不同血清型汉坦病毒基因重排的研究

目的探明汉坦病毒HTN型与SEO型、HTN型与PHV型之间基因重排的频率和特点。方法分别用相同滴度的汉坦病毒HTN型与SEO型(76-118株与SR-11株),及汉坦病毒HTN型与PHV型(76-118株与PHV株)毒株分别混合感染VeroE6细胞,用空斑形成试验挑选子代病毒克隆,挑得的单个病毒克隆在VeroE6细胞上扩增。分别用分型引物对子代病毒进行RT-PCR实验,以确定子代病毒L、M、S片段核酸的来源,鉴定子代病毒基因型。结果发现76-118株与SR-11株混种的子代病毒株基因30/44株来源于亲代病毒,9/44株子代病毒发生了基因片段重排。76-118株与PHV株混种的子代病毒株基因26/36株来源于亲代病毒,3/36株子代病毒发生了基因片段重排。76-118株与SR-11株混种的子代病毒株的基因重排率(20.45%)明显高于76-118株与PHV株混种的子代病毒株(8.33%)。结论这种重排率的差异可能是由于HTN型与SEO型HV基因核酸序列之间的同源性较高,而更容易发生基因重排。而HTN型与PHV型HV基因核酸序列之间的同源性较低,发生基因重排的机会显著降低。     

汉滩病毒核蛋白诱导肾综合征出血热患者的T淋巴细胞反应

目的 测定汉滩病毒(HTNV)核蛋白(NP)C-端多肽诱导肾综合征出血热(HFRS)患者的特异性T淋巴细胞反应,为HFRS发病机制、疫苗研制及抗病毒免疫反应研究提供资料.方法 采用Ficoll密度梯度离心法,分离HFRS恢复期患者外周血单个核细胞(PBMC),用IFN-y酶联免疫斑点试验(ELIspot)测试13名患者对23条多肽的T淋巴细胞反应,筛选出反应较强的肽段.结果 5名患者有不同程度的肽特异性T细胞反应.No.70肽可诱导3号和10号患者分泌IFN-y,T细胞频率分别为51和55 SFC/106 PBMC,No.51肽可诱导4、7、12号患者分泌IFN-y,T细胞频率分别为90、65、95 SFC/106PBMC.结论 No.51肽和No.70肽可诱导较强的T淋巴细胞反应,可能是NP C端的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)袁位.     

老年肾综合征出血热患者的营养状况分析

目的 :分析老年肾综合征出血热 (HFRS)患者的营养状况 ,探讨患者的营养状况对其发病、疗效、预后的影响。方法 :回顾性分析 13 1例老年HFRS患者的营养状况和救治效果。检测 13 1例老年HFRS患者的营养指标 ,如BMI、血清总蛋白 (TP)、白蛋白 (ALB)、血红蛋白 (HGB)、总淋巴细胞计数 (TLC)和氮平衡 (BN )。结果 :13 1例老年HFRS患者中 62 4%存在营养失衡 ,经综合治疗和营养支持后 ,营养正常组较营养失衡组的病程短、营养指标恢复明显。结论 :老年HFRS患者多数营养不良 ,除积极有效的综合治疗 ,营养支持治疗是改善体质、缩短病程的重要措施     

Modulation of cellular and humoral immune responses to anHIV-1 DNA vaccine by interleukin-12 and interleukin-18 DNA immunization

Thereismountingevidencethattheinductionofstrongmucosalandcell mediatedimmuneresponsesarekeyelementstoconsiderinconstructingefficaciousHIV 1vac cine .TherapeuticvaccinesthatinducehighlevelsofCTLspecifictoHIVarecurrentlybeingdevelopedworldwide .NucleicacidimmunizationisanewvaccinationtechniquewhichdeliversDNAconstructsencodingaspecificimmuno genintothehost[1] .InadditiontotheabilityoftheDNAvaccinetoinducebothantigen specificcellularandhumor alimmuneresponses ,thistechniquehasthepotentialto…     

IL-2/Fc融合基因真核表达载体的构建和表达

目的：构建含人IL-2 cDNA基因和免疫球蛋白Fc片段融合基因的真核表达载体pcDNA 3．1 IL-2／Fc，并在真核细胞中表达，以期用于乙型肝炎病毒(HBV)DNA疫苗的研究。方法：应用重叠延伸剪切技术(SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段IL-2／Fc，回收后克隆到中间pGEM—T：Easy TA克隆载体，得到合适的酶切位点后，用双粘端连接法转克隆入真核表达载体pcDNA 3．1中，得到真核重组载体pcDNA 3．1 IL-2／Fc。然后用脂质体法转染SP2／0细胞。结果：对重组载体进行限制性酶切鉴定及测序分析，证明连接正确；经ELISA检测证实，该重组载体能够在真核细胞中外分泌表达插入的外源性基因编码的融合蛋白。结论：成功构建了真核表达载体pcDNA 3．1 IL-2／Fc，并在SP2／0细胞中有效表达。     

老年人流行性出血热的临床分析

目的探讨老年流行性出血热患者的临床特点。方法对106例老年流行性出血热患者的临床资料进行回顾性分析,并与同期收治的非老年组流行性出血热患者进行比较。结果老年流行性出血热患者重型及危重型占84.9%,病程明显延长,并发症高于非老年组(P<0.05);少尿期老年组血尿素氮、肌酐浓度均明显高于非老年组,血小板明显低于非老年组(P<0.01)。病死率(12.3%)高于非老年组(2.0%)。丙氨酸氨基转移酶浓度比较两组无显著差异(P>0.05)。结论老年流行性出血热患者病情重,早期表现不典型,病程长,并发症多,病死率高;对其应力争早诊断、早治疗,注意防治各种并发症。     

慢性肝病中抗肝抗原自身抗体的检测

目的　探讨中国人不同病因所致慢性肝病患者中抗肝抗原自身抗体的存在状况及自身免疫性肝病的自身抗体特征。方法　 166例肝功能异常患者分为 6组 :自身免疫性肝炎 (AIH ) 12例、原发性胆汁性肝硬化 (PBC) 2 0例、原发性硬化性胆管炎 (PSC)13例、HBV组 66例、HCV组 2 2例、肝豆状核变性 (HDL) 3 9例。用间接免疫荧光法检测抗核抗体 (ANA)、平滑肌抗体 (SMA)、抗肝肾微粒抗体I型抗体 (anti LKM1)、抗线粒体抗体 (AMA)和抗中性粒细胞胞浆抗体 (ANCA) ,免疫印迹法检测抗肝细胞胞溶质抗原 1型抗体 (anti_LC1)、抗可溶性肝抗原 /肝胰抗原抗体 (anti_SLA/LP)、抗肝肾微粒抗体 1型 (anti_LKM1)、AMA_M2亚型等多种肝抗原自身抗体。结果　 166例中ANA、AMA、M_2、pANCA阳性率在 7组中有显著差异 (P <0 .0 1)。PBC中AMA、M 2阳性检出率均为 10 0 % ,PSC中pANCA阳性检出率为 5 3 8% ,Fisher精确检验在a =0 .0 0 2水准与其他各组比较有显著差异。AIH与PBC的ANA阳性率分别为10 0 %和 60 % ,Fisher精确检验在a =0 .0 0 2水准二者无显著差异。与其他各组比较有显著差异。在AIH组SMA阳性率为 2 5 % ,LKM 1、LC 1、SLA/LP阳性率均为 8.3 % ,统计学处理与其他组无显著差异 (P >0 0 5 ) ,可能与病例少有关。PBC中分别有 1     

TLR4siRNA预处理防治小鼠急性肝损伤

目的急性肝功能衰竭是重要的临床综合征。近年来,对急性肝功能衰竭的治疗进展甚微,如何从根本上解决这一难题依然任重道远。方法本研究基于pSilencer4．1-CMVneosiRNA表达载体,设计并构建了TLR4siRNA表达载体。经体外细胞转染实验,筛选了3条抑制效果较好的表达载体,进一步行体内动物实验。进行酶切及测序鉴定,体外评估其对转染RAW26d．7细胞TLR4mRNA、蛋白表达水平的抑制作用,进一步评价了TLR4siRNA对TNF—α、MIP-2水平的影响,及对LPS诱导的丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的作用;之后再采用3条抑制效率较高的TLR4siRNA进行体内试验,采用尾静脉高压水注射法转染C57BL／6小鼠,静默TLR4的表达,再采用D—GalN／LPS联合诱导小鼠急性肝损伤,观察TLR4siRNA对D—GalN／LPS诱导的肝损伤小鼠是否有保护作用,观察TNF-α、MIP-2水平的变化,观察肝细胞凋亡水平变化。结果D—GalN／LPS联合给药前48h及24hTLR4siRNA预处理可明显降低ALT及AST的升高幅度,TNF-α及MIP-2的mRNA及细胞因子水平亦被抑制,TUNEL阳性肝细胞百分率下降。TLR4siRNA预处理可明显减轻D—GalN／LPS对C57BL／6小鼠的肝损害作用,降低小鼠的死亡率。通过TLR4siRNA阻断TLR4表达可能有助于控制LPS炎性反应,防治肝损伤。结论通过本研究可望进一步阐明LPS／TLR4在急性肝衰竭发病机制中的作用,为今后从RNA角度治疗肝功能衰竭提供理论和实验依据。     

肝硬化合并自发性细菌性腹膜炎的诊断现状及研究进展

自发性细菌性腹膜炎(spontaneous baderial pentonitis,SBP)是肝硬化合并腹水患者常见而严重的并发症。随着对SBP研究的不断深入，既往制定的SBP诊断标准，现已不能满足临床要求，本文就有关肝硬化合并SBP的诊断现状和近年来研究进展作了综述。     

汉滩病毒西安分离株84 FLi的S片段全基因序列测定及分析

目的：测定我国陕西西安出血热肾病综合征(HFRS)患者流产胎儿肝分离的病毒84FLi株的全S片段基因序列，了解其分子特征，并确定其在汉坦病毒(HV)种系发生中的位置。方法：采用逆转录．聚合酶链式反应(RT-PCR)，扩增出S基因的cDNA，直接用PCR产物或克隆入pMD18-T载体中测序。结果：84FLi株的全S基因共由1688个核苷酸组成，四种核苷酸的比例分别为A31．39％、C19．25％、G23．04％和T26．30％，GC含量为42．29％，AT含量为57．71％。最大开放读码框为37～1326，共编码429个氨基酸。核苷酸序列同源性分析表明，84FLi株与汉滩病毒(HTN)型同源性高于与其他型HTV的同源性。84FLi株与中国毒株Chen4和RG9同属于一个进化分支，而与HTN型国外毒株距离较远，属于不同的进化分支。结论：84FLi株属于HTN，并与国内分离的HTN同源性较高。