金黄色葡萄球菌半乳糖醇酶基因克隆

目的 了解金黄色葡萄球菌的生物化学和代谢特征，以及其半乳糖醇酶与产生肠毒素的关系。方法 利用PCR方法从金黄色葡萄球菌标准株中扩增出金黄色葡萄球菌半乳糖醇酶，克隆到pmD-18T载体上并转化到E．coli．JM109菌株。结果 用特异引物扩增800bp的基因片段，目的基因被克隆，经双酶切和DNA序列测定为金黄色葡萄球菌半乳糖醇酶基因。结论 金黄色葡萄球菌半乳糖醇酶基因片段可以被特异性扩增和克隆。     

带组氨酸标签的癌蛋白SET真核表达载体的构建及其表达

目的为研究三氯乙烯诱导的差异蛋白SET在肝细胞L-02中的相互作用,构建了癌蛋白SET和His标签融合表达的真核表达载体pcDNA3.1(+)/SET-His。方法从L-02肝细胞中提取总RNA,采用RT-PCR扩增SET-His基因并进行双酶切,序列纯化后定向克隆至pcDNA3.1/zeo(+)载体,阳性克隆载体进行双酶切和测序鉴定,阳性克隆载体瞬时转染入L-02肝细胞,利用Western blotting检测SET-His融合蛋白的表达。结果利用RT-PCR从L-02细胞总RNA中成功克隆出SET基因,经双酶切和测序鉴定证实pcDNA3.1(+)/SET-His真核表达载体构建成功。经Western blotting验证表明,SET-His融合蛋白在肝细胞中获得高效表达。结论该结果为研究SET蛋白相互作用以及三氯乙烯致机体损伤的机理奠定了基础。     

金黄色葡萄球菌肠毒素快速分型体系的建立及应用

目的 建立SYBR-Green荧光PCR体系金黄色葡萄球菌肠毒素快速分型体系,应用于金黄色葡萄球菌食物中毒和食品风险监测快速诊断.方法 根据GenBank公布的金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E基因的保守序列设计特异性引物,分别建立SYBR-Green荧光PCR体系.应用该系列体系检测185株金黄色葡萄球菌野生株的肠毒素基因A～E型.结果 建立的SYBR-Green荧光PCR系列体系其DNA灵敏度为1.34～2.80 ng/μL,菌液灵敏度为46～96 CFU/mL;用以检测185株金黄色葡萄球菌的肠毒素基因A～E型,携带一种基因型的为58.38%,同时携带两种以上毒素基因占4.86%.结论 建立的荧光PCR反应体系快速、灵敏度高、特异性强,能应用于金黄色葡萄球菌肠毒素基因的准确分型,对食物中毒诊断和食品风险监测很有意义.     

深圳市食品病原微生物污染的调查

目的了解深圳市食品污染卫生状况,为卫生主管行政部门发布食品安全预警系统提供及时、客观的科学依据。方法用传统国家标准法和快速荧光PCR检测方法对抽检的食品进行细菌总数、大肠菌群及常见的一些致病苗等微生物指标检测鉴定。结果从随机抽检的324份食品中,分别检出不合格的大肠菌群18份；金黄色葡萄球菌4份；沙门菌2份；志贺菌2份；致泻性大肠杆菌8份,空肠弯曲菌2份,副溶血性弧菌1份。结论深圳市食品在微生物卫生指标总体是安全的,食品被污染程度较轻；但少数卫生指标不合格,需要引起有关部门的重视,特别是夏季,要加强监管监测,以防出现大规模的食物中毒事件发生。     

改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157：H7

目的建立改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157：H7的快速方法。方法根据GenBank公布O157：H7的rfbE保守序列，设计一对引物和改良分子信标探针，用FAM荧光剂标记探针的5’端，建立改良分子信标实时PCR检测O157：H7的反应体系，应用于食物中毒快速诊断和食品微生物检测。结果共检测11种细菌。只有大肠杆菌O157：H7有荧光信号，其余10种全无荧光信号，且与其他细菌无交叉反应，DNA灵敏度为64fg，菌液灵敏度为59cfu／ml或2cfu／PCR反应体系。应用改良分子信标实时PCR反应体系检测10株O157：H7均出现特异的荧光信号，无干扰。对89份食品样品进行检测，5份O157：H7实时PCR阳性，其余样品为阴性，检测仅需2h。5份阳性样本，经传统方法培养，有3份检出大肠杆菌O157：H7。结论改良分子信标实时PCR检测体系快速、灵敏度高，特异性强，可用于大肠杆菌O157：H7食物中毒的快速诊断和食品微生物检测，为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

深圳市细菌性食物中毒病原菌的调查与预防

目的了解深圳市近年引起细菌性食物中毒常见病原菌的种类、特点和趋势，为检测和预防控制细菌性食物中毒提供科学依据。方法根据《中华人民共和国国家标准食品卫生检验方法》微生物学部分对深圳市2003-2005年细菌性食物中毒检测致病菌资料进行统计分析。结果在3a中报告的63起细菌性食物中毒中依次是以副溶血弧菌（39．7％）、变形杆菌（15．9）、沙门菌（12．7）、金黄色葡萄球菌（11．1％）、蜡样芽胞杆菌（3．2％）为主要致病菌。结论深圳市为沿海城市，细菌性食物中毒病原菌以副溶血弧菌、变形杆菌为主，今后在对食品污染监测时，可重点监测上述致病菌，开发快速检测方法，这样可为预防、处理和治疗食物中毒赢得时间，确保食物中毒病人及时得到治疗，保障病人的安全和身体健康。     

深圳市肉类食品空肠弯曲菌的污染情况调查

目的了解我市常见肉类食品中空肠弯曲菌的污染状况,为控制和预防空肠弯曲菌食物中毒提供科学依据。方法在食品污监测点随机抽检肉类食品样品117份,用传统国标法和荧光PCR法进行检测。结果从117份肉类食品中检出4份空肠弯曲菌,阳性检出率为3.4%。结论深圳市肉类食品中存在空肠弯曲菌的污染,如果加工、销售不当,及监督不严,会对群众健康构成潜在威胁。     

2001～2003年深圳市学校食堂餐具消毒监测结果分析

目的全面了解深圳市学校食堂餐具的卫生质量情况，为今后学校师生食堂餐饮卫生监督提供科学依据。方法大肠菌群按GB14934—94纸片法，致病菌按GB4789．4．5—2003进行。结果深圳市学校2001～2003年餐具大肠菌群整体合格率分别为87．3％、92．5％、96．8％，致病菌均未检出。结论深圳市大中小学校使用的餐具卫生状况整体情况比较好，多数学校餐具卫生3a保持良好状态，只有个别学校稍差。建议卫生监督机构除继续保持监测外，应着重加大对卫生状况和消毒效果稍差的学校的监督，指导学校做好消毒工作，以保护学校师生的饮食安全，避免引起食物中毒。     

深圳市食品原料用蚝汁使用现状分析

随机抽取1995年1月～12月深圳市7间食品厂生产的蚝油55份(另加市外生产的1份)及其配方主要原料蚝汁55份进行检测。结果蚝汁的氨基酸态氯(AAN)含量为0.61～1.5%，平均0．88%，接厂家蚝油配方中蚝汁最高含量为15%，则蚝油AAN含量为0.10～0．18%，平均0．13％，远低于国标中蚝油AAN含量0．3％的要求，但蚝油检测结果AAN含量为0.11～0．72％，平均含量0．38％，仅6份低于国标含量，揭示厂家采用非蚝汁的其他含氮物质来提高AAN含量，特建议在煮制蚝汁过程严格掌握浓缩程度，使其AAN含量达到1．0％，蚝油配方中蚝汁使用最低限量≥30%，以确保蚝油的营养指标及其特有的风味。     

瓶装饮用水微生物污染调查

近年来 ,随着人们生活水平的不断提高 ,饮水消费观念日益更新 ,纯净水、矿泉水等不同种类的瓶装饮用水越来越多地走进人们生活。市场需求的不断扩大 ,也使得各种各样的瓶装饮用水生产厂家大量出现 ,然而由于多种因素的影响 ,瓶装饮用水的卫生质量参差不齐 ,直接影响了消费者的健康。为了解深圳市瓶装饮用水微生物污染状况 ,笔者对 2 0 0 0～2 0 0 2年深圳地区瓶装饮用水进行了抽样检验 ,现将结果报告如下。1　材料与方法1 1　样品来源 :深圳市生产厂家及深圳市场销售的送检瓶装饮用水 1191份 ,其中纯净水 972份 ,矿泉水 2 19份。1 2　检验项…