决明子蛋白水解产物的抗氧化活性:热和胃肠稳定性,肽鉴定和计算机分析

决明子乃决明(Cassia obtusifolia L.)的干燥成熟种子,被中医界用于治疗各种疾病。本研究探讨决明子水解产物的抗氧化活性和稳定性,并鉴定其中的短肽。决明子蛋白经过碱性蛋白酶水解2～6 h,以超滤膜技术产生3000 u肽组分。UF 2 h(2 h水解产物分离出来的3000 u组分)表现出最强的ABTS·~+清除能力(EC50=229μg/mL)和铁螯合能力(EC50=89μg/mL)。经过热处理和模拟胃肠消化后,UF 2 h的ABTS·~+清除能力都得以保留。UF 2 h仅在模拟胃肠消化胃后保留铁螯合活性。试验通过使用固相萃取,凝胶色谱和高效液相色谱对UF 2 h进行分离纯化。通过质谱分析,鉴定了四个肽:PMPVR(599.29 u),FETLPF(752.34 u),KMRDNL(775.37 u)和LDESKRF(893.50 u)。计算机分析预测,在模拟胃肠消化前,四个肽皆无毒无过敏性。胃肠消化后,四个肽释放的片段仍无毒,仅PMPVR和KMRDNL释放的肽片段无过敏性的。UF 2 h及其活性肽可作为抗氧化剂,用于开发功能性食品和营养保健品。     

拟穴青蟹原肌球蛋白抗原表位适配体小肽的筛选与鉴定

目的筛选对拟穴青蟹过敏原原肌球蛋白(tropomyosin,TM)抗原表位具有特异性结合能力的适配体小肽,并鉴定适配体小肽对TM的免疫结合活性的抑制作用。方法采用ExPASy peptide cutter软件预测TM分子中胰蛋白酶酶切位点,结合TM线性表位设计反义小肽,经AutoDock 4.0软件模拟分子对接,筛选得到适配体小肽。采用抑制性ELISA的方法,检测筛选的适配体小肽对TM与特异性IgG抗体结合活性的抑制作用。结果 TM氨基酸序列中有25个胰蛋白酶酶切位点,设计TM的31条反义小肽,利用分子对接筛选得到12个适配体小肽。抑制性ELISA结果显示,12条适配体小肽均能明显抑制TM与IgG抗体的特异性结合,其中适配体小肽5抑制能力最强,其抑制率为36.2%。结论通过分子对接筛选得到能明显抑制TM免疫结合活性的适配体小肽,为降低TM致敏性的研究提供理论参考。     

蚕丝丝胶蛋白的抗氧化作用

蚕丝经过高温高压水脱胶处理、高温高压碱性水脱胶处理和中性蛋白酶水解后,制成了6种不同分子量范围的丝胶肽及其水解物.利用家蚕5龄蚕血液进行了丝胶肽抑制黑色素生成试验,研究结果表明这6种丝胶肽都具有抑制黑色素生成的作用.高温高压水处理获得的丝胶肽抗氧化作用最强,高温高压弱碱性水处理获得的丝胶肽抗氧化作用略低,而中性蛋白酶水解的丝胶肽对黑色素形成的抑制率最低.当丝胶质量分数达到0.5%,前二类丝胶的抑制率可分别达到55%和50%,而第三类酶解丝胶对黑色素生成的抑制率为20%～25%,仅为前二种的-半还不到.这些实验结果说明,高温或高温弱碱性处理的丝胶蛋白更适合于化妆品、护肤品、保健品等领域的应用.     

冷却肉保鲜剂筛选试验研究

在查阅国内大量文献的基础上,确定了GNa液、Nisin、有机酸等几种国内认为较好的鲜肉生物与化学保鲜剂,并在此基础上设计了GNa-Nisin组、Nisin-Acid组两种新的配方。经试验,GNa液在稳定冷却肉感官指标方面具有较好的效果。但对于抑制脂肪的酸败、控制细菌总数、大肠菌群的增加效果较差。Nisin对于抑制G+细菌的生长有一定的效果,但易使产品出现轻微的异味。本试验中;有机酸有明显抑制大肠菌群的效果,但易使产品出现肉色恶化和明显的异味,也能加深或提高脂肪的酸价和H2S含量;试验还得出多种保鲜液配合使用时产生明显的增效作用,具有较好的抑菌保鲜效果。     

啤酒废酵母酶法制备生物活性肽的工艺研究

以啤酒废酵母为原料,经菠萝蛋白酶酶解、分离、纯化、干燥等工序制得啤酒废酵母活性肽.试验通过单因素及响应面试验分析确定了菠萝蛋白酶对废酵母的最佳酶解条件:酶解温度40.61℃,pH6.58,酶用量2.62%(w/w).酶解后多肽得率可达到50.97%(w/w).     

具有抗氧化活性的骨蛋白肽水解条件优化的研究

对骨蛋白水解物的水解条件进行优化,并对其不同水解条件下水解物的抗氧化性进行了研究.本实验采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶三种酶,分别选择2%、5%和7%的骨蛋白底物浓度,酶与底物浓度比([E]/[S])分别采用0.5:100、1:100、1.5:100、2:100对骨蛋白进行水解,用pH-Stat法测定其水解度,并且将水解物应用于卵磷脂脂质氧化体系中,测定其TBARS值,研究其抗氧化性.通过测定三种酶水解产物的水解度以及在Liposome体系中的TBARS值,表明碱性蛋白酶的酶解产物具有较高的水解度和抗氧化活性,故选择碱性蛋白酶对骨蛋白进行水解;通过测定不同底物浓度、不同的[E]/[S]的酶解产物的水解度和TBARS值,得出底物浓度为7%:[E]/[S]为1:100的酶解产物具有较高的抗氧化能力.     

酶法提取巴马火腿中的风味前体物质

利用复合酶Protamex和Flavourzyme,对巴马火腿中的水不溶物进行酶解,生成小肽;并与巴马火腿的天然滋味进行比较,试图得到与天然滋味相似小肽的酶解工艺.通过单因素及响应面实验,研究了温度、初始pH与加酶量对水解液粗肽含量及感官品质的影响.实验得到的最佳酶解条件为:温度60℃、初始pH7.45、同时加入两种酶,且两酶的添加量分别为Protamex 2.34%、Flavourzyme 4.17%.此时粗肽含量为77.12%,感官评定的平均分值为8.00.     

Alcalase蛋白梅水解花生蛋白制备杭氧化肽的研究

对Alcalase蛋白酶水解花生分离蛋白的条件进行了优化选择,结果表明,花生蛋白的最佳预处理条件是90℃加热20min.水解条件为:温度55℃,pH7.5,底物浓度8%,酶添加量3%(E/S),酶解时间6h,此时其酶解产物抑制亚油酸氧化的能力最强,花生肽中具有抗氧化功能的成分主要集中在分子量5kDa以下.     

蛋白酶水解低温豆粕制备大豆寡肽的研究

以低温豆粕为原料,利用复合酶法水解蛋白质制备大豆寡肽.通过测定不同蛋白酶对蛋白质水解后的蛋白质转化率和水解度,并综合生产成本、实验条件等因素,确定最优蛋白酶种类以及最优水解条件.得到蛋白酶Ⅰ的最优水解条件为:[S]=7%,E/S=4%(w/w),在pH=8.5,T=65℃条件下,水解3h;蛋白酶Ⅱ的最优水解条件为:pH=6.0,T=50℃,加入0.2%(m/v)EDTA,蛋白酶Ⅱ用量为8000u/g蛋白,水解2h.而后对水解物的水解度(DH)进行测定,并计算大豆肽平均肽链长度(PCL),得出PCL在2～7间,水解物为大豆蛋白寡肽混合物.     

复合酶法制备植物小分子肽的研究

以大豆蛋白、花生蛋白为原料进行合理配比后,采用动态超高压均质预处理,再采用复配酶(木瓜蛋白酶与胰蛋白酶)和复合风味蛋白酶进行两步复合酶解.结果显示,超高压均质后,酶解度可提高2%-3%.最优条件为:超高压均质压力为60MPa;木瓜蛋白酶和胰蛋白酶按1:1复配,复配酶水解温度60℃,pH6.5,酶用量250U/g,底物浓度5%;复合风味酶水解温度55℃,pH6.0,酶用量200U/g.高效液相凝胶色谱法测定纯化后的小分子肽,分析表明分子量主要集中在3000Da以下.