沙门氏菌DNA提取及PCR反应条件的优化

分别采用煮沸法和CTAB/NaCl法提取沙门氏菌及对照菌株的基因组DNA,紫外测定和电泳结果表明CTAB/NaCl法提取到的DNA的浓度和纯度较煮沸法理想。合成分别扩增沙门氏菌属特异基因hut基因(495bp)、hilA基因(490bp)、invA基因(284bp)和hns基因(152bp)的引物,对PCR反应条件进行了优化。结果表明可同时用于这四种基因检测的PCR反应条件为:94℃预变性5min;94℃变性40s,60℃退火40s,72℃延伸50s,40个循环;72℃延伸5min。     

沙门氏菌多重PCR检测方法的建立

采用CTAB/NaCl法提取沙门氏菌及对照菌株的基因组DNA。对引物浓度、TaqDNA聚合酶用量进行优化,建立了沙门氏菌属特异基因-hut基因(495bp)、hilA基因(490bp)、invA基因(284bp)和hns基因(152bp)间的多重PCR检测方法,并进行了灵敏度测试。结果表明,建立的多重PCR检测结果与预期一致,二重PCR的检测灵敏度与单一PCR的一致,三重PCR检测灵敏度有所下降。     

加工鳗鱼制品中单增李斯特氏菌的基因探针鉴定及分析

从10份鳗鱼制品中分离到4株单增李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）的可疑菌株，应用Accuprobe基因探针方法进行快速鉴定，鉴定结果与API Listeria方法的鉴定结果进行比较。结果表明，基因探针鉴定方法更简便、快速、准确，缩短了检验鉴定周期。检测鉴定结果也表明，加工过的鳗鱼产品仍然存在被单增李斯特氏菌污染的可能，应引起生产及监管部门的高度重视，防止食物中毒的爆发流行。     

转基因玉米GA21品系LAMP检测引物的筛选及方法的建立

根据转基因玉米GA21品系的特异序列设计了3套环介导等温扩增(LAMP)引物。通过反应温度优化、特异性测定,筛选到1套特异性好的LAMP引物,包括内引物、外引物和环引物各1对。在LAMP反应体系中加入SYBR Green I荧光染料,在实时荧光定量PCR仪上进行实时监测,对筛选到的LAMP引物进行反应条件、反应体系的优化,建立了转基因玉米GA21品系LAMP检测方法。对该方法的特异性、灵敏度、稳定性进行评价,结果表明建立的LAMP检测方法能特异、灵敏、稳定地检测转基因玉米GA21品系,检测限达到0.05%。将建立的LAMP检测方法应用于玉米及其制品中GA21品系的检测,检测结果与实时荧光PCR法的结果完全一致。     

应用PCR技术鉴定豆奶粉、奶粉及果汁饮料中的有效成分

应用PCR技术对日常生活中几种常见的与人类健康和安全有关的豆奶粉、奶粉及果汁饮料等加工食品中的有效成分,包括大豆凝聚素(Lectin)基因、牛线粒体基因、植物叶绿体rbcL基因以及真核生物中普遍存在的核糖体DNA(18SrDNA)片段等进行检测,建立了这些样品的DNA提取、纯化以及单PCR和二重PCR检测技术体系。结果表明:应用单PCR技术和二重PCR技术检测样品的结果一致,且稳定、重复性好。     

转基因食品(GMF)标识的现状及对策

本文主要阐述了各国转基因食品标识的最新发展情况,列举了对转基因食品标识的3种态度,分析了转基因食品标识于我国的利与弊,提出了对我国转基因食品标识的建议。     

河豚毒素DNA适配子的筛选与结构分析

人工合成113个碱基的随机ssDNA文库,以河豚毒素为靶物质,采用SELEX技术进行12轮筛选,测定各轮富集文库与河豚毒素的亲和力,其中第10轮富集文库与河豚毒素的亲和力最高。将第10轮富集文库进行克隆、测序,用DNAMAN软件分析克隆子的一级和二级结构,并测定克隆子与河豚毒素的亲和力。结果表明:与河豚毒素结合力高的DNA适配子经过10轮筛选后得到富集,成功筛选到最高亲和力的DNA适配子G10。     

河豚毒素DNA适配子的制备及应用

人工合成78 个碱基的随机ssDNA文库,采用指数富集配基的系统进化技术与诱变聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）结合的方法,通过筛选富集、克隆、测序,获得了与河豚毒素（tetrodotoxin,TTX）特异结合的单克隆DNA适配子A3。DNA适配子A3的二级结构主要为茎环结构,与TTX的亲和力为1.254。对适配子和TTX结合的磷酸盐缓冲液pH值、荧光染料结合时间进行优化,结果表明,最适pH值为7.5,最佳结合时间为10 min。建立的快速筛选检测TTX的DNA适配子-荧光染料法对TTX的检出限为10－6 mo1/L。     

SARS病毒特异性靶基因的多重PCR检测技术研究

本研究探讨了多重PCR技术在SARS病毒检测中的应用。根据香港中文大学在GenBank上公开发表的SARS病毒基因组cDNA序列,人工合成克隆特异性靶基因DNA片段,以此片段作为阳性样品,根据世界卫生组织推荐的进行单PCR与多重PCR检测分析。以单PCR法获得了121bp、182bp及302bp的靶基因片段3条;以二重PCR法获得了121bp+182bp、121bp+302bp与182b+302bp的靶基因片段组合;以二重PCR法获得了121bp+182bp+302bp的靶基因片段组合。结果表明:多重PCR技术可成功应用于SARS病毒的检测。     

河豚鱼16S rRNA基因部分DNA序列分析及应用

应用16S rRNA基因聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增通用引物,对3 属13 种福建省搜集的河豚鱼样品与9 个未知物种的河豚鱼样品的16S rRNA基因序列中的部分片段进行PCR扩增与脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid,DNA）碱基序列测定,各物种序列长度在611～614 bp之间。应用DNAMAN V6软件进行样品间DNA序列同源性比对分析,建立样品间系统关系同源树。供试13 个样品被划分为4 个类群组,群间的同源率为87%,群内同源率为94%～100%。根据序列同源性分析结果,9 个未知种名的样品被归类到3 个类群组中,推测9 个未知种名的样品为东方鲀属或腹刺鲀属。探讨了16S rRNA基因部分DNA序列测试及同源性分析技术在河豚鱼种属鉴别中应用的可能性。