基于网络药理学探讨参莲方治疗动脉粥样硬化性心血管病的作用及机制

目的 采用网络药理学方法分析抗动脉粥样硬化中药参莲方治疗动脉粥样硬化性心血管病（ASCVD）的活性成分、作用靶点和分子通路，探索参莲方治疗ASCVD的可能性及作用机制，并为其组方配伍的合理性阐释提供依据。方法 借助SymMap数据库与中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）获取参莲方主要化学成分，SymMap和ETCM检索化合物靶点，通过DisGeNET和GEO数据库检索疾病靶点；化合物靶点与疾病靶点作交集得到参莲方作用于ASCVD的预测靶点。运用STRING数据库构建靶蛋白相互作用（PPI）网络图，导入Cytoscape3.6.0筛选参莲方作用于ASCVD的关键化合物和关键靶点，进而用David将富集到的关键靶点进行基因本体（GO）功能富集和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路分析。采用大鼠心肌缺血-再灌注模型作为ASCVD代表性疾病模型进行实验验证。结果 参莲方作用于ASCVD的候选化合物有59个，预测靶点67个，关键化合物有20个，关键靶点有29个。通过“药材-成分-靶标-通路”多维网络分析参莲方组方药物的共同靶点有12个，主要包括花生四烯酸合成前列腺素的限速酶环加氧酶2（PTGS2），雌激素受体1（ESR1），凋亡相关基因TP53等。GO分析结果显示，参莲方治疗ASCVD关键靶点的生物功能主要涉及细胞凋亡、一氧化氮的合成、雌二醇反应、血管生成、炎症反应等；KEGG通路主要富集到TNF信号通路、磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路、低氧诱导因子-1（HIF-1）信号通路、细胞凋亡等。其中，参莲方组方药物对凋亡的调控作用，可能既共同作用于TP53，又分别作用于细胞凋亡的不同信号通路，从而发挥协同作用。体内实验验证结果证实，参莲方对大鼠心肌缺血-再灌注损伤有明显的保护作用，能够显著减少心肌梗死面积，改善心肌组织病理学变化，对心肌线粒体损伤的减轻作用尤为明显。进一步分析发现，参莲方对线粒体凋亡通路活化相关蛋白表达有明显抑制作用。结论 抗动脉粥样硬化中药参莲方可有效干预ASCVD，影响心肌细胞线粒体凋亡是其保护心肌缺血-再灌注损伤的作用机制之一。     

二甲双胍通过激活AMPK/STAT3通路调控巨噬细胞分化抑制小鼠动脉粥样硬化形成

目的 探究二甲双胍(Met)通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路调控巨噬细胞表型对小鼠动脉粥样硬化(As)形成的影响。方法 体外培养RAW264.7巨噬细胞,使用脂多糖促进巨噬细胞分化,同时使用Met刺激细胞。流式细胞术检测不同表型(CD86、CD206)巨噬细胞比例。Western blot检测相关信号通路蛋白诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg-1)、AMPK、磷酸化AMPK(pAMPK)、STAT3、磷酸化STAT3(pSTAT3)蛋白表达水平。高脂饲料喂养ApoE－/－小鼠构建As模型。实验组(Met组)小鼠予Met灌胃干预,对照组(CTL组)小鼠给予同体积生理盐水灌胃干预。3个月后,提取小鼠大动脉全长(头臂干至双侧髂动脉)及主动脉根部,分别行油红O染色和免疫荧光染色,评价主动脉脂质沉积情况和脂质斑块内巨噬细胞不同表型比例。提取大动脉蛋白,Western blot验证相关信号通路的AMPK、pAMPK、STAT3、pSTAT3蛋白表达水平。结果 细胞实验表明,Met刺激后M1巨噬细胞比例明显减少,M2巨噬细胞比例明显增加(P＜0.05),AMPK活性明显增加,而STAT3活性明显下降。动物实验表明,在造模3个月后,油红O染色示Met组小鼠大动脉全长和主动脉瓣膜处脂质沉积均较CTL组明显减少(P＜0.05)；免疫荧光染色示Met组脂质斑块内M1巨噬细胞比例较CTL组明显减少,而M2巨噬细胞比例较CTL组明显增多(P＜0.05)。Western blot实验显示,与CTL组相比,Met组AMPK活性明显增加,而STAT3活性明显降低(P＜0.05)。结论 Met通过激活AMPK抑制STAT3活性,调控斑块内巨噬细胞表型分化,抑制小鼠As形成。     

症状性颅内粥样硬化患者前循环低灌注与缺血性卒中复发相关性的定量研究

目的：探讨症状性颅内动脉粥样硬化性疾病（intracranial atherosclerotic disease，ICAD）患者前循环低灌注与缺血性卒中复发的相关性。方法：回顾性分析130例由大脑中动脉狭窄引发的症状性ICAD患者，根据急性缺血性卒中事件发生次数将其分为初发组（n=92）和复发组（n=38），基于残余功能达峰时间（time to maximum of the residual function，Tmax）阈值Tmax>4 s及Tmax>6 s定量低灌注体积。采用独立样本t检验、非参数检验、卡方检验或Fisher精确概率法对比分析两组患者大脑中动脉狭窄率、分水岭梗死发生率、Tmax> 6 s及Tmax> 4 s的低灌注体积，多因素Logistic回归探讨缺血性卒中复发相关的独立危险因素，并进行ROC曲线分析。结果：与初发组相比，复发组血管狭窄率更高（P=0.003）、分水岭梗死发生比例更高（P=0.037）、Tmax>6 s及Tmax>4 s 的低灌注体积更高（P值均＜0.001），其中Tmax>4 s的低灌注体积是与缺血性卒中复发相关的独立危险因素（OR=1.120，低灌注体积每增加10 mL，95% CI：1.051~1.194，P＜0.001），ROC曲线下面积为0.756（95% CI：0.672~0.839），灵敏度76.3%，特异度63.0%。结论：基于时间阈值Tmax>4 s量化的低灌注体积，是前循环症状性ICAD患者卒中复发的独立危险因素，可能成为预警缺血性卒中复发的有效影像学标志物。     

动脉粥样硬化脑缺血/再灌注动物模型的研究进展

脑卒中是目前导致人类死亡与残疾的三大主要疾病之一,严重的危害了人类健康。其中缺血性脑卒中发生率占60%⁸0%。动脉粥样硬化是诱发心脑血管疾病的主要病理基础。合理的动物模型是实验研究的基础,动物模型的建立方法应最大可能的符合疾病实际的发展演变过程,而动脉粥样硬化脑缺血/再灌注动物模型更接近临床发病的病理过程,具有重大的研究价值。该文总结了近年关于该动物模型的研究报道,为该疾病模型的制作与研究提供参考。     

白鲜皮水提物对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化晚期病变形成的影响

目的研究白鲜皮水提物(cortex dictamni aqueous extract,CDAE)对载脂蛋白E基因缺损小鼠主动脉弓粥样硬化晚期病变形成的影响及其机制。方法将40只ApoE-/-小鼠随机分成空白对照组和CDAE高、中、低3剂量组(CDAE3.2、1.6、0.8 g·kg-1),每组10只。从第12周龄开始给药至18周龄。实验结束时测定给药前后总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平。取各组小鼠主动脉弓,OCT包埋,每只小鼠制作80张病理切片(厚6μm),计算各组主动脉弓粥样硬化病变的面积。体外实验测定CDAE给药后平滑肌细胞的增殖和迁移能力。结果CDAE给药后可明显减少动脉粥样硬化斑块面积,CDAE中、高剂量组给药后ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变面积均小于对照组(P<0.05,P<0.01),各给药组血脂水平均有不同程度的下降。体外实验表明,CDAE可明显抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖和PDGF诱导的平滑肌细胞迁移。结论CDAE对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化晚期病变形成具有明显的抑制作用,其作用机制可能与降低血脂水平,抑制平滑肌细胞的增殖和迁移能力有关。     

马来酸依那普利叶酸片对H型高血压并发2型糖尿病患者颈动脉粥样硬化的影响及可能机制

目的:探讨马来酸依那普利叶酸片对H型高血压并发2型糖尿病(T2DM)患者颈动脉粥样硬化的影响及可能机制。方法:采用前瞻性对照研究。选择2014年1月-2016年1月于重庆市人民医院诊治的H型高血压并发T2DM患者182例,随机分为观察组与对照组各91例。所有患者在采用基础或预混胰岛素降血糖基础上,观察组患者口服马来酸依那普利叶酸片(每片含马来酸依那普利10 mg、叶酸0.8 mg)1片,每日1次;对照组患者口服马来酸依那普利片(每片含马来酸依那普利10 mg)1片,每日1次。疗程均为12个月。测定两组患者治疗前和治疗12个月后血压、血浆同型半胱氨酸(Hcy)、空腹血糖(FBG)、C反应蛋白(CRP)水平和颈动脉斑块积分。结果:与治疗前比较,治疗12个月后,两组患者收缩压、舒张压均显著降低(P<0.05),但组间比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后观察组血浆的Hcy、FBG、CRP水平和颈动脉内中膜厚度、颈动脉斑块积分均明显低于对照组(P<0.05)。结论:马来酸依那普利叶酸片可通过降低血浆Hcy、FBG和CRP水平来缓解炎症反应,从而对H型高血压并发T2DM患者颈动脉粥样硬化发挥治疗作用。     

雷公藤多苷片对高脂小鼠血脂的影响

目的 研究雷公藤多苷片对高脂小鼠血脂的影响。方法 采用高血脂小鼠模型,通过小鼠尾静脉注射不同剂量（0.5,1.0,1.5 mg·kg^-1·d^-1）雷公藤多苷,测定不同时间段小鼠体质量和血清总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（totaltriglyceride,TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low densitylipoprotein cholesterol,LDL-C）的含量及卵磷脂胆固醇酰基转移酶（lecithin cholesterol acyltransferase,LCAT）、肝脂酶（hepatic lipase,HL）和脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase,LPL）的活性,研究雷公藤多苷对小鼠体质量、血脂代谢、动脉粥样硬化指数、肝脏LCAT水平等的影响。结果 给予高脂饲料后小鼠体质量和血脂显著升高（P<0.01）,动脉粥样硬化指数显著升高（P<0.01）,抗动脉粥样硬化指数显著下降（P<0.01）。注射雷公藤多苷能显著降低高血脂模型小鼠血清TC、TG和LDL-C,同时显著降低高脂饮食所导致的动脉粥样硬化指数升高。此外,雷公藤多苷片能显著提高血清LCAT水平和HL、LPL的活性。结论 雷公藤多苷片具有一定的降血脂功能,并能有效降低动脉粥样硬化的发生几率。     

ApoE基因敲除小鼠主动脉肿瘤坏死因子-α/p38丝裂原活化蛋白激酶/血清核因子-κB/视黄醇结合蛋白信号通路变化研究

目的 通过观察ApoE基因敲除动脉粥样硬化小鼠主动脉肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinases,p38MAPK)/血清核因子-κ B(Nuclear Factor κB,NF-κ B)/视黄醇结合蛋白(Retinol Binding Protein-4,RBP4)信号通路变化,探讨RBP4在动脉粥样硬化的炎症反应过程的作用及发生机制.方法 10只ApoE-/-小鼠给予高脂饲料喂养8周,进行动脉粥样硬化模型复制,空白对照组选取具有相同遗传背景的同龄野生型C57BI/6J小鼠10只.饲养8周后,分离两组小鼠血清,分离主动脉,分别保存于4％多聚甲醛和-80℃冰箱.Elisa法检测小鼠血清TNF-α、RBP4水平变化,全自动生化分析仪检测血清中甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白(High density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、血清总胆固醇(Total cholesterol,TC)水平,HE染色法观察两组小鼠主动脉组织形态学变化,蛋白质印迹法和RT-PCR法检测主动脉TNF-α、p38MAPK、NF-κB、RBP4蛋白和基因表达情况.结果 血脂水平检测发现,与空白对照组相比,模型组小鼠血清中TG、TC、LDL-C水平显著升高(P＜0.01),HDL-C水平显著降低(P＜0.01);HE染色观察发现,较空白对照组小鼠,模型组实验小鼠主动脉管腔内可见较大的AS斑块形成.蛋白质印迹法(western blot)结果显示,与空白对照组比较,模型组小鼠TNF-α[(0.93±0.05) mg·L-1,t=-9.079,P＜0.001)]、NF-κB[(0.82±0.03) mg·L-1,t=-9.718,P＜0.001]水平明显升高,p38MAPK、RBP4水平显著升高(P＜0.01).PCR结果显示,模型组小鼠TNF-α(0.78 ±0.03 mg·L-1)和RBP4 (0.39±0.02 mg·L-)水平较空白对照组明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 TNF-α/p38MAPK/NF-κB/RBP4信号通路可能参与了动脉粥样硬化的形成及炎症反应过程.     

2型糖尿病患者手部关节活动受限与动脉粥样硬化的超声研究

目的探讨2型糖尿病患者手部关节活动度受限(limitied joint mobility,LJM)与颈动脉内中膜厚度(intima-media thickness,IMT)和斑块Crouse积分之间的关系。方法连续收集解放军第211医院住院的2型糖尿病患者200例(男性116例,女性84例),将患者分为LJM组(43例)和非LJM组(157例)两组。对患者利用"祈祷标志"诊断有无LJM。利用高频超声技术检测颈动脉内中膜厚度(IMT)及斑块Crouse积分。同时收集患者自然信息及临床指标,比较两组间各指标的差异。结果 200例患者中,43例患者存在手部LJM。两组间比较LJM组患者颈动脉IMT、斑块Crouse积分明显高于非LJM组;LJM组患者年龄、患病时间、糖化血红蛋白值较非LJM组差异明显,具有统计学意义(P0.05);多元线性回归分析显示,手部LJM与颈动脉斑块Crouse积分呈正相关(β=0.424,P=0.043)。结论 2型糖尿病患者手部LJM与动脉粥样硬化有密切关系,尤其是动脉斑块Crouse积分。糖尿病手的诊断简单无创,可以对2型糖尿病患者的动脉粥样硬化进行初步的评估。