树突状细胞疫苗诱导抗白血病免疫

白血病细胞可通过多种机制逃避机体免疫应答，树突状细胞(DC)作为功能最强的专职抗原递呈细胞，高表达MHC-Ⅰ类、Ⅱ类抗原以及B7-1／CD80、B7-2／CD86、ICAM-1等共刺激分子，能有效递呈白血病抗原，逆转机体对白血病抗原的耐受，启动特异抗白血病的T细胞应答。DC疫苗用于白血病传统化疗后的免疫治疗已成为清除微小残留病变和防止白血病复发的希望所在。     

GM-CSF+IFN-α诱导CML患者骨髓单个核细胞分化的树突细胞的免疫应答

目的:为研究临床注射用IFN-α GM-CSF诱导慢性髓性白血病(CML)患者的骨髓单个核细胞(BMMNC)向树突细胞(DC)的分化及其免疫效应。方法:将取8例CML慢性期患者的BMMNC,接种于用含100 mL/L人AB血清的RMPI1640培养液中,加入不同细胞因子的组合(A组:GM-SCF IL-4;B组:临床注射用IFN-α GM-CSF)后进行培养。培养8 d后,在倒置显微镜下观察DC的形态,用流式细胞术检测细胞上的表面标记。采用异基因混合淋巴细胞反应(allo-MLR)检测DC刺激健康供者外周血淋巴细胞增殖的功能,用MTT比色法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)特异性杀伤白血病细胞的活性。结果:在不同细胞因子组合诱导下分别培养诱导8 d后的DC,其特征性表面标记(CD80、CD86、HLA-DR、CD83、CD1a)的表达率均高于培养前的DC(P<0.05);但培养8 d的两组DC表面标记的表达率无明显差异。allo-MLR在DC与淋巴细胞之比为1∶10时,B组的刺激指数高于A组(P<0.05)。DC能够刺激异体T淋巴细胞产生特异性的CTL。结论:CML患者的BMMNC在GM-CSF IFN-α诱导下培养后分化的DC可较强地刺激淋巴细胞增殖并可杀伤患者的白血病细胞,有望用于CML的免疫治疗。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿患者测定CD55、CD59的意义

本文采用流式细胞技术测定6例阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）．11例再障-PNH综合征,10例再生障碍性贫血（AA）患者外周血淋巴细胞膜CD55和CD59标记率。6例PNH患者均表现出CD55和CD59下降（P＜0.01）．11例再障-PNH综合征患者也表现出CD55和CD59下降（P＜0.05）。10例再生障碍性贫血患者中8例CD55和CD59标记率在95％以上．2例标记率在85％以上,与对照组相比无统计学意义。结果表明：血细胞膜上糖基磷脂酰肌醇（GPI）“锚”相关蛋白CD55和CD59的缺陷与PNH有密切关系。流式细胞技术测定血细胞膜CD55和CD59可作为诊断PNH的有效方法。     

米托蒽醌为主的化疗方案对CD34+高表达白血病的疗效观察

目的进一步探讨米托蒽醌(MTZ)在急性白血病(AL)化疗中的作用特点，提高临床对难治性白血病的化疗疗效和AL的完全缓解(CR)率和无病生存率(FDS)。方法57例CD34 抗原高表达的AL患，随机选择3种常规化疗方案(MA／MAE、DA／DAE、HA／HAE)，联合化疗1～2个疗程后分别比较缓解率、骨髓抑制及其它毒副作用；同时骨髓白血病细胞体外培养72h，进行药物杀伤效应实验，分别比较MTZ、柔红霉素(DNR)、高三尖杉酯碱(HHT)在体外对白血病细胞不同分化阶段的抑制作用。结果以MTZ为主的MA／MAE方案有效率最高，急性髓系白血病(AML)为80．0％(24／30)，比DA／DAE和、HA／HAE方案高28．8％和56．9％；急性淋巴细胞白血病(ALL)的COMP方案有效率为92．6％(25／27)，比CDOP方案高27．4％。药物抑制试验显示MTZ对分化较早期阶段的CD34^ 白血病细胞的抑制显高于DNR和HHT。结论MTZ具有较强的抗白血病活性，临床骨髓抑制明显和较少产生耐药，可能与其主要作用于白血病细胞的分化较早阶段有关。     

Evans综合征伴多发性硬化一例

患女，24岁。因“反复头昏、皮肤瘀点、瘀斑伴酱油色尿8年，加重伴头痛2天”于2003年8月18日入院。曾经骨髓细胞形态学、血小板抗体测定和溶血试验检查确诊为自身免疫性溶血性贫血伴特发性血小板减少性紫癜(Evans综合征)，用糖皮质激素及输注洗涤红细胞治疗后症状缓解，激素不正规减量并自行停药。此后病情多次反复发作，但每次     

网织血小板检测在特发性血小板减少性紫癜中的临床意义

利用免疫荧光标记通过流式细胞仪（FCM）检测50名健康人、48例初治特发性血小板减少性紫癜（ITP）、30例抉完全缓解ITP患者的外周血网织血小板（RP）百分率和血小极相关抗体（PAIg），并以RP％和PAIg两种方法配对测定48例ITP患者，比较这两种方法的优越性。结果：ITP初治组的RP％明显高于正常对照组（P〈0．001），而绝对值低于正常对照组（P〈0．01）；ITP缓解组的RP％和绝对值与正常对照组之间无明显差异（P〉0．05）。RP％对ITP诊断的敏感性和特异性分别为81％和98％，而PAIg对ITP诊断的敏感性和特异性分别为58％和80％，RP％的诊断价值明显高于PAIg（P〈0.01）。提示RP％法对ITP的诊断价值较传统PAIg法大，且可作为ITP临床判断疗效的重要参考指标之一。     

全反式维甲酸联合地西他滨对U937细胞系和初发老年AML患者的作用及机制研究

目的:分析全反式维甲酸(ATRA)联合地西他滨(DAC)对p16INK4a(p16)和维甲酸受体β(RARβ)的DNA甲基化以及基因表达的影响,探讨2药联合对U937细胞和老年初发急性骨髓系白血病(AML)患者的抗肿瘤作用及其机制。方法:采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测p16和RARβ的表达,通过甲基化特异性PCR分析p16和RARβ启动子的甲基化水平,应用WST-1法和流式细胞术分别检测ATRA联合DAC对U937细胞的增殖作用及其对分化、凋亡和细胞周期的影响。结果:ATRA联合DAC可以诱导DNA去甲基化,增强p16和RARβ的基因表达;2药联合导致U937细胞的生长抑制和分化、凋亡和周期阻滞;此外,对于不能耐受标准化疗的老年AML患者,ATRA联合DAC联合方案在发挥抗肿瘤活性的同时,伴随着p16和RARβ表达水平的上调,以及骨髓原始细胞的减少,且患者显示良好的耐受性。结论:ATRA联合DAC方案,作为诱导分化和去甲基化的联合治疗策略,具有抗AML作用潜能,有助于优化老年AML治疗策略和改善临床预后。     

正常人骨髓间充质干细胞体外对K562细胞生长及分化抗原表达的影响

目的 探索正常人骨髓间充质干细胞(MSCs)对K562细胞增殖及表面分化抗原表达的影响.方法 分别将K562细胞悬浮培养及与MSCs黏附培养,绘制K562细胞生长曲线;用流式细胞术检测K562细胞周期及表面分化抗原的表达.结果 与悬浮培养比较,与MSCs黏附培养的K562细胞增殖受抑,G0/G1期细胞增加(P<0.05),G2/M期细胞增加(P<0.05),而S期细胞减少(P<0.05);但悬浮培养与黏附培养在细胞分化抗原的表达上没有明显的影响.结论 K562细胞与MSCs黏附培养可以抑制K562细胞的生长,但对其分化没有明显的影响.     

K562/MDR细胞与树突细胞融合诱导P170蛋白特异的细胞毒性T淋巴细胞应答

目的通过细胞融合方法将P170抗原负载树突细胞(DC),探讨能否有效诱导P170蛋白特异的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答。方法通过贴壁黏附获得外周血单核细胞,用GM-CSF+ IL-4诱导培养DC,并以TNF-α促进DC成熟,于第7天收获DC,然后分3组:①DC与耐药细胞系K562/MDR细胞融合以负载P170抗原;②DC与K562／MDR细胞共培养;③单独DC培养。通过流式细胞术(FCM)检测PE-P170／FITC-HLA-ABC抗体双标细胞来评估融合率。将3组细胞分别与T细胞共同孵育5 d,通过MTT法比较各组T细胞对P170+靶细胞K562／MDR及HL-60／VCR的杀伤活性。结果采用PEG-DMSO诱导的DC与K562／MDR细胞的融合效率为(22．39±2．55)％,融合细胞同时表达DC表型和P170分子,HLA-ABC和P170双阳性表达率为(26．90±3．63)％,明显高于共培养组的(4．52±1．77)％,融合细胞能激活T淋巴细胞,显示出对P170+靶细胞产生抗原特异细胞毒作用,效靶比为25:1时,对K562／MDR细胞的杀伤率为(65．75±4．65)％,明显高于共培养组[(22．15±2．40)％]。结论K562／MDR与DC融合能够诱导P170蛋白特异的CTL应答,可用于多药耐药白血病的免疫治疗。