血清铁蛋白、叶酸和维生素B_(12)水平的变化在急性早幼粒细胞白血病中的意义

目的:观察急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia, APL)不同疾病阶段血清铁蛋白、叶酸和维生素B12水平的动态变化.方法:研究对象为36例原发性APL患者,从治疗前至维持完全缓解3年期间,每1～3个月检测这些患者的血清铁蛋白、叶酸和维生素B12的水平.将初诊时、第1次完全缓解时、第1次完全缓解后6个月时、复发时以及第1次完全缓解维持3年时这5个时间点作为统计观察点,动态观察患者的血清铁蛋白、叶酸和维生素B_(12)水平的变化.结果:初诊时,36例APL患者中有27例(75.0%)血清铁蛋白水平升高,28例(77.8%)血清叶酸水平下降,所有36例患者的血清维生素B_(12)水平均升高.第1次完全缓解时,具有上述异常表现的患者人数较初诊时明显减少(血清铁蛋白P＜0.05,血清叶酸P＜0.01,血清维生素B_(12) P＜0.01).随着治疗的进展,患者的血清铁蛋白、叶酸和维生素B12水平逐渐趋于正常.第1次完全缓解后6个月时,大多数患者的血清铁蛋白、叶酸和维生素B_(12)水平均恢复正常.4例患者在维持完全缓解1年后疾病复发,其血清铁蛋白和维生素B_(12)水平均较复发前升高,而血清叶酸水平则较复发前降低,但差异无统计学意义(P＞0.05).15例维持完全缓解3年的患者,其血清铁蛋白、叶酸和维生素B_(12)的水平均正常.结论:APL患者病程中存在血清铁蛋白、叶酸和维生素B_(12)水平的动态变化.血清铁蛋白和维生素B_(12)水平的升高以及血清叶酸水平的降低均与APL的疾病活动状态和肿瘤负荷相关.     

活化性杀伤细胞免疫球蛋白样受体阳性的NK细胞对靶细胞的杀伤作用

Objective To study the killing effects of the killer cell immunoglobutin-like receptors (KIR) KIR2DS1-positive natural killer (NK) cells against acute, myeloid leukemia (AML) target cells, and to explore the KIR, human leucocyte antigen-Cw, and Cw loci (HLA-Cw) of NK cells, and, HLA-Cw of target cells mismatches destruction mechanism. Methods High-purified NK cells separated by DNYAL bead negative selection from healthy donor peripheral blood were taken as effector cells, and the freshly isolated bone marrow mononuclear cells from newly diagnosed AML patients as target cells. The anti-CD158a, CD158b monoclonal antibody was used to block inhibitory KLR receptors of NK cells (such as: KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3). The NK cells cytotoxicities against target cells before and after KIR blockades were detected by MTT reduction assay in vitro. Polymerase chain reaction and sequence specific primers (PCR-SSP) genotyping techniques were used to detect HLA-Cw, KIR gene of the healthy donors and patients. NK cells and target cells were divided into group C1 (expressing HLA-Cw 01, 03, 07, 08, 12, 14, 16 alleles), C2 group (expressing HLA-Cw 02, 04, 05, 06, 15, 17, 18 alleles) and the C1/C2 group (co-expressing the alleles in C1 group and C2 group) based on HLA-Cw. Results The purity of NK cells analyzed by flow cytometry was (90.8±6.08)%, and the killing effects of NK cells were significantly enhanced after inhibitory KIR blockades (t=-3.00, P=0.005). The cell lysis in C1 group, KIR2DS1+ NK cells against C2 group target cells (57.37±1.40)% was significantly higher than that against C1 group (44.19±4.67) % and C1/C2 group (36.77±6.56)% target cells (F= 11.87, P = 0.021), furthermore the differences in cell lysis among the above three groups become more evident after the inhibitory KIR blockades (F = 18. 72, P=0. 009). Conclusions The activity of NK cells was increased after the inhibitory KIR blockades, and the killing activities of KIR2DS1+ NK cells were higher than KIR2DS1 NK cells. The incompatibility between KIR, HLA-Cw of NK cells and HLA-Cw of target cells mediated NK alloactivation, realizing "missing self" recognition, and enabling NK cells cytotoxieity against targets.     

NB4细胞诱导分化过程中WT1(17AA+/-)剪接变异体表达的研究

目的探讨WT1(17AA /-)剪接变异体表达的改变与NB4细胞诱导分化的关系.方法建立了实时定量RT-PCR方法检测看家基因GAPDH、WT1基因及其WT1(17AA )剪接变异体的表达水平,以同一份标本(WT1拷贝数/GAPDH拷贝数)×104来计算WT1表达水平,定义为WT1N(normalized WT1 expressionlevel),同样定义WT1(17AA )N,并用流式细胞仪检测NB4细胞表面抗原CD11b的变化.结果随着NB4细胞向粒系终末分化WT1基因及其WT1(17AA )剪接变异体的表达水平迅速下降,全反式维甲酸(ATRA)作用0,6,12,18,24,48,72 h后WT1N的平均表达水平分别为191.11,121.17,66.72,43.47,18.29,4.04和3.79,WT1(17AA )N剪接变异体的表达水平分别为105.12,46.89,20.50,10.38,8.85,2.16和1.92,两者均与CD11b的变化呈负相关(r=-0.65,P＜0.01;r=-0.77,P＜0.01),而且值得注意的是在AT-RA作用后开始的18 h内,WT1(17AA )N/WT1N比值逐渐下降,24 h后与药物作用前水平无统计学差异,表明在ATRA诱导NB4细胞分化早期以WT1(17AA )剪接变异体表达下降为主.结论WTl基因高表达与NB4白血病细胞分化阻滞有关,WT1(17AA )剪接变异体可能在分化阻滞中起主要作用.     

肾母细胞瘤基因衍生肽诱导细胞毒性T淋巴细胞对白血病患者骨髓CD34+细胞的体外杀伤效应

目的 探讨肾母细胞瘤基因(WT1)衍生肽负载树突状细胞(DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对白血病CD34+细胞的体外清除效应.方法 合成一段针对HLA-A*0201锚位的WT19聚肽,体外负载来源于HLA-A*0201*健康人的DC后,诱导产生WT1肽特异性CTL(A组),以噻唑盐(MTT)比色法观察其对WT1表达阳性白血病患者(HLA-A* 0201+者3例,HLA-A*0201-者3例)骨髓CD34+细胞、健康人(HLA-A*0201+者2例,HLA-A*0201-者1例)外周血CD34+细胞和白血病NB4、K562及U937细胞株的体外杀伤效应,粒细胞-巨噬细胞系集落形成试验观察其对白血病患者骨髓CD34+细胞和健康人外周血CD34+细胞粒细胞-巨噬细胞系集落形成单位(CFU-GM)形成的影响.设立单独DC诱导CTL(B组)和IL-2诱导T细胞(C组)作为对照.结果 在效靶比为20:1时,A组CTL对3例HLA-A*0201+白血病患者骨髓CD34+细胞和NB4细胞的杀伤活性(分别为55.3%±2.8%,67.1%±3.2%、49.4%±3.8%和55.0%±3.7%)明显高于对3例HLA-A*0201-白血病患者骨髓CD34+细胞、健康人外周血CD34+细胞及K562、U937细胞的杀伤活性(均<20%),并明显高于B组和C组CTL(均P＜0.01).2例HLA-A*0201+白血病患者骨髓CD34+细胞经A组CTL处理后CFU-GM集落相对形成率分别为17.8%±4.0%和20.8%±3.4%,明显低于经B组CTL处理后(分别为88.9%±3.4%和91.8%±5.7%,均P＜0.01);HLA-A*0201-白血病患者骨髓CD34+细胞、健康人外周血CD34+细胞经A组和B组CTL处理后CFU-GM集落相对形成率差异尤统计学意义.结论 WT1肽特异性CTL能够以HLA-1类抗原限制方式杀伤高表达WT1基因的白血病CD34+细胞,且能特异性抑制其CFU-GM集落形成,WT1基因的表达产物可以作为清除白血病CD34+细胞靶点.     

老年营养风险指数对老年弥漫性大B细胞淋巴瘤患者的预后影响

目的探讨老年营养风险指数(GNRI)及临床特征对老年弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者的预后影响。方法选取确诊的505例老年DLBCL(≥60岁)患者。基于MaxStat算法获取GNRI的最佳截断值,应用1∶1倾向性评分匹配(PSM)以均衡组间协变量,比较匹配前后两组基线特征、总生存期(OS)的差异,采用Cox比例风险模型进行单因素、多因素分析,采用Kaplan-Meier分析计算生存率并绘制生存曲线。结果患者的中位年龄为68岁,男性273例(54.1%),中位生存时间为62.9个月。多因素分析结果显示GNRI、年龄、乳酸脱氢酶(LDH)、Ann Arbor分期是DLBCL患者的独立预后因素(P<0.05)。基于Maxstat统计量计算出GNRI的最佳截断值为99,经PSM后,成功匹配GNRI <99与GNRI≥99组各102例。亚组分析结果显示,GNRI可以对BCL-2~-组、BCL-6~+组和CD5^+/-组、Ann Arbor分期中Ⅲ～Ⅳ期和IPI评分处于中高危和高危组的患者进行精准分层。结论GNRI、年龄、LDH和Ann Arbor分期是影响...     

104例成人噬血细胞综合征的病因及临床特征对预后的影响分析

目的 探讨病因及临床特征对成人噬血细胞综合征(HLH)的预后影响。方法 收集淮海淋巴瘤协作组(HHLWG)中5家医疗中心确诊的104例成人HLH患者的临床资料。基于MaxStat统计量确定连续变量的最佳截断值;使用Cox比例风险模型进行单因素和多因素分析;Kaplan-Meier用于绘制生存曲线;组间差异采用Log-rank检验。结果 104例患者中,男性患者52例(50%),中位生存时间为2.13月,最常见病因为EBV感染(35.7%),其次为淋巴瘤(18.2%)。基于MaxStat统计量计算出年龄、纤维蛋白原(FIB)、血小板(PLT)、三酰甘油(TG)、白蛋白(ALB)和血肌酐(Cr)的最佳截断值分别为50岁、2.27 g/L、150×10~9/L、2.87 mmol/L、30.3 g/L和56μmol/L。不同病因所致HLH的总生存期(OS)不同,其中淋巴瘤相关HLH(LAHS)和EBV感染相关HLH(EBV-HLH)患者5年OS分别为15.8%和30.2%。多因素分析显示,年龄、ALB、Cr和FIB是成人HLH患者的预后独立危险因素。结论 EBV感染是成人HLH最常见的发病原...     

氟马替尼与伊马替尼治疗初诊慢性粒细胞白血病的有效性和安全性比较

目的：比较氟马替尼与伊马替尼治疗初诊慢性粒细胞白血病（CML）的有效性和安全性。方法采用多中心、随机、阳性药物平行对照的研究方法,对24例符合条件的初诊费城染色体阳性 CML慢性期（Ph+ CML-CP）患者给予6个周期（24周）的氟马替尼400 mg／d、600 mg／d 和伊马替尼治疗,分别在给药前及给药后2、4、6、8、10、12、16、20、24周进行血液学评价,给药前及给药后12、24周进行形态学、细胞遗传学和分子生物学评价。结果在有效性方面,治疗6个周期,氟马替尼600 mg／d 组的主要分子学缓解（MMR）率高于伊马替尼组,差异有统计学意义[44.44%（4／9）比14.29%（1／7）,P＝0.017]。治疗3个周期,氟马替尼600 mg／d 组 bcr-ablIS≤10%的患者比例高于伊马替尼组,差异有统计学意义（P＝0.002）;药代动力学／药效动力学分析也提示氟马替尼600 mg／d 较400 mg／d 更有可能使患者在早期获得分子学反应。在安全性方面,氟马替尼400 mg／d 组、氟马替尼600 mg／d 组和伊马替尼组Ⅲ～Ⅳ级不良事件的发生率差异无统计学意义（P＞0.05）。氟马替尼组较常见皮肤毒性和胃肠道反应,常见的不良事件为腹泻,未发生心脏和心血管系统不良反应,水肿的发生率低于伊马替尼组。结论氟马替尼可以安全有效地治疗初诊 Ph+ CML-CP 患者,600 mg／d 是一个较为合适的临床起始剂量。氟马替尼和伊马替尼在临床上具有相似的安全性。     

利用SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR方法检测白血病患者RbAp46基因的表达

目的探讨白血病患者骨髓细胞RbAp46基因的表达水平.方法建立实时定量RT-PCR方法,利用SYBR Green Ⅰ染料检测140例急性白血病(AL)、13例慢性粒细胞白血病(CML)慢性期和7例CML急变期患者以及32例非白血病患者骨髓细胞RbAp46基因的表达水平.结果初诊与复发AL患者骨髓中RbAp46基因表达水平的M估计值分别为178.23和213.65,明显高于完全缓解组和对照组(分别为85.89和88.08);CML慢性期组M估计值为58.27,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),而CML急变期组M估计值为173.24,明显高于CML慢性期组和对照组.98例初诊AL中除M2、M4亚型M估计值(62.63,130.67)与对照组相比差异无统计学意义外,余均明显高于对照组.初诊AL中RbAp46基因表达水平与bcr/abl、PML-RARα、mdrl基因的表达无相关性,但与WT1基因的表达水平呈正相关,与AML1/ETO融合基因表达呈负相关.结论RbAp46在AL初诊、复发及CML急变期患者骨髓细胞中高表达,可能参与白血病的发生.     

WT1基因启动子和增强子在不同细胞株中的转录活性研究

本研究探讨WT1基因启动子和增强子在不同细胞株中的转录活性,为开展基于WT1基因调控的白血病基因治疗奠定基础。以EGFP做报告基因,构建含有WT1基因启动子和增强子的重组表达载体;利用脂质体和电穿孔技术将重组质粒转染13个细胞株,包括WT1基因高表达的白血病细胞株(K562、NB4、THP-1、SHI-1),WT1基因低表达的白血病细胞株(U937和Jurkat);非造血细胞株中WT1基因高表达的MCF-7、T47D、293株细胞和WT1基因低表达的ECV304、SMMC7721、HT-29、SHG44细胞株;利用流式细胞术检测转基因细胞稳定表达EGFP的平均荧光强度。以平均荧光强度代表启动子和(或)增强子的转录活性。结果表明:通过基因重组技术构建了含有WT1基因启动子的表达载体pEWP,以及含有WT1基因启动子和增强子的表达载体pEWPA。就启动子的转录活性而言,在非白血病细胞株中,ECV304细胞EGFP的平均荧光强度最高,是空载体(pEGFP-1)的16.54±2.45倍,明显高于白血病细胞株(p<0.05);MCF-7和SHG44细胞次之,分别为9.46±1.10和7.29±0.73倍,HT-29细胞表达最低,仅为0.99±0.02倍。在人类血病细胞株中,K562细胞EGFP的平均荧光强度最高,是空载体pEGFP-1的2.93±0.27倍,明显高于Jurkat和SHI-1细胞株(p<0.05)。后二者分别为0.74±0.03和0.84±0.09倍。pEWPA可以使HT-29、SHI-1和K562细胞中WT1基因启动子的转录活性增强,分别增强到4.81、3.06和1.01倍。结论:WT1基因启动子的转录活性与细胞内在WT1基因的表达水平不相关,增强子增强部分细胞株中WT1基因启动子的转录活性,但不具有造血组织特异性。     

两种白血病细胞抗原负载DC的体外诱导特异性CTL应答的比较

目的: 比较树突状细胞 (DC)与白血病细胞融合及白血病细胞冻融抗原负载DC两种白血病DC疫苗诱导抗原特异性CTL应答的能力。方法: 采用羟乙基淀粉 Ficoll两步法分离外周血单个核细胞(PBMC), 通过贴壁 2h获得黏附的单核细胞, 用GM- CSF加IL- 4诱导培养 5d收获细胞。将细胞分为 4组: A组将K562细胞或原代慢性粒细胞白血病(CML)细胞在 500g/LPEG 100mL/LDMSO诱导下与DC融合; B组加入相应细胞数量的白血病细胞冻融抗原; C组将K562细胞或CML细胞与DC共培养; D组: 单独DC培养组。融合前以红色荧光染料PKH26标记K562细胞, 采用流式细胞仪(FCM)检测PKH26 /FITC 抗HLA ABC抗体双标细胞并评估融合率。培养的第 6天, 加入TNF -α诱导DC成熟, 然后分别与自体T细胞共培养, 用MTT比色法检测各组CTL对靶细胞的杀伤活性。结果: GM- CSF加IL -4和TNF- α依次诱导成熟的DC具有经典的DC的形态和表型特征, 在PEG -DMSO的介导下, DC与白血病细胞的融合率为 ( 17. 33 ~29. 94 )%。两种抗原负载方案激活的CTL均对表达K562抗原的细胞具有特异性的细胞毒作用。在效靶比相同时, 融合组诱导CTL的杀伤活性强于冻融抗原致敏DC组。结论: 与冻融抗原致敏的DC相比, DC与白血病细胞融合细胞递呈抗原的效率更高, 体外诱导的CTL特异性杀伤靶