马氏珍珠贝软体酶法制备降糖肽的工艺优化及肽段分析

目的:以二肽基肽酶-IV（dipeptidyl peptidase，DPP-IV）抑制率和葡萄糖消耗量为指标优化马氏珍珠贝软体的酶解工艺，并对酶法制备的降糖肽进行分析。方法:以人肝癌细胞（HepG-2）胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗量、体外二肽基肽酶-IV（dipeptidyl peptidase，DPP-IV）抑制率为评价指标，比较筛选了酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶对马氏珍珠贝软体的酶解效果，通过单因素及正交试验分析酶解温度、料液比、加酶量、酶解时间等因素对酶解物降糖活性的影响，确定最佳酶解工艺，以液相串联质谱（Nano LC-MS/MS）分析酶解物中肽类物质组成。结果:酸性蛋白酶酶解的产物葡萄糖消耗量和DPP-IV抑制率优于其他种类蛋白酶，马氏珍珠贝软体制备降糖肽的最佳酶解条件为:45 ℃、3 h、料液比1:3.5（w:w）、加酶量1000 U/g，在此条件下的葡萄糖消耗量为37.53%、DPP-IV抑制率为74.21%。最佳工艺制备的马氏珍珠贝软体酶解物中93.88%的肽段分子量低于2000 Da，22.63%的肽段为疏水性肽段，74.92%的肽段N端至少有含有一个疏水性氨基酸。结论:本研究酶法制备的马氏珍珠贝软体降糖肽可通过抑制DPP-IV的活性及减少胰岛素抵抗发挥降糖作用，对功能食品的研发具有一定的指导意义。     

分步酶解制备乳清蛋白源ACE抑制肽的工艺研究

以云南乳饼加工副产物—乳清水中获得的乳清蛋白粉为原料，采用分步酶解技术获得ACE抑制肽。通过酶的选择、单因素和响应面优化实验，选取了碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶为适宜用酶，确定了最佳酶解工艺条件为酶解温度50℃，酶解时间3 h:2 h，料液比1:35(g/mL)，此时酶解产物的ACE率达到88%。本研究可为后续相关功能性食品开发提供借鉴。     

骨质疏松治疗促骨形成与抗骨吸收药物序贯或联合应用

与抗骨吸收药物不同,甲状旁腺素是促骨形成机制的骨质疏松治疗药物。近期不少研究采用促骨形成与抗骨吸收药物的联合或序贯疗法,以期望获得更好的治疗效果。考虑到国内缺少相应的临床报道,本文回顾联合与序贯治疗的研究进展,以为临床骨质疏松治疗提供参考。     

植物体内也有“信息通道”

正看起来一动不动的植物,体内实际上也存在强有力的"信息通道",能帮助它巧妙地适应环境。日本研究人员在新一期的美国《科学》杂志上报告说,如果植物一部分根周围的养分不足,觉得"饥饿"了,就会通知其他部分的根抓紧吸收养分,从而使植物整体获得充足养分。     

鳕鱼皮胶原蛋白肽螯合镁工艺条件探究

以鳕鱼皮胶原蛋白肽作为原料,合成了鳕鱼皮胶原蛋白肽螯合镁,运用正交实验优选鳕鱼皮胶原蛋白肽螯合镁最佳实验条件。实验结果表明,鳕鱼皮胶原蛋白肽螯合镁最佳的实验条件是:镁盐与肽质量比为2∶1、反应时间为115 min、pH为7.5以及反应温度为70℃;采用水相合成法制备鳕鱼皮胶原蛋白肽螯合镁,以红外分光光谱对产物进行表征。     

酶法制备猪肺抗氧化肽

为了分离制备猪肺抗氧化肽,该文研究了中心组合设计和响应面分析优化猪肺抗氧化肽的提取工艺,以DPPH自由基清除率为响应值,分析了料液比、水解时间和酶浓度对制备抗氧化肽的影响,再通过葡聚糖凝胶Sephadex G-50、G-25和G-10对抗氧化肽进行分离纯化,得到了具有抗氧化活性的肽段,测定其清除DPPH自由基、超氧阴离子、ABTS自由基、羟基自由基以及金属螯合的能力。猪肺抗氧化肽的最佳提取工艺参数为:新鲜猪肺质量与水质量的比例(料液比)为1∶3,水解6 h,酶浓度为6 500 U/g,此时DPPH自由基清除率为66.89%;抗氧化活性最强的组分A5清除DPPH自由基、超氧阴离子、ABTS自由基和羟基自由基的IC50分别为0.073、0.989、0.192和1.261 g/L,金属螯合能力的IC50为6.505 g/L;其相对分子质量为175。     

苯酞-3-羧酸合成工艺的改进

该文以邻苯二甲酸酐为原料,经硼氢化钠还原,在六甲基二硅基氨基钾作用下与氯甲酸乙酯缩合,最后水解,得到目标化合物苯酞-3-羧酸。考察了还原反应还原剂用量、反应时间、反应温度,缩合反应的投料比、反应时间、反应温度对反应收率的影响。优化后3步反应总收率可达64.2%,终产品纯度为96.8%,且反应条件温和避免了氰化钠等剧毒性物质的使用,产品经ESI-MS和1HNMR确证结构。     

艾塞那肽的合成研究

艾塞那肽是胰高血糖素样肽-1（GLP-1）的类似物,由39个氨基酸组成,具有双激素靶向调控血糖的作用。本文对艾塞那肽的合成新方法进行了研究,将原肽拆分成六个全保护片段,分别经过独立的固相或液相方法合成,然后对片段进行组装,经切割、纯化,得到艾塞那肽产品0.98g,纯度﹥98%,总收率33.8%。切割时保留Fmoc-保护基可以使目标峰与杂峰有效分离。该方法结合了固相和液相合成的特点,与传统方法相比,是一种周期较短、纯化方便和收率较高的合成艾赛那肽的方法。     

苏云金芽孢杆菌伴胞晶体产生菌BZ-1的分离筛选及鉴定

目的从被污染的蝴蝶兰初代培养基中分离筛选苏云金芽孢杆菌伴胞晶体产生菌,并进行鉴定。方法分离自被污染的蝴蝶兰初代培养基的苏云金芽孢杆菌经富集后,筛选伴胞晶体产生菌BZ-1,显微镜观察进行鉴定;采用PCR法分析菌株BZ-1的16S rDNA和脂肽抗生素合成相关基因,SDS-PAGE分析菌株的伴胞晶体;制备菌株发酵粗提液,提取活性物质,分别置于不同温度(50、60、80、100℃)30 min、用不同的蛋白酶(蛋白酶K、胰蛋白酶)于37℃处理30 min,以枯草芽孢杆菌作为指示菌检测菌株的抑菌活性;并检测菌株对小菜蛾的毒力。结果菌株BZ-1能产生芽孢,并在芽孢旁形成多个无规则伴胞晶体;该菌株的16S rDNA扩增产物测序结果经与GenBank中登录的16S rDNA核苷酸序列进行BLAST比对,与B.anthracis str.Ames(NR_074453)、B.cereus(NR_074540)和B.thuringiensis Bt407(NR_102506)菌株相似度达99%,表明菌株BZ-1属于芽孢杆菌属,结合扫描电镜观察结果,可初步确定该菌株为苏云金芽孢杆菌;该菌株可扩增出脂肽抗生素合成相关基因sfp、mycB、ituA、fenB;该菌株从培养2 d芽孢形成后开始分泌相对分子质量约130 000的晶体蛋白,4 d时蛋白表达量增加,6 d后蛋白表达量基本达到稳定;该菌株具有一定的热稳定性,对蛋白酶K具有一定的耐受性;该菌株于30℃培养6 d,对小菜蛾表现出较高的毒力。结论从被污染的蝴蝶兰初代培养基中分离筛选的苏云金芽孢杆菌伴胞晶体产生菌BZ-1所产的抗菌物质主要抑制革兰阳性细菌,具有较高的毒力,可作为原始菌株发酵进行田间生物防治,也可为构建杀虫基因工程菌以及培育抗虫转基因植物提供高毒力的候选基因,具有较好的应用前景。