葛根素对小鼠胚胎干细胞源的心肌细胞T管发育的影响

目的:探讨葛根素(puerarin)对小鼠胚胎干细胞分化的心肌细胞横管(T管)发育的影响。方法:采用经典的悬滴法诱导小鼠D3系胚胎干细胞向心肌细胞分化,在分化过程中持续使用葛根素(100μmol/L)处理;应用Di-8-ANEPPS活细胞染色观察T管的形成;Real-time PCR测定T管发育相关蛋白的mRNA表达情况。结果:⑴在分化16 d和20 d,葛根素组中有T管的心肌细胞百分比分别为(39.56±1.02)%和(39.93±2.35)%,明显高于对照组(25.28±1.27)%和(29.57±1.54)%,(P<0.01);⑵葛根素显著上调T管发育相关基因caveolin-3、amphiphysin-2和junctophinlin-2的转录水平。结论:葛根素能促进小鼠胚胎干细胞源的心肌细胞中T管的发育,该作用可能与上调T管发育相关基因表达有关。     

基于脂类代谢组学研究对乙酰氨基酚对小鼠药物性肝损伤的早期毒性

目的:基于脂类代谢组学研究对乙酰氨基酚(APAP)对小鼠的早期肝损伤毒性,为寻找潜在生物标志物提供参考。方法:将20只小鼠随机分为正常组和APAP肝损伤组,每组10只。APAP肝损伤组小鼠腹腔注射APAP 300 mg/kg建立急性肝损伤模型,正常组小鼠腹腔注射等体积生理盐水。1 h后取血并分离血浆,采用超高效液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱(UPLC-Triple-TOF-MS)法检测小鼠血浆代谢产物进行代谢组学分析,采用主成分分析(PCA)、偏最小二乘法分析(PLS-DA)以及正交偏二乘法分析(OPLS-DA)区分组间代谢轮廓的整体差异,并根据HMDB、Metlin、LIPID MAPS数据库对脂类代谢物进行筛选和鉴定,同时检测小鼠血浆中APAP水平变化。认定OPLS-DA分析中变量权重值(VIP)大于1且P<0.05的脂类代谢物为差异代谢物,并将脂类差异代谢物与血浆中APAP水平进行相关性分析。结果:PCA、PLS-DA以及OPLS-DA结果显示,正常组和APAP肝损伤组样品点位于图形不同的区域,具有良好的区分度。APAP肝损伤组与正常组比较,血浆中5个脂肪酰类代谢产物水平出现显著的升高或降低,8个甘油磷脂类代谢产物水平均显著降低,1个鞘脂类代谢产物水平显著上升;9-硫杂硬脂酸、十四烷二酸、9-过氧化氢-10,12-十八碳二烯酸、三-肉豆蔻酰基肉碱(脂肪酰类)和Scyphostatin A(鞘脂类)水平与血浆中APAP水平显著相关。结论:APAP染毒1 h后血浆脂类代谢组学显示异常,共发现14个相关脂类差异代谢物,其中5个与血浆中APAP水平显著相关。     

亚硝酸钠对脑梗死后周细胞及室管膜下区神经发生的影响

目的探讨亚硝酸钠对脑梗死后周细胞及室管膜下区神经发生的影响。方法采用线栓法制备小鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。采用随机数表法将66只小鼠随机分为假手术+溶剂组,脑梗死+溶剂组,脑梗死+亚硝酸钠组。脑梗死后第3天测定小鼠脑含水量及缺血周围区PDGFRβ~+周细胞的数量,脑梗死后第7天采用免疫荧光测定BrdU~+/DCX~+神经母细胞,脑梗死后第1、3和7天采用五分法评估小鼠神经功能缺损。结果脑梗死后第3天,与假手术+溶剂组相比,脑梗死+溶剂组小鼠脑含水量明显增多,缺血周围区PDGFRβ~+细胞数明显减少(P0.05);应用亚硝酸钠后,脑含水量明显降低,PDGFRβ~+细胞数明显增多(P0.05)。脑梗死后第7天,与假手术+溶剂组相比,脑梗死+溶剂组小鼠BrdU~+/DCX~+神经母细胞的数量均明显增多;与脑梗死+溶剂组相比,脑梗死+亚硝酸钠组小鼠室管膜下区的BrdU~+/DCX~+神经母细胞的数量均明显增多(P0.05)。脑梗死后第1和3天,脑梗死+溶剂组和脑梗死+亚硝酸钠组小鼠的神经功能缺损评分差异无统计学意义(P0.05);但在第7天,脑梗死+亚硝酸钠组小鼠的神经功能缺损评分较脑梗死+溶剂组明显降低(P0.05)。结论亚硝酸钠可促进脑梗死后周细胞的存活和室管膜下区神经发生。     

Nestin-LacZ转基因小鼠脊髓损伤动物模型的建立及评价

[目的]建立标准的Nestin-LacZ转基因小鼠脊髓损伤动物模型及评价体系。[方法]采用NestinLac Z转基因小鼠18只,随机分为三组,实验组2个,对照组1个。2个实验组均采用自行研制的啮齿类动物脊髓损伤模型打击器,质量为10 g的打击棒,A实验组用接触直径为2.0 mm的打击棒杆头压迫,压迫时间为3 min(A组,6例);B实验组按照实验设定的高度10.0 mm实施打击(B组,6例);对照组仅行椎板切除,不打击(C组,6例)。分别于术前,术后第1、2、3、4、5、6周进行转基因小鼠BBB运动评分,取出脊髓组织后,行脊髓组织HE染色。[结果]Nestin-LacZ转基因小鼠不同的脊髓损伤模型在各个时间点上BBB评分差异有统计学意义(P0.05),A组在脊髓损伤造模术后2周,后肢功能开始恢复,而B组至术后6周均无后肢功能恢复,对照组无功能障碍。[结论]啮齿类动物脊髓损伤模型打击器采用持续慢性压迫脊髓可成功建立Nestin-Lac Z转基因小鼠稳定、理想的急性脊髓损伤模型。     

自主跑笼运动对SAMP8小鼠精神行为及血清促肾上腺皮质激素、皮质醇的影响

目的观察自主跑笼运动对快速老化P8小鼠精神行为学及血清促肾上腺皮质激素(ACTH和皮质醇(Cor)水平的影响。方法雄性3月龄快速老化P8小鼠20只,随机数字表法分为运动组和非运动组,每组10只;抗快速老化R1小鼠5只为对照组。所有小鼠均给予同样标准环境饲养,运动组施加自主跑笼运动训练(每周5天)。2月后采用自主活动仪和高架十字迷宫行为学测试评估小鼠精神行为学变化,同时放射免疫方法检测小鼠血清ACTH及Cor水平。结果快速老化P8小鼠非运动组与同月龄抗快速老化R1小鼠对照组比较,自主活动次数(104.4±33.3,150.0±39.9)和高架十字迷宫开放臂停留时间(157.1±44.9,202.8±39.2)均显著减少(P0.05)。快速老化P8小鼠自主活动次数运动组(159.6±66.6)与非运动组(104.4±33.3)比较显著增加(P0.05);高架十字迷宫测试开放臂停留时间运动组(173.6±51.4)与非运动组(157.1±44.9)比较,差异无统计学意义(P0.05)。快速老化P8小鼠非运动组与抗快速老化R1小鼠对照组比较,血清ACTH(28.49±8.24,47.86±9.52)及Cor水平(3.19±0.88,5.01±0.79)均显著减少(P0.05)。快速老化P8小鼠运动组(50.35±6.64,5.23±1.42)较非运动组(28.49±8.24,3.19±0.88)均显著增高(P0.05)。结论 5月龄快速老化P8小鼠有明显精神行为异常,自主跑笼运动对快速老化P8小鼠精神行为异常有一定改善,可能是通过上调下丘脑-垂体-肾上腺轴活性而实现的。     

基于深度学习的轴突三维图像分割与重构

目的:设计适用于神经轴突荧光显微图像三维分割任务的深度神经网络(DNN),提高神经轴突自动重构的准确性。方法:将三维图像分割任务转化为在3个正交投影方向上的二维分割任务,在开源网络DeepMACT的基础上,利用多通道输入降低压缩维度上的信息损失,利用神经轴突骨架加权的损失函数训练以强调神经骨架连贯性,提出SWCUnet。采用转盘共聚焦荧光显微成像采集的小鼠大脑稀疏标记神经元神经轴突部分49个图块作为数据集,以人工标注的形态重构结果作为金标准训练网络。对网络模型输出的二维分割图像进行三维复原,并以三维分割结果输入MOST算法进行自动重构。结果:SWCUnet (32通道,骨架权重5)三维分割F1-score达到0.662,较DeepMACT提升0.132。基于三维分割结果的自动重构F1-score达到0.80,比基于原图的自动重构提升0.24。结论:SWCUnet可以较好地提取高分辨荧光显微图像中的神经轴突特征,输出的三维分割结果实现了大幅提升神经轴突骨架形态的自动重构准确率的目标,为小鼠大脑稀疏标记神经元全脑成像数据的大规模自动化重构提供了一种新工具。     

对NOD/SCID和SCID小鼠皮下接种的黑色素瘤生长特性比较

目的比较两种常用免疫缺陷小鼠皮下接种黑色素肿瘤细胞后肿瘤生长及小鼠生存情况。方法 7和17周龄的NOD/SCID及SCID小鼠左腋下接种小鼠黑色素瘤细胞,接种第8天开始隔1天测量肿瘤长径和短径,计算肿瘤体积,每天观察小鼠生存情况,记录生存时间,待1组小鼠完全死亡结束实验。结果 a.7周龄不同品系小鼠接种小鼠黑色素瘤后,NOD/SCID较SCID小鼠肿瘤生长速度更快、中位生存期更长;17周龄2种品系小鼠肿瘤生长情况无显著性差异。b.同品系NOD/SCID和SCID小鼠接种小鼠黑色素瘤后,小周龄较大周龄肿瘤生长速度更快,中位生存期更短。结论与7和17周龄SCID小鼠及17周龄NOD/SCID小鼠相比,7周龄NOD/SCID小鼠肿瘤生长情况更好,生存期较为适当,可能更适合作为黑色素瘤小鼠模型的实验动物。     

三氯生对高脂膳食小鼠肝脏的组织病理学损伤

为探讨三氯生对髙脂膳食小鼠肝脏的影响,将40只SPF级昆明小鼠随机分为空白对照(生理盐水)组、溶剂对照(DMSO)组、118.75 mg/kg、237.5 mg/kg剂量组,用高脂饲料喂养小鼠,给各组小鼠用对应的溶液持续灌胃3周,取其肝脏进行HE切片染色,观察肝脏的形态学改变。结果显示,小鼠的生理状态不佳,肝组织发生明显的病变。提示三氯生对高脂饮食昆明小鼠的肝脏具有毒性作用,且浓度越高毒性越强。     

胚胎期砷暴露对成年小鼠海马神经炎症反应的影响

目的研究胚胎期砷暴露对成年小鼠海马组织神经炎症反应相关基因表达的影响,探讨砷影响认知发育的毒理学机制。方法 7周龄雌性和雄性ICR小鼠以2∶1的比例合笼交配,受孕小鼠随机分为4组,对照组饮用去离子水,低、中、高砷暴露组分别饮用含0.15 mg/L,1.5 mg/L,15 mg/L三氧化二砷的去离子水,攻毒处理至仔鼠出生,试验组母鼠停止砷暴露。各组分别选12只雌性仔鼠,于65日龄麻醉处死并分离海马组织,Trizol法提取总RNA,采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测相关基因的表达。结果与对照组相比,低浓度砷暴露组小鼠海马组织同种异体移植炎性因子-1(Aif-1)的表达显著升高(P<0.01);胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达在低、中、高浓度砷暴露组均升高;CC趋化因子配体3(CCL3)的表达在中浓度砷暴露组中显著升高(P<0.05);N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)亚基NR1的表达在中浓度砷暴露组中显著降低(P<0.05);NR2B的表达在中浓度砷暴露组中显著降低(P<0.01)。结论胚胎期砷暴露会引起小鼠成年期海马组织胶质细胞活化继而释放大量促炎症因子,并降低NMDAR有关亚基的表达,这是砷影响小鼠认知发育的分子机制之一。     

半枝莲多糖SBP-2A对小鼠肝癌H22细胞增殖的抑制作用

摘要 目的 探讨半枝莲多糖SBP-2A 对小鼠肝癌H22细胞增殖及凋亡的影响。方法 体外培养小鼠肝癌H22细胞分为阴性对照组(不加任何药物)、阳性对照组(黄芪多糖200μg/mL)、低剂量治疗组(半枝莲多糖SBP-2A50μg/mL)、中剂量治疗组(半枝莲多糖SBP-2A100μg/mL)、高剂量治疗组(半枝莲多糖SBP-2A200μg/mL)。MTT比色法检测各组细胞增殖的抑制活性。HE染色观察各组细胞形态学变化。流式细胞术AnnexinV/PI双染法检测各组细胞凋亡水平。蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测各组细胞B 细胞淋巴瘤2基因(B cell lymphoma 2gene,Bcl-2)、BCL2关联X 蛋白(BCL2-associated X protein,Bax)的蛋白表达水平。结果 低、中、高剂量治疗组细胞增殖抑制率明显增加。低、中、高剂量治疗组均较阴性对照组出现一定程度的凋亡形态特征,且高剂量治疗组最为明显。高剂量治疗组细胞凋亡率显著高于阴性对照组及低、中剂量治疗组(P<0.05)。低、中、高剂量治疗组Bax蛋白表达水平均显著高于阴性对照组(P<0.05);中、高剂量治疗组Bcl-2蛋白表达水平均显著低于阴性对照组(P<0.05)。结论 半枝莲多糖SBP-2A 可显著抑制小鼠肝癌H22细胞增殖,其作用机制可能与调控Bax、Bcl-2蛋白表达水平从而促进细胞凋亡有关。