者血清中IL-10显著升高（P〈0．01），与TRAIL的变化成负相关；IFN-γ显著下降（P〈0．01），与TRAIL的变化成正相关。结论隐球菌性脑膜炎患者TRAIL下降及其受体DeR1mRNA的表达明显升高，提示TRAIL及其受体DeR1可能参与隐球菌性脑膜炎的疾病进程，这为有效治疗隐球菌性脑膜炎提供了新的线索。     

人外周血淋巴细胞和粒细胞褪黑素受体亚型mt1 的检测

目的 检测人外周血淋巴细胞和粒细胞的褪黑素受体(MR)亚型mt1和其细胞内定位。方法 分离出健康成年人外周血淋巴细胞和粒细胞，应用RT-PCR技术分别检测其亚型mt1的mRNA，阳性产物用自动测序仪测序；同时将所分离的淋巴细胞和粒细胞制成细胞涂片，应用免疫组化染色检测mt1在淋巴细胞和粒细胞上的分布。结果 RT-PCR产物电泳显示：人外周血淋巴细胞和粒细胞均存在mt1阳性条带，片段长度约370bp，测序结果显示扩增产物与GenBank的人mt1受体亚型的基因序列相吻合；免疫组化结果显示：人外周血淋巴细胞和粒细胞均存在mt1受体蛋白，分布于细胞膜、细胞浆和细胞核，以细胞膜和细胞浆为主。结论 人外周血淋巴细胞和粒细胞中均存在MR的亚型mt1,外周血淋巴细胞和粒细胞为褪黑素作用的外周靶器官，提示褪黑素在生理及病理情况下可能对免疫系统有调节作用。     

巨噬细胞在动脉粥样硬化中的作用

心脑血管疾病的发病率、病死率日趋上升，动脉粥样硬化（AS）是其病理基础，对于 AS 的发病机制学说众多，目前认为AS 是一种慢性免疫炎性疾病，天然免疫和获得性免疫在 AS的发生和发展中起重要作用。动脉粥样斑块的主要特征包括动脉壁脂质沉积和免疫细胞浸润，而巨噬细胞是首先侵入动脉粥样损伤的炎性细胞，并且是最终形成粥样斑块的主要成分。有关巨噬细胞在 AS 发生、发展各阶段的作用一直是学者们关注的焦点，现就在 AS 各个阶段巨噬细胞所发挥的核心作用，特别是在预测与巨噬细胞相关的心血管事件发生时炎性生物标志物的作用进行综述。     

人源M2三联体靶抗原检测抗体诊断原发性胆汁性肝硬化

目的 探讨用人源M2三联体靶抗原检测M2抗体在原发性胆汁性肝硬化诊断中的应用价值。方法 间接免疫荧光法检测肝病患者，自身免疫病患者和健康体检者血清中的抗线粒体抗体。以人源M2三联体靶抗原建立的ELISA法与以猪心肌纯化组分作为抗原的免疫印迹法商业试剂盒检测M2抗体。结果 20例原发性胆汁性肝硬化（PBC）均检出M2抗体，28例不明原因肝病6例M2抗体阳性。ELISA法的敏感性和特异性优于经典的间接免疫荧光法和商业试剂盒。结论 以人源M2三联体靶抗原建立的ELISA法具有很高的特异性和敏感性，为原发性胆汁性肝硬化的诊断提供了简便、快速而有效的手段。     

原发性胆汁性肝硬化的动物模型

原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC) 是一种慢性炎症、器官特异性的自身免疫性肝病,以高滴度抗线粒体抗体(antimitochondrial antibodies,AMA)和肝内小胆管特异损伤为特征。位于线粒体内膜上参与能量代谢的丙酮酸脱氢酶复合体(pyruvate dehydrogenase complex,PDC)、侧链二氧酸脱氢酶复合体和2-氧戊二酸脱氢酶复合体是该病自     

自身免疫病患者外周血中B细胞激活因子基因表达水平的测定

目的　建立测定B细胞激活因子 (B lymphocytestimulator ,BlyS)mRNA含量的荧光定量反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法 ,并用来检测自身免疫病 [系统性红斑狼疮 (SLE)、类风湿关节炎 (RA) ]患者外周血单个核细胞 (PBMCs)中BlyS的基因表达水平 ,探讨BlyS基因表达水平与自身免疫性疾病发病机制的关系。方法　构建克隆载体 pMD18 T BlyS作为定量模板 ,基于TaqMan荧光探针技术 ,建立实时荧光RT PCR方法在GeneAmp 5 70 0型检测仪上定量检测 19例自身免疫病(SLE、RA)确诊病人、2 0例亚临床病人 (主要是抗核抗体阳性 )、8例其他对照性疾病患者 (自身抗体阴性 ,免疫球蛋白升高 )、2 0名正常健康献血者的外周血BlySmRNA表达含量。结果　 19例自身免疫病确诊病人的PBMCs中均有BlySmRNA的表达 ,范围从 9 7× 10 5～ 3 2× 10 8拷贝 /μgRNA ,均值为 (8 4± 7 9)× 10 7拷贝 /μgRNA ;2 0例亚临床病人的强度为 8 6× 10 4～ 3 8× 10 6拷贝 /μgRNA ,均值为 (1 3± 1 2 )× 10 6拷贝 /μgRNA ;2 0名正常健康人的强度为 5 5× 10 4～ 4 9× 10 5拷贝 /μgRNA ,均值为 (1 7± 1 4 )× 10 5拷贝 /μgRNA ;8例自身抗体阴性而免疫球蛋白升高的其他疾病患者的强度为 5 8× 10 5～ 3 5× 10 7拷贝 /μgRNA ,均值为 (1 2±     

自身抗体与胰腺癌相关性的检测与分析

目的 了解胰腺癌患者体内自身抗体阳性率、细胞内定位及荧光模式特点,初步确定自身抗体靶抗原,分析自身抗体与胰腺癌的相关性,探索自身抗体作为肿瘤标志物的可能性。方法 应用间接免疫荧光法(indirected immunofluorescence,IIF)检测55份胰腺癌以及60份不同年龄段正常人血清中自身抗体。提取人喉癌上皮细胞(Hep-2)蛋白抗原,采用蛋白质印迹法,对55份胰腺癌患者及52份正常人血清进行分析。结果 55份经IIF检查的胰腺癌患者中,32份(58.18％)自身抗体阳性,显著高于正常对照组26.67％(l6/60)的检出率(P相似文献   

微小RNA在免疫系统中作用机制的研究进展

miR作为一类内源性短序列[约21 ～25核苷酸(nt)]非编码的RNA,作用于基因的转录后水平,通过与mRNA的3’端非翻译区的特异性结合达到间接抑制翻译或直接降解mRNA的目的,进而参与调控机体细胞的增殖、分化、代谢、凋亡等生物学活动[1].近年研究发现,在免疫系统中,miR 对免疫细胞的生长、发育以及免疫功能的发挥都有着重要的作用.但是,目前对二者的具体关系尚未完全明确.我们对当前二者关系的研究阐述如下.     

原发性胆汁性肝硬化的动物模型

原发性胆汁性肝硬化（PBC）是一种女性多发的自身免疫性肝病,其具体的发病机制尚不清楚。随着对PBC的深入研究,越来越多的动物模型得以构建,包括基因突变型和异物诱导型动物模型。这些模型的构建,对研究PBC的发病机制有着十分重要的作用。此文就现阶段对PBC动物模型的研究作一综述。