半枝莲多糖SBP-2A对小鼠肝癌H22细胞增殖的抑制作用

摘要 目的 探讨半枝莲多糖SBP-2A 对小鼠肝癌H22细胞增殖及凋亡的影响。方法 体外培养小鼠肝癌H22细胞分为阴性对照组(不加任何药物)、阳性对照组(黄芪多糖200μg/mL)、低剂量治疗组(半枝莲多糖SBP-2A50μg/mL)、中剂量治疗组(半枝莲多糖SBP-2A100μg/mL)、高剂量治疗组(半枝莲多糖SBP-2A200μg/mL)。MTT比色法检测各组细胞增殖的抑制活性。HE染色观察各组细胞形态学变化。流式细胞术AnnexinV/PI双染法检测各组细胞凋亡水平。蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测各组细胞B 细胞淋巴瘤2基因(B cell lymphoma 2gene,Bcl-2)、BCL2关联X 蛋白(BCL2-associated X protein,Bax)的蛋白表达水平。结果 低、中、高剂量治疗组细胞增殖抑制率明显增加。低、中、高剂量治疗组均较阴性对照组出现一定程度的凋亡形态特征,且高剂量治疗组最为明显。高剂量治疗组细胞凋亡率显著高于阴性对照组及低、中剂量治疗组(P<0.05)。低、中、高剂量治疗组Bax蛋白表达水平均显著高于阴性对照组(P<0.05);中、高剂量治疗组Bcl-2蛋白表达水平均显著低于阴性对照组(P<0.05)。结论 半枝莲多糖SBP-2A 可显著抑制小鼠肝癌H22细胞增殖,其作用机制可能与调控Bax、Bcl-2蛋白表达水平从而促进细胞凋亡有关。     

天冬氨酸及赖氨酸2～10肽单链和双链的合成与毒性

目的探讨同种氨基酸形成多肽的毒性和应用前景。方法用固相合成法合成天冬氨酸和赖氨酸的2~10肽单链与双链化合物,通过小鼠尾静脉将这些化合物注射到小鼠肝脏内,观察它们对小鼠的致死作用(LD50)。结果当天冬氨酸单链2~10肽的浓度依次达到0.15、0.1、0.09、0.03、0.0065、0.03、0.034、0.035和0.04 mol/L时,小鼠的死亡率达到50%。当赖氨酸单链2~10肽的浓度依次达到0.28、0.1、0.047、0.0225、0.0028、0.00166、0.0015、0.0011和0.00075 mol/L时,小鼠的死亡率达到50%。当天冬氨酸-赖氨酸双链2~10肽的浓度依次得到0.5、0.05、0.017、0.014、0.009、0.006、0.004、0.004、0.004、0.004 mol/L时,小鼠的死亡率达到50%。结论单链多肽的毒性大于双链多肽。在2~6肽范围内,天冬氨酸单链多肽随着氨基酸数目增加毒性逐渐增加;相反,在7~10肽范围内,随着氨基酸数目的增加毒性逐渐降低。在2~10肽范围内,赖氨酸单链多肽随着氨基酸数目增加毒性逐渐增加。在2~6肽范围内,天冬氨酸-赖氨酸双链多肽随着氨基酸数目增加毒性逐渐增加;但在7~10肽范围内,其毒性相似。     

红芪多糖对12周龄糖尿病db/db小鼠血脂的影响

目的:观察红芪多糖对12周龄糖尿病db/db小鼠血脂、血糖的影响,以进一步评价红芪多糖对2型糖尿病糖脂代谢紊乱的调节作用。方法:将40只12周龄雄性SPF级BKS背景肥胖型2型糖尿病db/db小鼠随机分为红芪多糖(HPS)高剂量组、HPS中剂量组、HPS低剂量和模型对照组,每组10只;另外10只同品系非糖尿病db小鼠为正常对照组。分别给予红芪多糖及生理盐水灌胃治疗8周后观察各组小鼠的血脂情况。结果:红芪多糖高、中剂量组能明显改善db/db小鼠血脂水平(P<0.01),而红芪多糖低剂量组与模型组比较未见明显差异(P>0.05);在实验过程中,除正常对照组外,其余各组血糖均不同程度上升,治疗8周时,HPS高剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:红芪多糖对12周龄的db小鼠血脂、血糖有一定的调节作用,对研究血脂与2型糖尿病、肥胖、脂肪肝的关系及治疗有一定意义。     

五味子乙素对苯并芘致不育模型小鼠精液质量的影响

目的探讨五味子乙素(Sch B)对苯并芘(Bap)所致不育模型小鼠精液质量降低的保护作用及其机制。方法选取性成熟雄性美国癌症研究所小鼠60只,随机分为对照组、Bap组和Sch B+Bap组,每组20只。Bap用橄榄油配成0.2 g·L-1混悬液,Sch B用9 g·L-1氯化钠注射液配成20 g·L-1混悬液。Bap组小鼠给予Bap 2 mg·kg-1·d-1灌胃,Sch B+Bap组小鼠给予Bap(2 mg·kg-1·d-1)及Sch B(200 mg·kg-1·d-1)灌胃,对照组小鼠给予相同剂量的9 g·L-1氯化钠注射液与橄榄油灌胃,30 d后处死小鼠取出睾丸组织,观察各组小鼠的精子密度、活率及动态参数曲线运动速度(VCL)、直线运动速度(VSL)、平均路径速度(VAP)、平均移动角度(MAD)、精子头侧摆幅度(ALH)、鞭打频率(BCF)、直线性(LIN)、摆动性(WOB)、向前性(STR),并测定睾丸组织细胞色素P450(CYP450)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及凋亡相关基因Bax、Bcl-2 mRNA表达水平。结果与对照组小鼠比较,Bap组小鼠的精子密度、活率以及a级精子与b级精子活率均显著降低(P<0.05);Sch B+Bap组小鼠的精子密度、活率、a级精子与b级精子活率显著高于Bap组(P<0.05)。Sch B+Bap组小鼠精子密度低于对照组(P<0.05),但2组小鼠间精子活率比较差异无统计学意义(P>0.05)。Bap组小鼠的各项精子动态参数均低于对照组(P<0.05)。Sch B+Bap组小鼠的各项精子动态参数均高于Bap组(P<0.05)。Sch B+Bap组小鼠精子的ALH、STR、BCF均显著低于对照组(P<0.05),VCL、VSL、VAP、LIN、MAD、WOB与对照组小鼠比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组小鼠比较,Bap组、Sch B+Bap组小鼠睾丸组织中CYP450活性显著增高(P<0.05),GSH-PX、SOD活性显著降低(P<0.05)。Sch B+Bap组小鼠睾丸组织中CYP450活性显著低于Bap组(P<0.05),GSH-PX、SOD活性显著高于Bap组(P<0.05)。与对照组小鼠比较,Bap组、Sch B+Bap组小鼠睾丸组织中Bcl-2 mRNA水平显著降低(P<0.05),Bax mRNA水平及Bax/Bcl-2显著增高(P<0.05)。Sch B+Bap组小鼠睾丸组织中Bcl-2 mRNA水平显著高于Bap组(P<0.05),Bax mRNA水平及Bax/Bcl-2显著低于Bap组(P<0.05)。结论五味子乙素可以改善苯并芘导致的小鼠精液质量降低,其作用可能是通过提高抗氧化酶活力及调节凋亡相关因子而实现。     

归脾颗粒对饮酒小鼠血醇变化的影响

目的观察归脾颗粒对饮酒小鼠血醇质量浓度变化的影响。方法用体积分数56%的白酒或归脾颗粒灌胃小鼠,实验设置了归脾防醉组、防醉对照组、归脾保养组和保养对照组,考察死亡率、血醇质量浓度变化及肝组织病理切片,辅以体质量变化、睡眠情况来评价归脾颗粒对饮酒小鼠的影响。结果归脾颗粒能促进小鼠对酒精的吸收代谢,降低动物死亡率,延长死亡时间,改善醉酒小鼠的睡眠情况,减弱酒精对小鼠正常生长发育的影响。结论归脾颗粒对饮酒小鼠有较好的解酒功效。     

miR-1202通过调控小鼠脑内的mGluR_4的表达在重度抑郁症中的作用

目的:探讨miR-1202在重度抑郁症中的作用及机制。方法:使用过表达miR-1202的腺相关病毒和慢性不可预见性应激模型的小鼠,通过旷场实验和强迫游泳实验等行为学实验来评估miR-1202的作用;通过Western-Blot实验来验证miR-1202的分子机制。结果:在抑郁症模型小鼠海马区域中过表达miR-1202发现抑郁症症状有所缓解,WB检测实验验证miR-1202的靶基因为mGluR4。结论:在小鼠海马区域中的miR-1202通过mGluR4参与了重度抑郁症,这为未来治疗抑郁症提供了一个新的靶点。     

红芪多糖3促进小鼠脾淋巴细胞增殖的差异蛋白质点分析

目的:分析红芪多糖3(HPS-3)作用于小鼠脾淋巴细胞后的差异蛋白质点,探讨红芪多糖3调节免疫的分子生物学机制。方法:提取正常小鼠脾淋巴细胞进行体外培养,用MTT法检测红芪多糖对小鼠脾淋巴细胞的刺激增殖作用,ELISA试剂盒测定培养上清中的IL-2含量,并运用双向电泳技术对脾淋巴细胞总蛋白进行分离,银染显色,PDQuest软件对凝胶图谱进行差异点分析,找出差异明显的蛋白质点。结果:HPS-3能够提高T淋巴细胞增殖能力和IL-2的分泌,实验所得2-DE凝胶图谱经PDQuest软件分析得出以下结果:HPS-3组中共有16个蛋白点发生明显改变,其中11个蛋白质点高表达,4个蛋白质点消失,1个蛋白质点低表达。结论:HPS-3能促进脾淋巴细胞增殖,显著影响小鼠脾淋巴细胞蛋白质表达。     

泛素连接酶和小清蛋白在脑性瘫痪小鼠模型海马组织中的表达及其意义

目的:探讨泛素连接酶(Huwe1)和小清蛋白(Parvalbumin,PV)在脑性瘫痪小鼠海马组织中的表达及意义。方法:新生7 d昆明小鼠,随机分为模型组和对照组,模型组按Rice的方法手术通过结扎小鼠单侧颈总动脉并缺氧来制作脑性瘫痪模型。对照组麻醉后仅切开颈部皮肤,分离单侧颈总动脉,不结扎不剪断,然后缝合伤口,未置于缺氧环境。各组小鼠分别在术后7 d、14 d、21 d、28 d用4%多聚甲醛灌注固定、取脑、作冰冻切片,片厚30μm,应用免疫组化法检测小鼠海马组织中Huwe1和PV的表达。结果:(1)Huwe1和PV在对照组成年小鼠脑中广泛表达,在小鼠发育过程中海马各区Huwe1和PV的表达随着年龄的增加呈上升的趋势,至成年时趋于稳定;(2)模型组小鼠自术后7 d起,模型组损伤侧海马CA1、CA3、DG区Huwe1的表达均高于其对侧和对照组(P<0.05);PV的表达虽然高于其对侧,却又低于其对照组(P<0.05)。结论:Huwe1在脑性瘫痪小鼠模型损伤侧海马中表达增高可能与脑损伤后其清除异常蛋白有关。PV的低表达可能与脑缺血有关,其损伤侧一过性的高表达提示可能与脑损伤后PV缓冲胞内钙超载的能力增强有关。     

天麻素对小鼠炎性痛脊髓背角自发放电抑制作用

目的:探究天麻素(gastrodin or GAS)对炎性痛小鼠诱致的脊髓背角I层神经元自发放电的影响。方法:成年小鼠10只,一侧后足底皮下注射完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)制备炎性痛模型后,于6、12、24、48、96、168 h分别观察机械性缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和热刺激缩足反射潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL)的变化。选取出生14~18 d小鼠,按照上述相同方法建立炎性痛模型,24 h后制备脊髓薄片(300μm),孵育1 h后用全细胞膜片钳技术通过灌流系统给予GAS(300μmol/L),并探究其对炎性痛脊髓背角I层神经元自发放电的影响。结果:(1)在成年小鼠炎性痛模型中,CFA诱致的痛觉过敏可持续1~2周,在24 h达到高峰;(2)在出生14~18 d小鼠CFA注射24 h后,脊髓背角I层神经元出现显著的自发放电增强现象;(3)GAS可以显著抑制脊髓背角I层神经元自发放电的频率,对幅度无显著作用。结论:GAS对炎症导致的脊髓背角I层神经元自发放电增强具有显著的抑制作用,进而降低神经元的兴奋性,从而达到缓解炎性痛的效果。     

小鼠条件性恐惧模型的建立和品系敏感性研究

目的在敏感品系上建立稳定可靠的小鼠条件性恐惧模型。方法采用给予30 s声音刺激(85 dB,5000 Hz),后2 s伴随给予不可逃避的足底电击(0.6 mA,持续2 s),声音-电击共配对5次,每次间隔2 min的方法建立小鼠条件性恐惧模型,在ICR、DBA/2(简称DBA)和C57BL/6J(简称C57)3种品系小鼠上评价场景恐惧和声音线索恐惧获得和表达的行为特点,以确定敏感品系鼠;分别于条件性恐惧训练第2,7,14,21和28天对C57小鼠场景恐惧和声音线索恐惧进行检测,以评价该品系小鼠条件性恐惧的自然消退特点;采用30 s声音+30 s间隔+10次消退训练的模式进行声音线索恐惧消退训练,并于24 h后进行消退保持测试,以评价该品系小鼠消退训练和保持的特点。结果声音-电击配对5次可成功诱导C57小鼠形成场景恐惧和声音线索恐惧,DBA小鼠可诱导形成声音线索恐惧但无法形成场景恐惧,ICR小鼠场景恐惧和声音线索恐惧均未诱导成功,确定C57小鼠为敏感品系鼠。C57小鼠呈现时间依赖的恐惧反应自然消退,其中场景恐惧在训练后第7天僵住百分率消退至(25±12)%,声音线索恐惧训练后第28天僵住百分率维持在(48±22)%;C57小鼠经10轮30 s声音消退训练,僵住时间百分率由(55±30)%消退至(32±27)%,但24 h后消退保持测试时僵住时间百分率又回升至(47±35)%。结论以敏感品系C57小鼠为研究对象,建立了恐惧获得、表达、自然消退、消退训练和消退保持各阶段恐惧行为检测的实验方法,成功建立小鼠条件性恐惧模型。