胃癌和癌前病变中树突状细胞的免疫组化研究

目的 通过研究胃粘膜中S100+,HLA-DR+,CD4+和CD8+产物的表达情况,以了解DC细胞在胃粘膜免疫中的作用．方法 胃癌(143例)、慢性萎缩性胃炎(41例)、不典型增生(15例)、肠上皮化生(27例)和正常对照组(10例)共236例,都经内镜和病理诊断明确．采用HE染色、SP免疫酶标抗体组化染色法与图象分析技术相结合,观察胃粘膜中S-100+,HLA-DR+,GD4+CD8+细胞数量、平均面积和平均吸光度的变化。结果 胃癌患者胃粘膜中S100+(0．6±0．2)μm2,HLA-DR+(0．9±0．2)细胞数量明显多于正常胃粘膜(P     

大鼠胃电节律失常模型中NO/cGMP信号转导系统的作用

目的研究NO/cGMP信号转导系统在致大鼠胃电节律失常中的作用.方法建立大鼠胃电节律失常模型,计算机采集并分析正常和模型组大鼠胃电信号;肌间神经丛铺片,还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)组化法显示正常及模型组肌间神经丛氮能神经,并经图象分析定量;放免法测定正常及模型组胃平滑肌组织cGMP含量结果模型组肌间神经丛氮能神经分布面密度(15.0±4.5)%,cGMP含量(17.6±4.6)pmol.L-1.g-1及胃慢波异常节律指数(ARI,20.2%±8.7%)、频率变异系数(CV,34.7%±6.3%)均明显高于正常组,分别为(9.1±2.5)%,(11.8±2.1)pmol.L-1.g-1,(5.1±1.8)%,(21.0±4.2)%,P＜0.01,且模型组氮能神经面密度与该组ARI和CV呈显著正相关,相关系数r分别为0.73和0.69,P＜0.05,模型组cGMP含量与该组ARI和CV亦呈显著正相关,相关系数r分别为0.78和0.79,P＜0.01.结论模型组大鼠胃电节律失常与NO,cGMP升高有关,NO通过NO/cGMP信号转导系统调控胃电节律.     

小鼠Islet-1基因慢病毒表达载体的构建及其诱导C_3H_(10)T1/2细胞向心肌样细胞特异性分化

目的研究Islet-1对干细胞分化的影响。方法用PCR钓取目的基因,将目的基因与pLenO-WPI载体连接,选取阳性质粒,与辅助质粒共同感染293T细胞生产出慢病毒载体。感染C3H10T1/2细胞,实时荧光定量PCR及Western blot检测Islet-1和心肌、肝脏、骨骼及神经各系统相关标志物的表达,免疫荧光检测心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达部位。结果 PCR及测序显示目的片段正确插入,实验组有Islet-1表达;心肌早期发育相关基因GATA-4、MEF2C、NKx2.5在检测到荧光蛋白1周后升高,2周到达高峰,3周后可检测到心肌特异性蛋白cTnT(0.582±0.0576),其时序性表达呈随时间增强趋势;cTnT表达于胞质;肝脏系统特异性标志AFP及ALB、骨骼系统特异性标志BGP及BALP、神经系统特异性标志Nestin及GFAP均未表达。结论 Islet-1具有特异性促进干细胞向心肌样细胞分化的作用。     

抑制端粒酶活性能增加胃癌细胞对顺铂的敏感性

肿瘤细胞存在多药耐药现象和化疗药物的毒副作用是影响肿瘤化疗效果的主要原因。新近研究表明 ,表达于绝大多数肿瘤细胞而不表达于正常体细胞的端粒酶与化疗敏感性有关[1,2 ] 。在我们既往研究工作的基础上 ,我们观察了反义人端粒酶ＲＮＡ(ｈＴＲ)转染的ＳＧＣ 790 1胃癌细胞在端粒酶活性受抑制后对常用化疗药物顺铂敏感性的变化 ,探索胃癌联合化疗的新途径。一、材料与方法1 细胞培养 :人胃癌细胞系ＳＧＣ 790 1和反义人端粒酶ＲＮＡ转染的ＳＧＣ 790 1细胞 (790 1 ａｈＴＲ) [3] 均培养于含 10 %灭活的小牛血清、10 0 μｇ/ｍｌ链霉素、10…     

体外模拟肿瘤微环境中致大鼠MSCs瘤化因子分析

 目的 探讨模拟肿瘤微环境中骨髓间充质干细胞（MSCs）肿瘤转化的发生与HGF、IL-6、BFGF关系。方法 实验组为C6胶质瘤与MSCs间接共培养模拟肿瘤微环境下MSCs的生长,对照组为星型胶质细胞与MSCs间接共培养模拟正常微环境下MSCs的生长,空白对照组MSCs单独培养;QPCR,免疫荧光检测各组的P53和MDM2的基因和蛋白的表达;ELISA检测各组HGF、IL-6、BFGF的表达;免疫荧光检测对应升高的细胞因子作用于MSCs后的STAT3蛋白的表达。结果 实验组的MSCs形态肿瘤化;MSCs的MDM2 mRNA是对照组的1.56±0.21(P<0.05),MDM2蛋白表达率比对照组升高90±7%(P<0.01);MSCs的P53的mRNA表达是对照组的0.55±0.10, 而P53突变蛋白表达率比对照组升高87±5%(P<0.01);HGF、IL-6水平比对照组中达水平升高(P<0.05);过量IL-6处理组的MSCs的STAT3激活蛋白表达率比正常量IL-6处理组明显升高(P<0.01)。结论 IL-6参与MSCs在肿瘤微环境下的肿瘤转化的发生。     

肝细胞癌17p13.3位点CpG岛甲基化状态的分析及其意义

为探讨ＤＮＡ甲基化异常在肝细胞癌中的作用，采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术对１２例肝细胞癌１７ｐ１３．３位点ＣｐＧ岛甲基化状态进行了检测，发现６例正常肝组织ＣｐＧ岛均未被甲基修饰，而４１．７％（５／１２）的肝细胞癌ＣｐＧ岛被不同程度的重新甲基化；甲基化程度显著升高者多伴１７ｐ１３．３位点的杂合缺失。结果表明：ＣｐＧ岛重新甲基化可能是１７ｐ１３．３位点基因失活的重要机理之一，过度的高甲基化状态与杂合缺失有关。为肝癌的病因学研究提供了资料。     

采用PCR—RFLP技术分析石蜡包埋胃癌组织ras和P53基因点突变

采用多聚酶链延伸反应－限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ—ＲＦＬＰ）法对福尔马林固定、石蜡包埋胃癌组织ｒａｓ和Ｐ５３基因．点突变进行分析，结果表明．Ｃ－Ｈａ—ｒａｓ第１２位密码子突变率为１３．６％（１２／８８），第６１位密码子为３．８％（３／８０）；Ｃ－Ｋｉ—ｒａｓ第１２位密码子点突变率为７．２％（５／６９），第１３位密码子未发现有点突变者；Ｎ—ｒａｓ第１２位密码子突变率为１．４％（１／６８）。Ｐ５３基因第２４８位密码子声、突变率为７．４％（５／８８），第２４９位密码子未见有点突变者。以上提示采用ＰＣＲ—ＲＦＬＰ技术可对多数从石蜡包埋胃组织提取的ＤＮＡ进行ｒａｓ和Ｐ５３基因。点突变分析。     

胃粘膜肠化生组织YNZ22基因杂合缺失及p53基因突变、蛋白表达的研究

为探讨YNZ22基因杂合缺失（LOH）及p53基因突变、蛋白表达在胃粘膜肠上皮化生中的作用,应用PCR－RFLP、PCR－SSCP及免疫组化技术检测了不同类型肠化生组织中YNZ22基因LOH、p53基因素5－8外显子突变及其蛋白表达。结果显示,YNZ22 LOH率为19.4%（6／31）,p53突变率为29.8%(14/47),p53蛋白表达率为10.0%（6/60)。将肠化生分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型,发现Ⅲ型肠化生中p53突变率及其蛋白阳性表达率分别为57.1%(8/14)和27.8%(5/18),无显著高于Ⅰ（18.2%)、Ⅱ型肠化生（2．4％）（均P＜0.05)。p53蛋白表达与p53基因突变显著相关（P＜0.05),YNZ22 LOH与p53突变及蛋白表达无显著相关性（P＞0.05)。提示,YNZ22基因LOH及p53基因异常可能在胃粘膜肠化生的发生及其癌变中起一定作用,p53基因有可能成为胃癌早期诊断的分子指标。