穹隆海马伞切断与卵巢切除大鼠大脑皮质和海马CA1区酪氨酸激酶A与淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶共存观察

目的：观察穹隆海马伞切断加卵巢切除大鼠大脑皮质区、海马CA1区酪氨酸激酶A与淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶共存表达的变化。 方法：实验于2003—03／12在青岛大学医学院附属医院脑病防治重点实验室完成。选择成年健康雌性Wistar大鼠14只，随机分为穹隆-海马伞切断加卵巢切除组和对照组，每组7只。穹隆海马伞切断参照Klein等的方法，动物麻醉固定于脑立体定位仪后，参照Paxinos等大鼠脑立体定位图谱于前囟后2．2-2．5mm，中线外1．0mm处凿开颅骨，切开硬脑膜，自制双刃刀完全切断海马伞外侧缘。双侧卵巢切除参照Singh等的方法，麻醉动物后，打开腹腔，在肾脏下方的脂肪内取出卵巢，结扎并切除。对照组除不切断穹隆-海马伞和不切除卵巢外，其余步骤同穹隆-海马伞切断加卵巢切除组。免疫荧光双标细胞化学染色。激光共聚焦显微镜下观察大鼠大脑皮质区、海马CA1区酪氨酸激酶A、淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶阳性细胞表达及其共存表达的变化。 结果：实验过程中，无动物死亡，全部进入结果分析。穹隆-海马伞切断加卵巢切除组大鼠大脑皮质区、海马CA1区酪氨酸激酶A绿色荧光细胞数与对照组比较显著减少[皮质区（11．85&;#177;8．11），（22．14&;#177;8．68），P〈0．05]；[海马CA1区（11.28&;#177;3．04），（17.28&;#177;5．85），P〈0．05]。淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶红色荧光细胞数与对照组比较显著增多[皮质区（21.14&;#177;6．20），（5．57&;#177;3.10），P〈0．01];[海马CA1区（12．43&;#177;6．24），（3．42&;#177;2．76），P〈0.01]。海马CA1区呈现黄色荧光的舣标细胞数与对照组比较显著增多[（5．71&;#177;3．64），（0．57&;#177;1．51），P〈0．01]，大脑皮质区呈现黄色荧光的双标细胞数与对照组比较，差异无显著性意义[（5．71&;#177;3．14），（2．85&;#177;3．07）。P〉0．05]。 结论：穹隆海马伞切断加卵巢切除大鼠大脑皮质区、海马CA1区出现淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶表达增多、酪氨酸激酶A表达减少，海码CA1区共存细胞表达增多现象，说明神经生长因子系统与淀粉样β蛋白前体系统可能存在内在的相互联系。     

碱性成纤维细胞生长因子促进大鼠脑缺血再灌注后肢体功能恢复的神经可塑性研究

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(basicfibooblastgrowthfactor,bFGF)能否促进大鼠局部脑缺血再灌注后的功能恢复并从神经可塑性角度探讨其机制。方法:线栓法制作Wistar大鼠大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO)模型,随机分为bFGF组、对照组、假手术组及正常组,采用行为测试试验评分观察肢体功能恢复情况,免疫组化法观察脑缺血周边区微管相关蛋白-2(microtubulinassociatedpretein2,MAP-2)和生长相关蛋白-43(growthassociatedprotein43,GAP-43)的免疫活性强度。结果:bFGF组前肢放置试验和平衡试验评分优于对照组,前肢放置试验在第9,11,13,15,17,19,21,23,25,27天差异具有统计意义(P<0.01～0.05),平衡试验在第13,15,19,23,25,27天差异有统计学意义(P<0.05)。bFGF组皮质缺血周边区MAP-2和GAP-43表达水平高于对照组,前者在第21,28天(0.388±0.057,0.379±0.049比0.275±0.058,0.260±0.066),差异有统计学意义(t=2.77,2.89,P<0.05),后者在第15,21,28天差异有统计学意义(P<0.01～0.05)。结论:外源性给予bFGF能促进大鼠MCAO后的肢体功能恢复,其机制可能与缺血周边区GAP-43和MAP-2的表达上调有关。     

小鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型的建立和评价

背景:绝大多数转基因实验动物来源于小鼠,建立一种小鼠局灶性脑缺血再灌注模型对缺血性脑血管病的防治研究具有重大意义。目的:建立一种适用于医学研究的、简便可靠的小鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型。设计:随机对照动物实验。单位:青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所。材料:健康BALB/c小鼠20只,雌雄不拘,体质量25～30g,SPF级,随机数字表法分为假手术组(5只)、缺血组(10只)和再灌注22h组(5只)。健康昆明雄性小鼠130只,雌性30只,体质量25～30g,SPF级,其中雄性小鼠随机数字表法分为假手术组10只,缺血24h组30只,缺血2h再灌注22,46,70h组各30只;雌性小鼠随机数字表法分为假手术组10只,缺血24h组10只,缺血2h再灌注22h组10只。方法:实验于2005-07/2006-03在青岛大学医学院附属医院脑血管疾病研究所完成。上述SPF级BALB/c小鼠与昆明小鼠,应用头端涂适量硅胶的6-0单尼龙线自小鼠左侧颈外动脉向颈内动脉插入至大脑中动脉起始部,阻断其血流2h后拔出线栓实现再灌注。假手术组术后24h,缺血组阻断血流24h后,再灌注组分别于术后24,48,72h,麻醉下断头取脑。以神经行为功能评分和氯化三苯基四氮唑染色对模型的可靠性进行评价。Longa标准评分:神经行为功能评分≥1分为模型成功的标准;脑组织冠状切片,氯化三苯基四氮唑染色,白色区域为梗死区。主要观察指标:各组小鼠神经行为功能评分,脑组织氯化三苯基四氮唑染色后梗死体积。结果:实验动物全部进入结果分析。①模型成功率BALB/c小鼠约为20%,昆明小鼠雄性为66.7%～73.3%,昆明小鼠雌性为40%～50%。②BALB/c小鼠假手术组氯化三苯基四氮唑染色的脑切片上,两侧皮层呈均匀的橘红色,未见梗死灶。BALB/c小鼠缺血组小鼠脑切片上可见较大的苍白色梗死区,在经视交叉的冠状切片上,梗死区占同侧半球体积的50%～75%,昆明小鼠表现与BALB/c小鼠相似,但梗死区占同侧半球体积的40%～65%。缺血再灌注组与缺血组相似,小鼠脑切片上可见较大的苍白色梗死区,在经视交叉的冠状切片上,梗死区占同侧半球体积的50%～75%,昆明小鼠表现与BALB/c小鼠相似,但梗死区占同侧半球体积的40%～65%。结论:线栓法制作昆明小鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型创伤小,缺血的部位较恒定,可以准确控制缺血和再灌注时间,可以成为研究脑血管疾病的病理生理改变、预后及治疗作用的理想实验动物模型。     

肾血管性高血压大鼠模型的建立和评测

背景:建立一种有效并简便可靠的高血压动物模型,对研究高血压的机制和治疗有重要的意义。目前,国内外常利用犬、大鼠、兔等实验制作高血压动物模型,其中肾动脉狭窄性高血压模型由于简便可靠被广泛应用于人类高血压及其并发症的研究。目的:建立简便、可靠的大鼠实验性肾动脉狭窄性高血压模型。设计:随机分组设计、动物实验。单位:青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所。材料:实验于2005-09/2006-02在山东省脑病防治重点实验室完成。选择健康Wistar大鼠81只,随机数字表法分为单侧肾动脉狭窄组18只,双侧肾动脉狭窄组17只,单侧肾动脉结扎组15只,双侧肾动脉结扎组15只,单侧肾动脉狭窄假手术组6只,双侧肾动脉狭窄假手术组4只,正常对照组6只。方法:单侧肾动脉狭窄组,微型银夹夹闭右侧肾动脉,12d后手术切除左侧肾脏。双侧肾动脉狭窄组,微型银夹夹闭右侧肾动脉,12d后左侧做同样处理。单侧肾动脉结扎组,丝线结扎右侧肾动脉,12d后手术切除左侧肾脏。双侧肾动脉结扎组,丝线结扎右侧肾动脉,12d后左侧做同样处理。单侧肾动脉狭窄假手术组,手术暴露右侧肾脏,不做处理放回原位。12d后切除左侧肾脏。双侧肾动脉狭窄假手术组,手术暴露右侧肾脏,不做处理放回原位,12d后左侧做同样处理。正常对照组6只,不作任何处理。应用RBP-2大鼠血压计测量鼠尾血压和心率。主要观察指标:造模成功率、大鼠血压、心率。结果:纳入动物81只,死亡61只,均进入结果分析。①血压:单侧肾动脉狭窄组、双侧肾动脉狭窄组、双侧肾动脉结扎组血压明显高于正常对照组、双侧肾动脉狭窄假手术组[分别为(138.0±36.5),(154.2±11.6),(160.5±0.7),(101.3±17.6),(108.3±5.7)mmHg]。②心率:各肾动脉狭窄组动物心率变化不稳定,单侧肾动脉狭窄组、双侧肾动脉狭窄组、双侧肾动脉结扎组、正常对照组、双侧肾动脉狭窄假手术组分别为[(367.5±47.2),(420.2±47.8),(386.0±4.2),(390.3±42.4),(417.3±27.5)次/min]。③存活率:肾动脉狭窄组存活率(单侧22%,双侧29%)显著高于肾动脉结扎组(单侧0,双侧12%),以双侧肾动脉狭窄组存活率最高。结论:双侧肾动脉夹闭法可建立稳定的肾动脉狭窄性高血压大鼠模型。     

ERCP在肝细胞癌并胆管癌栓时的应用

目的 探讨ERCP在肝细胞癌合并胆管癌栓处理中的作用。方法 回顾分析15例肝细胞癌合并胆管癌栓患者的ERCP诊疗结果。其中ERCP检查后行内镜下胆管支架引流术8例；内镜下鼻胆管引流术7例；ENBD后再行内镜下胆管金属支架引流术4例；内镜下乳头括约肌切开术后取栓及细胞刷12例。ERCP加综合治疗9例。结果 胆管造影共同表现为胆管腔内充盈缺损，可呈“球拍征”、“凝絮征”；ERCP治疗后13例有效。有效率为86．7％．ERCP后同时行综合治疗，均获良好的治疗效果。结论ERCP在肝细胞癌并胆管内癌栓的诊治中有重要作用，“球拍征”、“凝絮征”是重要胆管癌栓征象。     

四逆汤(附子、干姜、甘草)对肾血管性高血压大鼠血压调节作用的实验研究

目的 探讨四逆汤对肾血管性高血压大鼠血压的调节作用和可能的机制.方法 健康雌性Wistar大鼠24只,随机分为正常组、对照组和治疗组,每组8只.根据双肾动脉夹闭法建立肾性高血压动物模型,应用四逆汤(附子、干姜、甘草)灌胃治疗2周,RBF-2型鼠尾动脉血压计测量血压,放射免疫法测定血浆中血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)和降钙素基因相关肽(CGRP)的含量,TUNEL法检测肾组织细胞凋亡,免疫组化法测定肾组织中Ang Ⅱ和CGRP的表达.结果 (1)对照组和治疗组大鼠血压较正常组明显升高,四逆汤能明显降低血压[(131.6±14.2 vs 116.2±8.3)mm Hg,P＜0.05].(2)各组动物血浆AngⅡ水平无显著性变化(P＞0.05),治疗组CGRP含量较对照组明显升高[(75.2±12.2 vs 54.8±18.1)pg/mL,P＜0.05].(3)四逆汤治疗明显减少肾小球凋亡阳性细胞数(12.6±3.5 vs 29.4±3.5细胞个数/10个视野, P＜0.05);治疗组明显降低AngⅡ表达水平,显著升高CGRP表达水平(P＜0.05).结论 四逆汤可能通过调节肾血管性高血压大鼠血浆和肾组织中血管活性物质Ang Ⅱ和CGRP的水平,发挥其血压调节和保护高血压靶器官的作用.     

正常成人胰岛移植治疗糖尿病的实验研究

目的探讨正常成人胰岛移植治疗糖尿病的作用。方法 2012年1月至2013年1月健康成人胰腺供体共13例。获取胰腺后经胶原酶消化并进行胰岛提取纯化,将纯化后的胰岛移植到糖尿病裸鼠肾包膜下为实验组,生理盐水代替胰岛移植为对照组,各13只。术后通过检测糖尿病裸鼠的血糖变化和组织学检查来判定胰岛移植后的存活情况和纠正血糖的效果。结果成人胰腺消化后胰岛产量为纯化前（3608±403）IEQ/g,纯化后（2820±318）IEQ/g,纯度为85%。实验组84.6%（11/13）糖尿病裸鼠在移植术后第1天,血糖降至正常,对照组血糖无明显变化。两组糖尿病裸鼠存活时间：实验组存活时间35～57d,中位存活时间46d。对照组存活时间5～12d,中位存活时间7d。两组比较差异具有统计学意义,Log-rank（Mantel-Cox）值为8.74,P值为0.0012。结论成人胰腺消化后,可得到高纯度活力正常的胰岛,并能纠正糖尿病裸鼠的高血糖。正常成人胰岛移植可能成为临床糖尿病患者的一种有效治疗方法。     

慢性应激对大鼠学习能力和决策行为的影响

目的：观察慢性应激状态下大鼠学习能力和决策行为的变化。方法：实验于2005—07／12在青岛大学医学院附属医院脑病防治重点实验室完成。成年健康雌性Wistar大鼠32只，随机抽签法分为慢性应激组和对照组，每组16只。其中8只用于学习能力测试，另8只用于决策行为测试。慢性应激主要按照Moreau和Froger等的方法进行。主要有：①冷水游泳，30min／次。②束缚大鼠四肢，3h／次。③每周各2次食物剥夺12h。④饮水剥夺14h。⑤彻夜光照14h。⑥湿笼饲养14h。每周随机交替进行，共4周。大鼠学习能力参照文献方法进行，采用MG-2型迷宫刺激器，将大鼠放入迷宫箱后予以电击，至其逃避至安全区为止。规定大鼠逃避至安全区为正确反应，否则为错误反应，休息1min后再进行第2次测试，依次重复。直到大鼠连续10次测试中有9次正确反应为止，记录其所需要的电击次数，作为学习成绩。决策行为观察主要参照Froger和Pardon等方法进行。所用设备包含3个等长的臂，离地面高1m，中间和右侧臂有透明的臂和底是安全的，左侧臂悬浮在地面上空开，有潜在的不安全性。行为范式是进行两个相隔10s的行为测试实验。第一个实验只探索安全臂，另一个臂被门阻挡，动物放在开始的盒子里，10s后到中心路径的门被打开，当大鼠将四肢放在目标盒子里，本次试验被认为完成，无时间限制。第二个实验，大鼠在目标盒子里限制5s后，移走并且放在开始的盒子里，10s后，门被打开，可自由接近两个臂，当大鼠将四肢放人两个目标臂中的任何一个，或者时间超过5min，则认为实验完成。在两个实验中，开始打开门到关闭门的时间[解决任务的时间]最长限定为5min。各进行50次实验。结果：16只大鼠均进入结果分析。①学习能力方面：慢性应激组大鼠迷宫电击次数（学习成绩）比对照组显著增多[（40．52&;#177;5．49），（26．37&;#177;6．75）次，t=4．60，P〈0．011。②决策能力方面：慢性应激组大鼠的选择次数与对照组差异无显著性意义[（15．7&;#177;2．8），（15．2&;#177;2．1）次，t=0．40，P〉0．05]；慢性应激组回避次数比对照组显著增多[（30．6-&;#177;5．2），（21．3-&;#177;4．5）次，t=3．83，P〈0．01]；无选择次数比对照组显著减少[（5．5&;#177;2．1），（15．4&;#177;3．8）次，t=6．43，P〈0．011；慢性应激组大鼠两个实验解决任务的时间均比对照组显著减少[实验1：（59．7&;#177;6．2），（105．5&;#177;11．8）s，t=6．55，P〈0．01]；[实验2：（46．9&;#177;9．2），（112.8&;#177;13．5）s，t=11．4，P〈0．01]。结论：慢性应激可导致大鼠学习能力显著下降，决策能力损伤。慢性应激可能导致大鼠大脑发生相应的病理改变。主题词：慢性应激；学习；决策；鼠     

99mTc-MIBI乳腺显像检测乳癌及腋淋巴结转移

目的 前瞻性评价＾９９ｍＴｃ－甲氧基异丁基异腈（＾９９ｍＴｃ－ＭＩＢＩ）乳腺显像检测原发性乳癌和腋淋巴结转移的灵敏度和特异性。方法 ８４例经临床病理学检查可疑乳癌妇女，应用＾９９ｍＴｃ－ＭＩＢＩ进行乳腺平面俯卧左、右侧位和仰卧前位显像，每一体位采集时间５～８ｍｉｎ。乳房和腋窝区域包括在采集视野内。切除的乳腺和腋淋巴结的病理检查均在乳腺显像后１０ｄ内进行。结果 乳腺平面显像检测原发性乳癌的灵敏度为９