通痹灵对于胶原诱导型关节炎大鼠关节炎及骨质破坏的影响

目的研究通痹灵对于胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节炎以及骨质破坏的影响。方法采用CIA大鼠动物模型,容积法测量足肿胀度,血小板计数,整体X线片分析骨质破坏情况。结果通痹灵高剂量明显减轻CIA大鼠的关节炎所致的足肿胀和降低血小板总数(P<0.05),通痹灵高剂量和甲氨喋呤高剂量可抑制CIA大鼠骨质破坏(P<0.05)。结论通痹灵可通过降低CIA大鼠血小板总数,减轻关节的炎症,并且具有抑制骨质破坏的作用。     

反相高效液相法测定通痹灵片中马钱子碱、士的宁的含量

[目的]建立测定通痹灵片中马钱子碱、士的宁含量的方法。[方法]采用反相高效液相色谱法,色谱柱为NUCLEODUR C_(18) Gravity分析柱(125mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇—水(60:40)1000 mL中加入磷酸二氢钾0.5g、十二烷基磺酸钠1.0g、三乙胺0.5ml(冰醋酸调pH至4.5),检测波长254nm,流速1.0mL/min,室温操作。[结果]马钱子碱、士的宁平均回收率分别为97.69％(RSD=2.03％),97.93％(RSD=2.61％)。[结论]本方法快速准确,可作为通痹灵片的质控指标。     

通痹灵对抗胶原诱导性关节炎小鼠骨质破坏的作用研究

[目的]探讨通痹灵(TBL)抗关节炎骨质破坏的作用机理。[方法]以小鼠胶原诱导性关节炎(CIA)为动物模型,分别以高剂量和低制量TBL对模型小鼠灌胃给药,并以甲氨喋呤(MTX)作为阳性对照,观察TBL对CIA小鼠关节炎症程度、关节破坏程度以及关节切片免疫组化染色中明胶酶A和B表达的影响。[结果](1)TBL高剂量(5.7g·kg-1·d-1)治疗8周能降低关节炎症状计分及放射线计分(P<0.01或P<0.001);(2)明胶酶A和B表达与关节炎症状计分及关节放射线计分显著相关(P<0.05或P<0.005);(3)TBL高剂量治疗能明显降低明胶酶A和B在关节滑膜、软骨和滑膜翳中的表达(与CIA组相比P<0.01或P<0.001)。[结论]中药TBL可控制CIA小鼠关节明胶酶A和B的表达,这可能是其能改善RA的软骨和骨质破坏的机制之一。     

通痹灵总碱对淋巴细胞增殖及T淋巴细胞转铁蛋白受体的影响

背景近年来,类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)发病机制及病理变化研究等方面取得了明显进展,但在RA治疗学方面中医药具有独特的优势. 目的研究通痹灵的有效部位总生物碱对细胞增殖及T淋巴细胞转铁蛋白受体(CD71)的影响,探讨通痹灵调节细胞免疫的作用机制.设计以细胞为研究对象,完全随机分组设计,探索性研究.单位一所中医药大学医院六内科,一所大学生命科学院组织移植与免疫中心.材料本实验于2002-07/2003-08在广州中医药大学第一附属医院中心实验室(国家中医药管理局三级实验室)完成.实验选用清洁级雄性SD大鼠10只.方法分离大鼠腹股沟淋巴结淋巴细胞进行培养,刀豆蛋白刺激72 h,MTT法检测通痹灵总碱对淋巴细胞增殖的影响.佛波醇酯或刀豆蛋白刺激48 h,流式细胞术检测T淋巴细胞CD71的表达率.主要观察指标通痹灵总碱对淋巴细胞增殖及T细胞活化的影响.结果不同浓度的通痹灵总碱可明显抑制刀豆蛋白刺激下的淋巴细胞增殖;佛波醇酯和刀豆蛋白激活的T淋巴细胞CD71+表达率明显高于空白对照组(P＜0.01),刀豆蛋白刺激下不同浓度的通痹灵总碱(50,100,200 mg/L)CD3+CD71+表达率[(62.03±1.51)%,(25.28±1.57)%,(20.29±1.72)%]明显低于BPS阳性对照组[(62.03±1.28)%](P＜0.05);佛波酯醇刺激下100 mg/L和200 mg/L浓度通痹灵总碱CD3+CD71+表达率明显低于PBS阳性对照组(P＜0.05),不同浓度的通痹灵总碱对佛波酯醇和刀豆蛋白激活的T淋巴细胞表达CD71,均有明显的下调作用,而且呈明显的量效关系(P＜0.05),对刀豆蛋白刺激下CD71表达抑制作用要强于佛波醇酯.结论通痹灵总碱可抑制异常增殖的T淋巴细胞,其作用机制可能是通过抑制转铁蛋白受体来实现的.     

通痹灵总碱对胶原诱导型关节炎大鼠软骨及其细胞代谢的影响

背景中医对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的认识和治疗积累比较丰富的经验,尤其是经过近几年来的研究,取得了令人瞩目的进展,具有治疗方法多,疗效确切,毒副作用少的特点,因而从中医领域进一步探寻治疗RA更为有效的药物和方法,有着重要的科学意义和社会意义.而中药能否在RA发病中通过多途径、多靶点、多环节作用方式,抑制或阻止软骨和骨的破坏并促进他们的新陈代谢及其损伤的修复的研究更是少有报道.目的探讨中药通痹灵抗软骨破坏的作用机制.设计以实验动物为研究对象的完全随机设计,对照实验研究.单位一所大学金匮教研室.材料实验于2002-08/2003-12在广州中医药大学第一附属医院综合实验室完成.Wistar清洁级大鼠,雌性,体质量(110 ±20)g,35只.由解放军第一军医大学动物实验室提供,动物合格证号2002A041.将Wistar大鼠适应性喂养3 d后,随机分为正常组、造模组、通痹灵总碱组.通痹灵总碱由广州中医药大学热带病研究所植物化学分析室提取.方法以胶原诱导型关节炎大鼠为动物模型,分组灌胃治疗后,做大鼠趾关节病理切片,常规苏木精-伊红染色,观察软骨病变;培养软骨细胞,以rrIL-1β体外刺激软骨细胞导致软骨细胞基质降解作为药理模型,加用不同浓度的通痹灵总碱,并以地塞米松作为对照组,培养48 h后,收集细胞上清液,用阿利新兰法检测GAG含量;用硝酸酶还原法检测一氧化氮的含量.主要观察指标①主要结局通痹灵总碱对胶原诱导型关节炎大鼠趾关节软骨病变及对rrIL-1β诱导的软骨细胞基质降解的影响②次要结局通痹灵总碱对rrIL-1β诱导的软骨细胞生成一氧化氮的影响.结果①趾关节病理苏木精-伊红染色切片评价结果显示通痹灵总碱组软骨破坏程度小于造模组(P＜0.01);②不同浓度的rrIL-1β(1,10,100,500,1 000μg/L)促进了软骨细胞蛋白多糖的降解(P＜0.01),且呈量效关系.③不同浓度的通痹灵总碱(200,100,50,25 mg/L)及地塞米松可明显抑制软骨细胞蛋白多糖的降解(P＜0.01)及一氧化氮的产生(P＜0.01).结论通痹灵总碱可抑制胶原诱导型关节炎大鼠趾关节软骨破坏;体外实验结果显示通痹灵总碱可对抗软骨细胞蛋白多糖的降解,其作用途径可能是通过抑制一氧化氮的生成来实现的.     

消瘀灵治疗高粘滞综合征的临床研究

消瘀灵是由张仲景古方大黄(庶虫)虫丸为主研制而成,此方出自《金匮·虚劳病篇》的五劳虚极内有干血的正虚血瘀证。虚劳日久,五脏损伤,瘀血内停,气血生化不足形成“五劳虚极羸瘦,腹满不能食”“内有干血,肌肤甲错,两目黯黑”的虚劳内有干血的正虚血瘀证。高粘滞综合征是指病人的血液处于高粘稠状态,它在血液流变性上有显著改变,在病理过     

通痹灵总生物碱抑制关节破坏的细胞免疫作用机制

目的:证实通痹灵总生物碱抑制胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节炎症和关节破坏的药效,揭示其调节细胞免疫的作用机制。方法:牛II型胶原混合弗氏不完全佐剂于SPF级Wistar大鼠尾根部注射,足肿后随机分为造模加生理盐水组,甲氨蝶呤(MTX)治疗组和通痹灵总生物碱(以马钱子碱和士的宁为主的生物碱,TBL总碱)治疗组,容积法评价后肢肿胀度;给药后35d,乳腺钼靶机大鼠全身摄片,计分法评价各组大鼠X光片四肢96块骨侵蚀和100个关节间隙变化;处死动物,取左前肢和右后肢近端第3足趾关节苏木素-伊红(HE)染色,评价中性粒、淋巴细胞、浆细胞浸润、滑膜细胞增生的情况;MTT法检测TBL总碱对Jurkat细胞增殖的影响;Western blot检测TBL总碱对Jurkat细胞ERK1/2磷酸化的影响。结果:造模成功后,MTX和TBL总碱给药35d都可明显抑制大鼠关节肿胀和关节破坏,与造模加生理盐水组有统计学差异(P<0.01);TBL总碱可明显抑制CIA淋巴细胞、浆细胞的浸润和滑膜增生(P<0.05),MTX可抑制滑膜增生。TBL总碱可显著抑制T细胞增殖以及ERK1/2的磷酸化。结论:TBL总碱具有抑制关节免疫炎症和关节破坏的作用,其机制可能是通过干预T细胞MAPK信号转导,抑制T细胞的活化和增殖来实现的,为TBL总碱治疗RA提供了实验依据。     

通痹灵总碱对LPS刺激后的巨噬细胞产生炎症介质的影响

类风湿关节炎(RA)是目前世界性的难治性重大免疫性疾病,严重危害人类健康.其病理特点是反复发作,病情缠绵难愈.肥厚增生的类风湿滑膜组织结构特点是大量巨噬细胞浸润.活化的巨噬细胞在类风湿性滑膜及被破坏的血管翳组织中被大量发现并产生大量的炎症介质如前列腺素(PG)、白三烯(LT)和一氧化氮(NO)等.炎症介质的主要生理学效应包括收缩平滑肌、趋化白细胞和降解细胞间质等,导致组织局部的毛细血管扩张,血流加快,血管通透性加大,白细胞和血浆经毛细血管渗出,从而导致炎症的发生.通痹灵是以《金匮要略》中桂枝芍药知母汤为基础研制而成的,具有清热除湿、滋阴通阳、活血通络、化瘀止痛的功效.通痹灵总生物碱是从中药复方通痹灵提取出的有效部位之一.既往研究证实[1,2]:通痹灵总生物碱(TA)可抑制异常增殖的T淋巴细胞,调节Th1/Th2比值.本研究观察不同浓度的TA对LPS活化的巨噬细胞产生炎症介质PGE2、LTC4、NO的影响.     

青藤碱对胶原诱导型关节炎免疫抑制作用的机制研究

为证实青藤碱(SINO)抗关节破坏的作用,揭示其可能的作用途径,采用牛II型胶原混合弗氏不完全佐剂于Wistar大鼠尾根部注射。足肿后随机分为造模加生理盐水组、造模加雷公藤多苷(TG)治疗组和造模加SINO治疗组,容积法每天测量后肢肿胀度。给药后第35天,乳腺钼靶机大鼠全身摄片,计分法评价四肢关节骨侵蚀和关节间隙变化;取足趾关节和腹股沟淋巴结,HE染色,评价病理情况;培养原代滑膜细胞,放免法检测培养上清IL-6,RT-PCR检测IL-6 mRNA表达。结果显示,SINO和TG可明显抑制关节肿胀,骨侵蚀和关节间隙变化(P<0.01);抑制CIA大鼠滑膜增生、软骨破坏、淋巴结生发中心反应和髓索浆细胞浸润(P<0.01);降低滑膜细胞IL-6 mRNA和蛋白水平。提示SINO和TG具有抑制关节炎症和关节破坏的作用,其作用机制可能是减少IL-6的产生,抑制B细胞的激活和分化。