化瘀祛痰方对ApoE-/-小鼠主动脉MAPK信号通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨载脂蛋白敲除(Apoe-/-)小鼠主动脉丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关mRNA的表达变化及化瘀祛痰方药对其的干预作用,探讨化瘀祛痰方药抗AS作用及可能的机制。方法:50只Apo E-/-小鼠随机分为模型组,丹参酮ⅡA组(30 mg·kg~(-1)·d~(-1)),化瘀祛痰高剂量组(20 g·kg~(-1)·d~(-1)),化瘀祛痰中剂量组(10 g·kg~(-1)·d~(-1)),化瘀祛痰低剂量组(5 g·kg~(-1)·d~(-1)),10只C57BL/6/J小鼠作为正常组。全自动生化仪检测血清甘油三酯(triglyceride,TG),胆固醇(cholesterol,TC),高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的含量;苏木素-伊红(HE)检测各组小鼠主动脉斑块情况;油红O检测各组小鼠肝脏脂质沉积情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)测定各组小鼠血清中血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion protein 1,VCAM-1),细胞间黏附分子-1(ICAM-1),白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠主动脉c-Jun氨基末端激酶(c-Jun n-terminal kinase,JNK),磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK),p38 MAPK,p-p38 MAPK,细胞外调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK),磷酸化细胞外调节激酶(extracellular regulated protein kinases,p-ERK)蛋白的表达变化。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清TC,TG,LDL-C水平明显升高,HDL-C水平明显降低;主动脉管腔见较大粥样斑块,肝细胞中见大量脂质沉积;血清内相关炎性因子TNF-α,IL-6,VCAM-1,ICAM-1含量增加;血管内相关MAPK信号通路p-p38,p-JNK蛋白表达明显增加(P0.05)。与模型组比较,丹参酮ⅡA组与化瘀祛痰各组小鼠TC,TG,LDL-C明显下降,HDL-C明显升高,主动脉管腔中粥样斑块面积和肝脏脂质沉积量明显减少,血清内相关炎性因子TNF-α,IL-6,VCAM-1,ICAM-1含量降低(P0.05);血管内相关MAPK信号通路p-p38,p-JNK蛋白表达明显降低(P0.05),p-ERK表达趋势不明显。结论:化瘀祛痰方药可抑制Apo E-/-小鼠主动脉斑块形成,其机制可能与调控血管MAPK信号通路基因表达有关。     

基于iTRAQ技术研究丹参酮ⅡA对高脂血症大鼠肝脏蛋白质的影响

目的应用相对和绝对定量同位素标记技术(iTRAQ)研究丹参酮ⅡA对高脂血症大鼠肝脏蛋白质组表达的影响,探讨丹参酮ⅡA对肝脏保护的作用。方法 24只SD大鼠随机分为空白对照组、高脂血症组和丹参酮组,每组8只。空白对照组每日给予普通大鼠饲料喂饲。高脂血症组和丹参酮组给予高脂饲料喂饲,4周后丹参酮组予丹参酮ⅡA磺酸钠10 mg/(kg·d)腹腔注射,空白对照组、高脂血症组给予等体积的磷酸盐缓冲生理盐水腹腔注射。用药8周后检测大鼠血脂、肝功能情况以及肝脏组织形态学变化。分离提取肝脏总蛋白,以iTRAQ试剂标记后进行质谱检测并以软件分析差异表达的蛋白质,用Western blot方法验证部分差异蛋白的表达趋势。结果与空白对照组比较,高脂血症组血清TC、TG、LDL-C、ALT、AST水平升高(P0.01),HDL-C水平降低(P0.01);与高脂血症组比较,丹参酮组血清中ALT、AST水平降低(P0.05)。iTRAQ技术分析发现:丹参酮组肝脏中CES1、Apoa1、Acots2、3-KAT及细胞色素P450家族Cyp3a2、Cyp3a18、Cyp4a3、Cyp2b2、Cyp2c23这9个差异蛋白表达量上调,Tkt及eNT表达下调。Western blot验证差异蛋白CES1、Apoa1、Acots2变化趋势与蛋白质组结果相一致。结论丹参酮ⅡA可能通过促进胆固醇逆向转运、脂肪酸氧化,改善肝脏代谢功能,减少肝脏脂质沉积,达到其肝脏保护作用。     

化瘀祛痰方药调控PI3K/AKT/mTOR信号通路改善高脂血症大鼠肝脏脂质代谢的机制

目的:以PI3K/AKT/mTOR信号通路为切入点探讨化瘀祛痰方改善高脂血症大鼠肝脏脂质损伤的分子机制.方法:40只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组、高脂血症组、化疲祛痰方组及血脂康组(n=10).正常组予正常饲料,其他组予高脂饲料,60 d后化瘀祛痰方组、血脂康组分别给予相应药物灌胃,其他组给予等体积磷酸盐缓冲0....     

情志致病

心理因素(情志因素)已经成为许多疾病主要病因。喜、怒、忧、思、悲、恐、惊等情志变化,过于强烈,或过于持久,超过人体调节范围,就会引起气机失调、阴阳失衡、脏腑功能紊乱,导致疾病。情志变化可导致病情转归"向愈"或恶化,即"气血冲和,百病不生。一有怫郁,诸病生焉。"治疗有重镇安神、养心安神、祛痰、祛瘀、清热泻火、补益、心理疗法、针灸及气功及多种方法联合。情志致病的研究对临床诊治有极其重大意义。     

左、右归丸对大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化中TGF-β1 mRNA的影响

目的:研究左、右归丸含药血清对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的作用.方法:将28只大鼠随机分为4组,分别以左归丸(ZGW)、右归丸(YGW)、阳性对照药戊酸雌二醇片(estradiol valerate tablets,EVT)和蒸馏水给大鼠灌胃,各组灌胃剂量分别为18.9,20.52 g·kg-1,0.36 mg· kg-,1.0 mL·kg-1,日2次,于第4天给药2h后,腹主动脉取血,离心,56℃水浴灭活30 min后,大鼠含药血清制备完成.再配制10％各组含药血清的α-MEM分别加入诱导剂(YDJ)(10-7mol· L-1地塞米松、50μmol· L-维生素C、10 mmol·L-1β-甘油磷酸钠)与单纯诱导剂组共5组对BMSCs(1×105/L)进行干预9d,用Westernblot法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Ⅰ型胶原(type Ⅰ collagen,COL Ⅰ)蛋白表达,用RT-PCR法检测转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,TGF-1)mRNA表达.结果:Control组比较:ZGW+ YDJ组、YGW+ YDJ组、EVT+ YDJ组均可促进BMSCs的ALP,COLⅠ蛋白的表达,上调BMSCs TGF-β1 mRNA表达(P＜0.05);与YDJ组比较:ZGW+ YDJ组、YGW+ YDJ组可促进BMSCs的ALP,COL Ⅰ蛋白的表达,上调BMSCs TGF-β1mRNA表达(P＜0.05);且ZGW+ YDJ组优于YGW+ YDJ组(P＜0.05).结论:左、右归丸含药血清能协同诱导剂促进BMSCs成骨分化,且左归丸组更为有效,表明中医“滋肾阴”对BMSCs的成骨诱导更为有效.     

香砂六君子汤对脾虚高脂血症大鼠ROS/KEAP1/PGAM5通路及氧死亡的影响及机制研究

目的 探究香砂六君子汤对脾虚高脂血症大鼠ROS/KEAP1/PGAM5通路及氧死亡的影响，进而防治血脂异常的可能作用机制。方法 将32只SD大鼠随机分为正常组、高脂组、脾虚高脂组、香砂六君子汤组，每组8只。除正常组外，其他各组给予高脂饲料喂饲14周，建立高脂血症模型，其中脾虚高脂组以及香砂六君子汤组采用饮食不节加力竭游泳方法建立脾虚模型。第10周，香砂六君子汤组给予香砂六君子汤11.34 g/(kg·d)灌胃，其余各组给予相应体积生理盐水灌胃。4周后，HE染色观察肝脏病理组织形态，检测各组大鼠血清TC、TG、LDL-C及HDL-C水平，Elisa检测各组大鼠肝脏ROS、NQO1、HO1水平，Rt-PCR以及Western blot法检测肝脏组织AIFM1、Nrf2、KEAP1、PGAM5mRNA及蛋白水平。结果 与正常组比较，高脂组大鼠血清TC、TG和LDL-C、肝脏ROS水平、AIFM1、KEAP1、PGAM5蛋白及mRNA的表达显著升高(P<0.01或P<0.05),血清HDL-C、肝脏NQO1、HO1、Nrf2蛋白和mRNA水平显著降低(P<0.01或P<...     

左归丸含药血清通过JNK信号通路诱导MC3T3成骨细胞分化的研究

目的 探讨JNK信号通路对左归丸(熟地、菟丝子、川牛膝、龟甲胶、鹿甲胶、山药、山茱萸、枸杞子)含药血清干预MC3T3成骨细胞分化的影响.方法 选用JNK特异抑制剂SP600125,制备大鼠含药血清,实验分为空白对照组、SP600125组、左归丸组、左归丸加SP600125组、倍美力组、倍美力加SP600125组.孵育48 h后,采用PNPP法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,采用Western blot法分析ALP蛋白表达水平;孵育7 d,采用改良钙钴染色法检测ALP活性;孵育14 d,采用茜素红染色法测定矿化沉积情况.结果 与空白对照组比较,左归丸组显著促进MC3T3成骨细胞分化,明显上调ALP蛋白表达水平(P＜0.01);与左归丸组比较,左归丸加 SP600125组孵育48 h对ALP活性及蛋白影响不显著,但显著对抗左归丸含药血清对孵育7 d的ALP活性和孵育14d的矿化结节的促进作用(P＜0.01).结论 左归丸含药血清可能部分通过JNK信号通路干预MC3T3成骨细胞分化,在分化末期尤其依赖JNK通路.     

绞股蓝皂苷调控铁死亡途径对ApoE-/-小鼠肝脏脂质沉积的影响及机制研究＊

目的 探究绞股蓝皂苷改善ApoE－/－小鼠肝脏脂质沉积的可能作用机制。方法 24只健康ApoE－/－小鼠采用随机数字表法分为绞股蓝皂苷组、辛伐他汀组和模型组，每组8只；将8只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。正常对照组给予普通饲料喂养；模型组、绞股蓝皂苷组、辛伐他汀组给予高脂饲料喂养，喂养8周。8周后，绞股蓝皂苷组给予绞股蓝皂苷灌胃，辛伐他汀组给予辛伐他汀灌胃，正常对照组和模型组使用0.2 mL/10 g生理盐水灌胃，灌胃4周。灌胃期间正常对照组继续给予正常饲料喂养，模型组、绞股蓝皂苷组、辛伐他汀组继续给予高脂饲料喂养。12周后，全自动生化分析仪检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、肝脏TC、TG水平；HE染色和油红O染色观察小鼠肝脏病理形态变化与脂质沉积 情况；ELISA法检测肝脏组织过氧化脂质（LPO）和还原型谷胱甘肽（GSH）水平；Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统检测GPX4、xCT和p53蛋白表达水平；RT-qPCR检测GPX4、xCT和p53 mRNA表达水平。结果 与正常对照组相比，模型组小鼠血清血脂TC、LDL-C、TG水平升高、HDL-C水平降低（P<0.01）；血清肝功能AST、ALT水平升高（P<0.01）；肝细胞体积变大，细胞内可见大量大小不等的脂肪空泡，脂质沉积明显， 肝窦狭窄或消失；肝脏组织TC、TG和LPO水平显著升高，GSH水平显著下降（P<0.01）；p53蛋白和mRNA表达增高，GPX4、xCT蛋白和mRNA表达降低（P<0.01）。与模型组比较，绞股蓝皂苷组和辛伐他汀组小鼠血清血脂TG、LDL-C、TC水平降低（P<0.01），HDL-C水平没有显著变化（P>0.05）；血清肝功能AST、ALT水平降低（P<0.01）；肝细胞体积大小有所恢复，细胞内脂肪空泡显著减少，脂质沉积情况减轻，肝窦狭窄有所缓解；肝脏组织TC、TG和LPO水平显著降低，GSH水平显著升高（P<0.01）；p53蛋白和mRNA的表达降低，GPX4、xCT蛋白和mRNA表达升高（P<0.05或P<0.01）。结论 绞股蓝皂苷能明显改善肝脏脂质沉积和降低肝脏脂质过氧化反应，其机制可能与抑制肝细胞铁死亡有关。     

动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质代谢相关的PPAR-γ/LXR-α/ABCG1通路及炎症因子的变化和化瘀祛痰方在其中的作用

目的:观察动脉粥样硬化(AS)小鼠肝脏脂质代谢相关的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)/肝X受体α(LXR-α)/ATP结合盒转运体G1(ABCG1)通路和炎症因子的变化,以及化瘀祛痰方在其中的作用,探讨化瘀祛痰方对肝脏脂质代谢及炎症反应的影响及作用机制。方法:将24只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰方组和辛伐他汀组,8只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。除正常对照组给予基础饲料外,其余各组给予高脂饲料。造模12周后,灌胃给药,化瘀祛痰方组与辛伐他汀组给予相应药物,正常对照组与模型组给予等体积的生理盐水。8周后用全自动生物化学分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量;HE和油红O染色观察肝脏组织病理及脂质的变化情况;ELISA法检测肝脏游离脂肪酸(FFA)、TG、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Toll样受体4(TLR4)和白细胞介素1β(IL-1β)的含量;Western blot法检测PPAR-γ、LXR-α和ABCG1的蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著上升(P<0.01),HDL-C含量显著降低(P<0.01);肝脏脂肪变性,细胞变大,脂质沉积明显,FFA和TG含量显著上升(P<0.01),炎症因子TLR4、TNF-α和IL-1β的含量显著增加(P<0.01),脂质代谢通路相关因子PPAR-γ、LXR-α和ABCG1的蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,服用辛伐他汀和化瘀祛痰方可使小鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著下降(P<0.05或P<0.01),HDL-C含量显著上升(P<0.01);肝脏脂肪变性减轻,脂质沉积不同程度降低,FFA和TG含量显著下降(P<0.05或P<0.01),TLR4、TNF-α和IL-1β含量显著降低(P<0.01),PPAR-γ、LXR-α和ABCG1的蛋白表达显著增高(P<0.05或P<0.01)。结论:化瘀祛痰方可能通过调控肝脏PPAR-γ/LXR-α/ABCG1通路及减弱肝脏TRL4介导的炎症反应来达到抗AS的作用。     

JAK2/STAT3信号通路在人参皂苷Re预处理预防异丙肾上腺素致急性心肌缺血损伤中的作用

目的观察人参皂苷Re预处理对异丙肾上腺素致急性心肌缺血大鼠心肌JAK2/STAT3通路的影响。方法应用异丙肾上腺素建立SD大鼠急性心肌缺血模型,将75只大鼠随机分为空白对照组(Control)、模型组(Model)、葛根素对照组(PUE)、Re高剂量组(Re-H,20 mg·kg^-1)、Re低剂量组(Re-L,10 mg·kg^-1)。Moor激光血流成像系统观测各组大鼠心脏表面血流值;ELISA法测定各组大鼠心肌中CK、LDH、SOD、MDA、GSH的含量;免疫组化法检测Bax、Bcl-2蛋白表达;Western blot方法检测各组大鼠心肌JAK、p-JAK、STAT3、p-STAT3蛋白的表达变化。结果与对照组比较,模型组大鼠心脏表面平均血流量明显下降,心肌CK、LDH、MDA含量升高,GSH、SOD含量下降,Bcl-2/Bax比值下降(P<0.05),JAK2/STAT3通路蛋白的表达有所增加;与模型组比较,Re-H组心肌表面平均血流有明显提升(P<0.05);CK、LDH、MDA含量降低,GSH-Px含量升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值上升(P<0.05),JAK2/STAT3通路蛋白的表达明显增强(P<0.05)。结论人参皂苷Re预处理对急性心肌缺血大鼠心肌有较好的保护作用,该作用可能与JAK2/STAT3通路的激活有关。