高钠饮食对小鼠肾脏ROMK表达的影响

目的探讨高钠饮食对小鼠肾脏钾通道蛋白(renal outer medullary potassium channel, ROMK)表达的调控作用及其分子机制。方法雄性FVB小鼠分为两组,分别给与钠盐含量4%的高钠饮食和钠盐含量0.4%的普钠饮食2周,收集小鼠24h尿液,生化分析仪检测小鼠24h尿钠、尿钾情况,Western blot和Real time PCR分析高钠饮食小鼠肾脏ROMK表达,免疫沉淀探讨高钠饮食小鼠肾脏ROMK蛋白泛素化修饰水平。利用蛋白酶体抑制剂MG132处理高钠饮食小鼠三天,分别应用20S蛋白酶体活性检测法、Western blot和免疫沉淀分析MG132对高钠饮食小鼠肾脏蛋白酶体活性、ROMK蛋白表达及泛素化修饰水平的影响。结果高钠饮食2周后,小鼠24h尿量、尿钠及尿钾排泄明显增加,肾脏ROMK蛋白及其mRNA表达显著增高,ROMK蛋白泛素化水平显著降低。应用蛋白酶体抑制剂MG132后,高钠饮食小鼠肾脏蛋白酶体活性降低,ROMK蛋白表达及泛素化修饰水平均增加。结论高钠饮食引起尿钾排泄增多与上调小鼠肾脏Romk基因转录水平、下调ROMK蛋白泛素化修饰水平,抑制ROMK蛋白降解,增加小鼠肾脏ROMK表达相关。     

混合谱系激酶结构域样假激酶在小鼠脑缺血后脑水肿组织中的表达

目的:研究混合谱系激酶结构域样假激酶(MLKL)在C57BL/6J小鼠脑缺血后脑水肿组织中的表达及作用。方法:通过向野生型(WT)和MLKL敲除(MLKL~-/~-) C57BL/6J小鼠尾静脉注射浓度为6 mg/ml玫瑰红溶液(剂量为40 mg/kg)构建缺血后脑水肿模型。一周后取组织,利用免疫荧光染色技术观察MLKL在缺血后脑水肿区的表达和分布,Western Blot检测MLKL在小鼠缺血后脑水肿区的表达水平,采用免疫电镜技术观察MLKL的亚细胞水平定位,苏木精-伊红染色(HE)观察组织缺血坏死及水肿情况。结果:免疫荧光染色结果显示正常WT小鼠大脑皮质无MLKL表达,缺血后脑损伤区的WT小鼠有大量MLKL阳性细胞,MLKL主要表达于GFAP阳性星形胶质细胞; Western Blot结果显示脑缺血后脑损伤区的MLKL表达显著增加;免疫电镜结果显示脑水肿区域血管周围的星形胶质细胞内有大量MLKL蛋白胶体金颗粒分布; HE染色结果显示MLKL敲除可显著减轻脑水肿程度。结论:脑缺血可上调WT小鼠缺血部位MLKL表达,提示MLKL可能参与缺血后的脑水肿发生。     

楮实子对APP/PS1双转基因小鼠海马神经发生的影响

目的探讨楮实子对APP/PS1双转基因小鼠海马神经发生的影响。方法 40只APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、阳性药组(10 mg/kg多奈哌齐)及楮实子低、高剂量组(1.8、3.6 g/kg),C57BL/6小鼠作为对照组,每组10只,灌胃给药6周。然后,Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,TUNEL法检测小鼠海马区神经细胞凋亡,免疫荧光染色法检测小鼠海马区NeuN/BrdU阳性细胞表达,Western blot法检测GSK-3β、β-catenin蛋白表达。结果与模型组比较,楮实子高剂量组学习记忆能力显著改善(P<0.05),凋亡细胞数显著减少(P<0.01),NeuN/Brdu阳性细胞数显著增加(P<0.01),GSK-3β蛋白表达显著降低(P<0.05),β-catenin蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论楮实子能促进APP/PS1双转基因小鼠海马神经发生,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。     

二苯乙烯苷的雌激素样作用及其对性未成熟小鼠子宫ER表达的影响

目的:探讨二苯乙烯苷(TSG)的雌激素样作用,以及其对性未成熟小鼠子宫雌激素受体(ER)表达的影响。方法:将60只性未成熟雌性昆明种小鼠随机分为正常组,阳性对照组(戊酸雌二醇,0.18 mg/kg),TSG低、高剂量组(50、150 mg/kg),TSG低、高剂量+戊酸雌二醇组(剂量同单用组)。正常组小鼠灌胃等体积水,各给药组小鼠灌胃相应药物溶液0.2 mL/10 g,早晚各1次,连续5d。末次给药次日,测定并计算各组小鼠子宫指数和体质量增幅;采用酶联免疫吸附测定法检测其血清雌激素[雌二醇(E_2)、黄体生成素(LH)、卵泡雌激素(FSH)]含量;采用苏木精-伊红染色法观察其子宫组织形态学特征,并检测子宫管径和子宫内膜厚度;采用免疫组织化学染色法检测其子宫组织中ER(ER-α、ER-β)的表达水平。结果:正常组小鼠子宫肌层排列平行、紧密,子宫上皮呈单层柱状,ER-α、ER-β表达较少;各给药组小鼠子宫管径、内膜及上皮均不同程度地增大、增厚或增生,ER-α、ER-β表达有所变化。与正常组比较,各给药组小鼠子宫指数(阳性对照组、TSG高剂量组、TSG各剂量+戊酸雌二醇组)、体质量增幅(阳性对照组、TSG高剂量组、TSG低剂量+戊酸雌二醇组)、子宫管径及内膜厚度(阳性对照组、TSG低剂量组、TSG各剂量+戊酸雌二醇组)、ER-α的表达量(阳性对照组、TSG各剂量+戊酸雌二醇组)、ER-β的表达量(阳性对照组、TSG高剂量组+戊酸雌二醇联用组)均显著升高,血清LH(阳性对照组、TSG高剂量组)、FSH(TSG低剂量+戊酸雌二醇组)水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);TSG各剂量+戊酸雌二醇组小鼠子宫指数、子宫管径及内膜厚度、ER-α及ER-β的表达量以及TSG低剂量+戊酸雌二醇组小鼠体质量增幅、血清E_2含量均显著高于TSG同剂量单用组(P<0.05或P<0.01);TSG各剂量组小鼠子宫指数、子宫管径及内膜厚度、ER-α及ER-β的表达量,TSG各剂量+戊酸雌二醇组小鼠子宫管径、ER-β的表达量以及TSG低剂量组小鼠体质量增幅均显著低于阳性对照组,而TSG各剂量+戊酸雌二醇组小鼠血清LH水平均显著高于阳性对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:TSG可一定程度地增加性未成熟小鼠的子宫指数和体质量,并调节其体内雌激素水平,增加子宫管径及内膜厚度,上调子宫组织中ER的表达,具有一定的雌激素样作用。但这种作用弱于戊酸雌二醇,且两者联合使用可能会拮抗戊酸雌二醇的作用。     

小叶三点金提取物的抗炎作用及其机制研究

目的:研究小叶三点金提取物的抗炎作用及其机制,为该药用植物的进一步开发应用提供实验依据。方法:采用二甲苯、冰醋酸、角叉菜胶建立小鼠急性炎症模型,以地塞米松为阳性对照(0.005 g/kg),考察灌胃不同剂量小叶三点金提取物(50、30、15g/kg)对二甲苯致正常小鼠和肾上腺摘除小鼠耳肿胀、冰醋酸致正常小鼠腹腔毛细血管通透性增加、角叉菜胶致正常小鼠和肾上腺摘除小鼠足肿胀的抑制作用,并对角叉菜胶致炎模型肾上腺摘除小鼠足趾炎性部位中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)水平进行检测;另设空白组小鼠为对照(灌胃等体积水)。结果:与空白组比较,小叶三点金提取物高、中剂量组正常小鼠和肾上腺摘除小鼠耳肿胀度均显著降低,而耳肿胀抑制率显著升高;小叶三点金提取物各剂量组正常小鼠腹腔毛细血管通透性均显著降低;小叶三点金提取物高、中剂量组正常小鼠和肾上腺摘除小鼠足肿胀度均显著降低,而足肿胀抑制率显著升高(P<0.05或P<0.01);小叶三点金提取物高、中剂量组肾上腺摘除小鼠足趾炎性部位中MDA、NO水平均显著降低,SOD水平均显著升高(P<0.05)。结论:小叶三点金提取物对小鼠急性炎症有明显抑制作用;其抗炎作用机制与降低MDA、NO水平并提高SOD水平有关,且该抗炎作用的发挥不依赖于下丘脑-垂体-肾上腺轴系统。     

参芍益气养血颗粒对小鼠实验性再生障碍性贫血的改善作用及骨髓抑制的防治作用研究

目的:研究参芍益气养血颗粒对小鼠实验性再生障碍性贫血(AA)的改善作用及骨髓抑制的防治作用。方法:将72只小鼠随机分为空白组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、阳性对照组(益血生胶囊,以内容物计为0.625 g/kg)和参芍益气养血颗粒低、中、高剂量组(以生药量计分别为1.26、7.56、15.12 g/kg),每组12只。除空白组外,其余各组小鼠均使用60Co-γ射线照射联合环磷酰胺(CTX)腹腔注射复制AA模型。造模成功后,每天灌胃给药1次,连续给药7 d。给药6 d后,将小鼠置于跑步机上进行力竭实验,测定其力竭距离和力竭时间。给药7 d后,测定各组小鼠外周血象[红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)数目及血红蛋白(HGB)含量]变化;并通过血液涂片后测定其网织红细胞百分比(Ret),骨髓涂片后测定其骨髓有核细胞(BMNC)数目。另取90只小鼠,分组和给药剂量设置同前,每组15只。每天灌胃给药1次,连续给药12 d。给药3 d后,除空白组外,其余各组小鼠开始在给药同时腹腔注射5-氟尿嘧啶复制骨髓抑制模型。给药结束后,同法测定各组小鼠外周血象、Ret和BMNC数目。结果:在AA模型中,与空白组比较,模型组小鼠跑步力竭距离和力竭时间显著缩短(P<0.01),同时外周血中RBC、WBC、PLT数目和HGB含量以及Ret、BMNC数目显著降低(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,阳性对照组和参芍益气养血颗粒中、高剂量组小鼠的跑步力竭距离和力竭时间显著延长(P<0.05或P<0.01),阳性对照组和参芍益气养血颗粒高剂量组小鼠4项外周血象指标、Ret和BMNC数目以及参芍益气养血颗粒中剂量组小鼠Ret均显著升高(P<0.05或P<0.01)。在骨髓抑制模型中,与空白组比较,模型组小鼠外周血中WBC、RBC、PLT数目和Ret以及BMNC数目显著降低(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,阳性对照组和参芍益气养血颗粒高剂量组小鼠外周血中WBC、RBC、PLT数目和Ret、BMNC数目以及参芍益气养血颗粒中剂量组小鼠外周血中RBC数目、Ret和BMNC数目均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:参芍益气养血颗粒对小鼠AA具有一定的改善作用,并且对小鼠骨髓抑制具有一定的防治作用。     

黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选体系的建立

目的建立黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase, XOD)抑制剂筛选体系。方法应用理化法,测定体外XOD活性、血尿酸、血清XOD活性、组织XOD活性及肝肾功能有关血液指标;病理分析肝脏肾脏的损伤情况。结果选择牛奶来源XOD 3 U·L~(-1),黄嘌呤(Xanthine, XA) 50μmol·L~(-1),37℃,pH 7.4, 20 min为XOD抑制剂体外高通量筛选的最适条件。单次灌胃次黄嘌呤联合皮下注射氧嗪酸钾诱导ICR小鼠,血尿酸水平一过性升高;以血尿酸变化曲线和血尿酸-时间曲线下面积评价急性高尿酸血症小鼠模型。ICR小鼠连续皮下注射氧嗪酸钾血尿酸平稳升高,成模率约70%;以血尿酸水平评价慢性高尿酸血症小鼠模型。上述2种模型动物的血清和组织XOD活性均未见明显变化,肝脏肾脏均未见明显损伤。结论 XOD抑制剂体外筛选方法与急性高尿酸血症小鼠模型、慢性高尿酸血症小鼠模型等体内实验方法相互验证,形成基于分子靶点XOD的抗高尿酸血症药物研发的实验体系。     

不同级别蛹虫草子实体菌粉对免疫低下小鼠非特异性免疫功能的调节作用比较

目的比较超Ⅴ星虫草和Ⅰ星虫草子实体菌粉对地塞米松诱导的免疫低下小鼠非特异性免疫功能的调节作用。方法 50只健康♂BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、超Ⅴ星虫草(1 g·kg~(-1))组、Ⅰ星虫草(1 g·kg~(-1))组和虫草胶囊(阳性药,1 g·kg~(-1))组。除对照组外,其余各组于实验d 22、23腹腔注射地塞米松20 mg·kg~(-1)。末次给药后24 h解剖,测血常规,计算脏器指数,分析NK细胞和腹腔巨噬细胞功能及细胞因子分泌水平。结果地塞米松会导致小鼠体质量明显下降,脏器指数降低以及免疫细胞功能降低等免疫低下状态。超Ⅴ星虫草和Ⅰ星虫草均可明显拮抗地塞米松导致的免疫功能低下,在提高脾脏指数,增强NK细胞杀伤能力,提高巨噬细胞分泌TNF-α水平方面,超Ⅴ星虫草作用明显优于Ⅰ星虫草。结论超Ⅴ星虫草对地塞米松诱导的免疫功能低下的各个环节的改善作用均明显优于Ⅰ星虫草。