生物型人工韧带的制备及体外检测

目的探讨应用新的组织处理技术研制的生物型人工韧带应用在膝关节交叉韧带重建的可行性。方法以猪肌腱韧带为原料应用环氧化物作为交联剂加上专门的除抗原技术及蛋白修饰技术制作生物型人工韧带,在体外应用组织学检查、扫描电镜、细胞培养和力学测试分析生物型人工韧带的组织结构、生物力学和细胞的相容性。结果生物型人工韧带的外观与正常肌腱外观相似。组织学检查显示韧带为无细胞的胶原纤维。电镜检查显示韧带为走向一致的发状纤维样物紧密平行排列,表面有棉絮样物附着,未见细胞。人工韧带支架经生理盐水多次洗涤,洗去抗菌保存液后将异种骨髓基质细胞于支架中培养2周可见细胞成活。培养3周,韧带材料表面可见细胞粘附,内部未见细胞。扫描电镜观察,韧带材料中细胞培养3周,细胞呈球形粘附在韧带材料表面及孔隙侧壁,并可见细胞分泌的基质沉积于细胞周围,但基质分泌量较少。力学测试人工韧带直径约5mm,最大拉力为927.19N,抗拉强度47.22N/mm,速度100mm/min。正常山羊的前交叉韧带(ACL)直径约5mm,最大拉力为807.50N,抗拉强度41.13N/mm。结论应用新的组织处理技术研制的生物型人工韧带有效地去除了猪肌腱的异种蛋白的免疫原性,具有良好的生物力学特性,韧带材料的细胞相容性较好。有望应用在膝关节叉韧带重建,成为生物性人工韧带的理想产品。     

多孔羟基磷灰石、纤维蛋白和金葡液复合物修复骨缺损的实验研究

背景骨缺损的修复一直是骨科治疗的难点,寻找有效修复骨缺损的骨移植替代材料是目前骨缺损治疗的研究方向.目的探讨珊瑚多孔羟基磷灰石(coralline hydroxyapatite porous,CHAP)、纤维蛋白(fibrin sealant,FS)及金葡液(staphylococcus aureus injection,SAI)复合物修复骨缺损的作用及其作为人工骨移植替代材料的可行性.设计随机对照的试验研究.单位中山大学附属第三医院骨科.材料实验在中山大学动物实验室和解放军第一军医大学全军生物力学中心完成.羟基磷灰石,纤维蛋白,金葡液.方法采用新西兰大白兔54只在兔双侧桡骨制备骨缺损模型后分成实验组、对照组及空白组.将CHAP-FS-SAI复合物植入骨缺损处作为实验组,以自体骨植入作为对照组,空白组不植入任何物质.在2,4,8和12周分别进行大体标本观察,组织学,X射线片观察及生物力学测试,比较各组修复骨缺损的能力.主要观察指标动物一般情况,大体标本,X射线片,组织学,生物力学测定.结果实验组术后2周见植入物与骨端形成紧密的纤维性连接,镜下可见CHAP周围大量成纤维细胞、软骨细胞及细胞钙化.12周实验组和对照组均见大量成熟的骨细胞及板层骨;实验组见植入物完全骨化,塑形完全,CHAP未完全降解.空白组12周骨缺损区为纤维瘢痕组织填充.镜下主要为大量成纤维细胞.X射线片2周实验组与对照组有骨痂影.4周骨痂影增多.8周实验组骨缺损消失,CHAP分散在骨痂中;对照组骨折线消失,髓腔开始形成.12周实验组和对照组骨皮质连续,髓腔复通,塑形完全.空白对照组12周骨缺损区无骨性连接.生物力学测试最大扭矩及抗扭刚度在术后4,8,12周复合物组和自体骨组差异无显著性意义(P＞0.05).但术后2周,最大扭距实验组为(0.140±0.032)N·m,对照组为(0.105±0.035)N·m,抗扭刚度两组分别为(0.401±0.050),(0.311±0.050)N·m/rad,实验组高于对照组,差异有显著性意义(t=2.087 0,3.600 0,P＜0.05).结论CHAP-FS-SAI复合物具有较强的成骨能力和良好的生物相容性,能作为自体骨移植的一种替代物修复骨缺损.     

超声评估膝关节软骨退行性变的应用价值

目的：采用高频超声探查拟行关节镜手术及关节置换术的膝关节，评估超声对软骨退行性变的诊断效能。方法：选择2004-02／08在中山大学第三附属医院行膝关节镜手术患者36例37个膝关节及关节置换术患者4例4个膝关节。男13例，女27例，年龄8-75岁，病程1个月～20年。分别对每个膝关节的5个关节面，共计205个关节面的软骨进行高频超声探查，并将超声表现与关节镜结果及手术切除标本对照。结果：40例41个膝关节，均进入结果分析。超声诊断膝关节软骨退行性变的敏感性、特异性、准确性分别为64．9％，92．0％，76．5％。膝关节软骨退行性变超声表现为软骨表面毛糙、变薄或消失、局部隆起，回声改变和软骨下骨质改变等征象。结论：超声评估膝关节软骨退行性变具有一定的敏感性和较高的特异性．可作为诊断膝关节软骨退行性变的重要筛查手段。     

膝关节软骨退行性变的声像学表现

目的 探讨膝关节软骨不同时期退行性变（退变）的声像学表现，并设立相应的超声诊断标准。 方法 对行关节镜手术的9个膝关节用超声术中经皮实时观察，对关节置换术的2个膝关节标本（置生理盐水中）进行离体观察。 总结 正常膝关节软骨及软骨Ⅰ～Ⅳ期退变的超声表现。 结果 正常膝关节软骨表现为高-低-高“夹心饼断面”样回声带。膝关节软骨Ⅰ期退变通常改变很不明显。Ⅰ期退变软骨表面毛糙，轻度变薄或局部隆起。Ⅲ期退变软骨局部明显变薄。Ⅳ期退变软骨完全缺失。 结论 膝关节软骨除Ⅰ期退变外，其余各期关节软骨退变在超声上均有特定表现。     

自体和异体髌腱取材重建前交叉韧带术后的膝关节功能训练

目的：对自体、异体骨-髌腱-骨重建前交叉韧带术后介入功能训练改善膝关节功能情况进行评价。方法：病例来源于1998-11／2002—12在中山大学附属第二医院就诊的因前交叉韧带断裂而接受关节镜下骨-髌腱-骨重建前交叉韧带手术的患者18例，其中9例采用自体骨-髌腱-骨重建前交叉韧带（自体组），9例采用同种异体骨-髌腱-骨重建前交叉韧带（异体组）。两组患者术后进行系统性功能康复锻炼：①术后第1天起进行胭绳肌、股四头肌等长收缩练习。自体取材者2周后，异体取材者3周后进行直腿抬高、胭绳肌抗阻收缩训练。②被动和主动活动度训练，以患者能忍受为限：1周内完全伸直，自体取材者1周后练习屈膝，3周内达90&;#176;～100&;#176;。异体取材者1-3周后练习屈膝，4周内达9驴。（④负重行走：自体取材者1周内借助拐杖和支具帮助部分负重，逐渐完全负重，异体取材者2周后借助拐杖和支具帮助部分负重。④支具保护：自体取材者3-6个月，异体取材者6～10个月。⑤有氧运动：自体取材者3周后恢复低冲撞的有氧训练，6个月后开始恢复于术前水平相当的运动。异体取材者6周后恢复低冲撞的有氧训练，9～12个月后开始恢复于术前水平相当的运动。并根据患者的实际情况调整锻炼方案和时间。采用门诊随访和上门随访的方法，在术后3个月内每月随访1次，术后3～12个月每3个月随访1次，术后1年以上每6个月随访1次。观察手术前后膝关节稳定性，以前抽屉试验和Lachman轴移试验为量化指标（Lyslaolm评分，100分为正常，80分以上为优，79-70分为良，69-60分为中，60分以下为差），膝关节功能以膝关节活动度评价，比较主观满意度（满意3分、比较满意2分、可以接受1分、不满0分）。结果：两组患者在治疗中无脱失，在随访中无失访，各有9例患者纳入结果分析。随访27-77个月，平均41个月。①膝关节稳定性：18例患者术后均有明显改善；两组术前和术后前抽屉试验、Lachman试验轴移试验和稳定性单项评分比较，差异均无显著性（P均〉0．05）。②膝关节功能比较（Lysholm评分）：18例患者均有不同程度的提高（术前：27．6&;#177;17．9，术后：83．6&;#177;10．4），有显著性差异（P=0．000）；但自体组和异体组术前和术后比较（术前：29．0&;#177;16．9和26．2&;#177;19．7；术后：85．3&;#177;8．5和81．9&;#177;12．2），均无显著性差异（P=0．659，0．756）。（④患膝关节活动度：18例患者术后恢复正常或接近正常，但与术前无显著性差异；自体组和异体组术后比较（128．3&;#177;8．30和125．6&;#177;12．40），均无显著性差异（P=0．520，0．785）。④主观满意程度：11例满意，6例比较满意，1例可以接受；自体组和异体组间差异无显著性（2．7&;#177;0．5和2．4&;#177;0．7，P=0．537）。结论：自体骨-髌腱-骨及同种异体骨-髌腱-骨重建前交叉韧带术后短期效果相当，恢复了膝关节的稳定性，有利于接受和实施系统的功能训练，重建术后短期膝关节功能和患者主观满意度均较好。     

人骨髓基质干细胞体外诱导向软骨细胞分化

目的：探讨应用壳聚糖支架三维立体培养人骨髓基质干细胞(mesenchvmal stem cells，MSCs)，体外诱导其分化成为软骨细胞的可行性。方法：实验于2004—02／11在中山大学附属第三医院中心实验室完成。相分离法制备三维多孔壳聚糖支架，检测支架的孔隙率、孔径。抽取人骨髓，密度梯度离心法分离纯化，体外培养扩增。将第3代MSCs复合于支架中培养，应用无血清诱导液诱导细胞向软骨细胞分化，通过组织学染色及扫描电镜观察细胞的形态、增殖及功能的改变。结果：通过相分离法可制备出高孔隙率的三维壳聚糖支架，孔隙率达86．5％，孔隙分布均匀且相互连通，平均孔径182μm。诱导分化的MSCs在支架中贴附良好，呈现典型的软骨细胞形态，并有细胞外基质分泌：结论：人MSCs在三维立体培养环境下可诱导分化为软骨细胞，作为种子细胞在组织工程软骨的构建及软骨损伤的修复中有良好的应用价值。     

三种移植物关节镜下重建膝关节前交叉韧带效果比较：2年随访

目的:采用自体骨-髌韧带、自体双股半腱肌腱半膜肌及同种异体跟腱移植重建膝关节前交叉韧带,比较不同移植物的临床疗效。方法:选择1998-06/2003-02中山大学附属第三医院骨科单纯前交叉韧带损伤后行关节镜下重建手术病例96例,患者均签署知情同意书。根据不同移植物分为3组:①自体骨-髌韧带组38例,应用自体中1/3骨-髌韧带-骨移植物。②自体双股半腱肌腱股薄肌腱组22例,应用自体双股半腱肌腱股薄肌腱。③同种异体跟腱组36例,应用同种异体跟腱。术后定期随访,对膝关节活动度、肌力恢复程度、Werner髌股痛评分(最差为0分,最高为55分)、Lysholm评分(0～100分,分数越高膝关节功能恢复越好)、国际膝关节文献委员会评分(按病情严重程度分类分为正常、接近正常、异常、严重异常4个等级)等进行对比观察。结果:①96例患者随访2年,无脱落。②全部患者无感染,未发生髌骨骨折。也未发现关节内粘连、下肢深静脉血栓形成和血管神经损伤等并发症。③膝关节活动度、肌力恢复情况、髌股痛评分:随访结束时3组差异均无显著性意义(P>0.05)。④Lysholm膝关节评分:随访结束时自体骨-髌韧带组由术前(68.2±6.3)分提高至(88.6±6.8)分,自体双股半腱肌腱股薄肌腱组由术前(66.5±6.5)分提高至(86.4±6.6)分,同种异体跟腱组由术前(68.2±6.3)分提高至(86.3±6.2)分,随访结束时各组评分均显著高于术前(P<0.05),3组比较差异无显著性意义(P>0.05)。⑤国际膝关节文献委员会评分(术后活动水平正常或接近正常):随访结束时自体骨-髌韧带组为87%,自体双股半腱肌腱股薄肌腱组为86%,同种异体跟腱组为89%,各组移植术后膝关节功能均有所改善,3组间差异无显著性意义(P>0.05)。结论:关节镜下采用自体骨-髌韧带、自体双股半腱肌腱股薄肌腱和同种异体跟腱移植重建前交叉韧带,均能明显改善膝关节运动功能,3种移植方法的临床疗效无明显差异,提示重建前交叉韧带的术后疗效与移植物种类的相关性不明显。     

一种提取大鼠膝关节软骨下骨总RNA的方法

在关于骨性关节炎软骨下骨的研究中,大鼠膝关节骨关节炎模型最常使用.从细小的大鼠膝关节分离并抽提出高质量的软骨下骨总RNA样品十分困难.我们使用微动力磨钻液氮下打磨分离大鼠膝关节软骨下骨,结合Trizol与硅胶离心柱提取软骨下骨总RNA的纯化方法,是一种简单、可靠、实用的提取完整和高纯度软骨下骨总RNA的新方法.     

胸椎椎弓根外固定技术的临床应用☆

应用椎弓根外内固定技术2004/2007年在中山大学附属第三医院骨科治疗34例患者，固定前采用CT加密扫描测量进钉点、进钉点至椎体前缘的深度、进钉角度和直径，固定中椎弓根钉入点为横突尖，进钉方向为平均向头侧倾斜10°~ 20°、与中线成角30°~40°，顺椎弓根外侧皮质进入椎体，固定后CT加密扫描观察螺钉周围的皮质骨是否完整、是否靠近节段血管、是否穿透皮质骨，评价置入钉的准确性和安全性。34例患者共置入160枚胸椎椎弓根螺钉,固定后CT加密扫描和X射线片观察到148枚(92.5% )螺钉置入准确，12枚(7.5%)螺钉发生错置。实验结果表明，胸椎椎弓根根外内固定与椎弓根内固定相比，具有更宽的置入宽度，更长的螺钉长度，以及更大的内聚角度，具有安全可靠、简单实用等优点，并具有生物力学优越性，是胸椎后路内固定的一种良好选择。     

纳米左旋聚乳酸/聚己内酯复合骨髓基质源性软骨细胞修复犬膝关节软骨缺损

目的探讨纳米左旋聚乳酸/聚己内酯(纳米PLLA-b-PCL)复合骨髓基质源性软骨细胞修复犬膝关节软骨缺损的可行性。方法将纳米PLLA-b-PCL支架/骨髓基质源性软骨细胞复合物植入犬膝关节软骨缺损,其为实验组;另一组膝关节造成缺损后旷置,作为空白对照。术后12周,24周取材,行大体及组织学观察,组织学评分。结果术后12周、24周大体形态学和组织学观察均表明实验组得到较好修复,而对照组缺损未修复。结论骨髓基质细胞源性软骨细胞是修复关节软骨缺损较理想的种子细胞;纳米PLLA-b-PCL在新生软骨形成的同时,逐渐降解吸收,是组织工程修复关节软骨缺损的适宜支架材料,其具有良好的应用前景。