重组人骨形态发生蛋白2腺病毒载体的构建与鉴定*

背景：目前报道的重组腺病毒构建方法较复杂,构建周期长,导致重组腺病毒构建的成功率较低。GatewayTM技术是基于λ噬菌体的位点特异性高效重组系统,其构建重组病毒载体具有快捷高效的特点。 目的：构建含人骨形态发生蛋白2 基因的重组腺病毒载体,为应用骨形态发生蛋白2 基因治疗的研究奠定基础。 设计、时间及地点：单一样本观察,实验于2008-02/06在深圳市第二人民医院中心实验室完成。 材料：pOTB7-BMP-2 质粒、HEK293为ATTC产品;BLOCK-iTTM Adenovirus Expression System为Invitrogen产品;大肠杆菌DH5α为Biontex产品。 方法：用聚合酶链反应方法扩增骨形态发生蛋白2 目的基因,并插入载体pMD19-T Simple Vector中进行测序分析。将骨形态发生蛋白2 基因亚克隆到穿梭载体pEC3.1(+)中,构建pEC3.1-BMP-2 穿梭质粒,再将其中的表达盒通过重组克隆到pAd/BLOCK-iT™-DEST腺病毒载体中,线性化后转293 细胞进行包装获得重组腺病毒rAd-BMP2。 主要观察指标：①目的基因骨形态发生蛋白2 的聚合酶链反应扩增。②重组质粒TS-BMP2 的构建。③重组pEC3.1-BMP2 的构建。④重组pAd-BMP2 的构建。⑤重组腺病毒的制备与鉴定。 结果：正确扩增长约1.2 kb的骨形态发生蛋白2 cDNA,并成功地构建其腺病毒载体,经线性化的pAd-BMP2 DNA转染HEK293细胞,包装、扩增后得到人骨形态发生蛋白2 重组腺病毒(rAd-BMP2),其滴度约为1×1010 PFU/mL,该滴度可满足进一步的骨形态发生蛋白2 成骨作用的研究。 结论：成功地构建重组人骨形态发生蛋白2 腺病毒载体。     

创伤性三角纤维软骨复合体损伤的腕关节镜诊断及治疗

目的 评价腕关节镜对创伤性腕关节三角纤维软骨复合体(TFCC)损伤进行诊断及治疗的效果.方法 选有急慢性外伤史的16例腕关节三角纤维软骨复合体可疑损伤患者,年龄19～39岁,平均27.6岁.对经体格检查、关节造影或MRI检查有异常,疑为TFCC损伤者施行关节镜检查.按照Palmer分型:I A型6例,I B型9例,I D型1例.I A型、I D型在关节镜下行TFCC修整术,IB型行边缘部撕裂缝合修复术.结果 术后平均随访19个月.按Green-O'Brien功能评定法评定:优13例,良2例,可1例.结论 腕关节镜手术治疗TFCC是一种微创、有效、安全的治疗方式.     

中医火针联合沙利度胺治疗结节性痒疹78例临床观察

目的观察中医火针联合沙利度胺治疗结节性痒疹的临床疗效。方法 78例结节性痒疹患者随机分为2组,其中火针组40例,口服沙利度胺50 mg/次,2次/d,同时加用中医火针治疗,2次/周,治疗4周。对照组38例,口服沙利度胺50 mg/次,2次/d,同时外用卤米松三氯生乳膏,2次/d,治疗4周。结果治疗4周后,火针组总有效率为86.84%,对照组总有效率为72.97%,2组总有效率间差异有统计学意义(P0.05),均无明显不良反应。结论中医火针联合沙利度胺治疗结节性痒疹临床疗效显著。