用SiRNA沉默SSAT基因表达降低人A549肺癌细胞对抗癌多胺类似物CPENSpm的敏感性

目的 探讨精脒/精胺乙酰转移酶(Spermidine/Spermine N1-Acetyltransferase,SSAT)基因表达沉默对多胺类似物CPENSpm抗瘤活性的影响。方法 用SiRNA技术获得SSAT基因表达沉默的人A549肺癌细胞株,QT-RT-PCR 法用于分析SSAT基因的表达水平,MTT法检测细胞的存活率,DNA片段化分析和流式细胞/亚凋亡峰分析检测细胞凋亡状况。结果 成功获得SSAT基因表达沉默的人A549肺癌细胞株。用10 μmol·L^-1 CPENSpm处理对照细胞24 h可使SSAT mRNA 水平升高23倍,但在SSAT表达沉默的细胞中CPENSpm无此影响。细胞增殖实验发现,SSAT表达沉默的细胞对CPENSpm (0~20 μmol·L^-1 )的药物敏感性显著性低于对照细胞。细胞凋亡分析发现,10 μmol·L^-1 CPENSpm处理细胞48 h导致对照细胞出现凋亡细胞典型的DNA片段化现象和亚凋亡峰,但在SSAT表达沉默的细胞株中,CPENSpm诱导细胞凋亡的能力明显减弱。结论 CPENSpm诱导肿瘤细胞内SSAT高表达可能是其抗癌药理活性的分子基础之一。     

海洛因依赖者外周血T细胞亚群及NK细胞检测分析

目的:检测海洛因依赖者戒毒前、后不同时间段外周血中的T淋巴细胞亚群及NK细胞数目的改变状况并探讨其原因,为制定有效防治策略提供依据.方法:采集30例海洛因依赖者在戒毒前、戒毒7 d和14 d各不同时间段的静脉血抗凝,以本地区13例正常人外周血做参照,用流式细胞术(FCM)对其T淋巴细胞亚群和NK细胞进行测定.结果:海洛因依赖者淋巴细胞(Lymphocyte)百分比较正常对照组降低(P＜0.01);未戒断组CD4百分比较对照组下降(P＜0.05);戒断7 d组CD25与正常组相比明显升高(P＜0.05).按年龄及吸毒时间进行分组得出:不同年龄段或为同吸毒时间之间的CD4、CD25及NK有统计学意义(P＜0.05).结论:海洛因依赖者细胞免疫功能受损,短期戒断产生的应激可能是导致依赖者自身免疫疾病发生的诱因之一.     

蜈蚣提取物诱导SiHa细胞凋亡及其作用机制

目的研究蜈蚣提取物对宫颈癌SiHa细胞生长的抑制及其作用机制。方法观察不同浓度的不同蜈蚣提取物对宫颈癌SiHa细胞的生长抑制情况:以不同浓度的蜈蚣提取物和顺铂作用于SiHa细胞48h,MTT法测定药物对细胞生长的影响,流式细胞术观察DNA含量和凋亡的改变,DNA片断化分析凋亡特有DNA梯形格局,Western blot测定bax、Caspase3蛋白水平的表达。结果SiHa细胞用8、16、32mg/mL的乙醚、乙醇蜈蚣提取物处理48h后,细胞生长显著受抑制;DNA周期改变明显,亚G1峰与对照组有显著性差异;DNA-Ladder显著;Western blot提示相关凋亡蛋白bax、Caspase3表达并显示活性,凋亡率增高明显。结论中药蜈蚣乙醚、乙醇提取物在体外对宫颈癌SiHa细胞的生长有明显地抑制作用,机制与改变细胞DNA周期,促进凋亡有关。     

rhTNF-α在体外对人正常精子线粒体和质膜的影响

目的:观察rhTNF-a在体外对人正常精子线粒体功能和质膜完整性的影响。方法:40例健康自愿者正常精液,Peroll梯度离心将精子密度调整为10×106/mL,分别与终浓度0 pg/mL(对照组)、30 pg/mL、60 pg/mL、90 pg/mL、270 pg/mL的rhTNF-a孵育。在0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h时间段取样,用终浓度为10 mg/mL 的Rh123和PI双染色精子,流式细胞仪检测精子线粒体膜电位及质膜完整性的变化。结果:与对照组相比较,60 pg/mL、90 pg/mL、270 pg/mL各组线粒体功能良好的精子明显减少,这种变化趋势与TNF-a浓度和孵育时间呈正相关(P <0.01)。30 pg/mL组的精子线粒体功能与对照组相比无统计学差异(P >0.05);30 pg/mL、60 pg/mL、90 pg/mL、270 pg/mL各组的PI和Rh123双染色均阳性的精子数较对照组多,且与rhTNF-a的浓度和孵育时间呈正相关(P <0.01)。结论: rhTNF-a对人精子线粒体功能有一定的影响,提示有可能干扰精子的能量代谢,降低精子受精能力,并有可能通过线粒体凋亡途径,促进精子凋亡;同时影响精子质膜的完整性。     

地方综合性大学医学教育管理体制改革探讨

从现代高等医学教育体制改革之高校合并为出发点,阐述综合性大学医学教育管理体制改革在推动医学教育全面发展进程中的必要性和重要性,以及改革面临的长期性和复杂性,同时介绍我校医学教育管理体制改革的目标、实践举措和成效。     

用SiRNA沉默SSAT基因表达降低人A549肺癌细胞对抗癌多胺类似物CPENSpm的敏感性

目的探讨精脒/精胺乙酰转移酶（Spermidine/Spermine N^1-Acetyltransferase,SSAT）基因表达沉默对多胺类似物CPENSpm抗瘤活性的影响。方法用SiRNA技术获得SSAT基因表达沉默的人A549肺癌细胞株,QT-RT-PCR法用于分析SSAT基因的表达水平,MTT法检测细胞的存活率,DNA片段化分析和流式细胞/亚凋亡峰分析检测细胞凋亡状况。结果成功获得SSAT基因表达沉默的人A549肺癌细胞株。用10μmol·L^-1CPENSpm处理对照细胞24h可使SSAT mRNA水平升高23倍,但在SSAT表达沉默的细胞中CPENSpm无此影响。细胞增殖实验发现,SSAT表达沉默的细胞对CPENSpm（0～20μmol·L^-1）的药物敏感性显著性低于对照细胞。细胞凋亡分析发现,10μmol·L^-1CPENSpm处理细胞48h导致对照细胞出现凋亡细胞典型的DNA片段化现象和亚凋亡峰,但在SSAT表达沉默的细胞株中,CPENSpm诱导细胞凋亡的能力明显减弱。结论CPENSpm诱导肿瘤细胞内SSAT高表达可能是其抗癌药理活性的分子基础之一。     

HPV和CT双重PCR检测方法的建立及临床应用

目的：建立一种同时检测HPV和CT的方法，并在临床常见阴道宫颈炎症、孕产妇及新生儿中运用。方法：在单一PCR技术基础上摸索，建立并完善双重PCR技术。同时运用孕产妇、慢性宫颈炎患者的检测。结果：本室建立的双重PCR检测方法成熟，对两瑞朱体能同时进行检测。结论：双重PCR技术检测方法简单可行，特异性高。用PCR检测两种病原体节省时间及材料，并能观察两种病原体的协同作用。     

开口箭皂苷体外抗肿瘤作用的初步实验研究

目的 通过体外细胞培养技术,探讨开口箭皂苷的细胞毒活性及其机制,为进行深层次研究提供依据.方法 MTT比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡.结果 MTT结果显示,开口箭总皂苷、30%皂苷和70%皂苷对Hela和HepG2细胞的抑制作用显著,与阴性对照组相比有非常显著性差异(P<0.005).开口箭总皂苷、30%皂苷和70%皂苷和环磷酰胺对Hela细胞IC50分别为1 372.92,3 138.51,729.72,3 459.08 μg/ml;对HepG2细胞IC50分别为1 221.39,2 657.53,562.70,3 668.51μg/ml.流式细胞仪检测结果显示,开口箭总皂苷、30%总皂苷在浓度为2 500μg/ml时,70%总皂苷和环磷酰胺在浓度为1 250 μg/ml时主要将Hela细胞细胞周期阻滞于S期,且能够诱导肿瘤细胞凋亡.结论 开口箭皂苷对Hela和HepG2细胞较环磷酰胺具有明显的抑制作用,其中对HepG2细胞株较为敏感,且能将Hela细胞细胞周期阻滞于S期从而诱导Hela细胞凋亡.     

蜈蚣提取物诱导SiHa细胞凋亡及其作用机制的研究

目的:研究蜈蚣提取物对宫颈癌SiHa细胞生长的抑制及其作用机制。方法:观察不同浓度的不同蜈蚣提取物对宫颈癌SiHa细胞的生长抑制情况:运用体外细胞培养技术,以不同浓度的蜈蚣提取物和阳性对照药顺铂作用于培养的SiHa细胞48h,采用MTT法测定药物对细胞生长的影响,以流式细胞术观察DNA含量和凋亡的变化情况,DNA片断化分析凋亡特有DNA梯形格局和Western Blot测定bax、Caspase3蛋白水平的表达。结果:SiHa细胞用8、16、32mg/ml的乙醚、乙醇蜈蚣提取物处理48h后,细胞生长显著受抑;DNA周期改变明显,亚G1峰与对照组有显著性差异;DNA-Ladder显著;Western Blot提示相关凋亡蛋白bax、Caspase3表达并显示活性,凋亡率增高明显。结论:中药蜈蚣乙醚、乙醇提取物在体外对宫颈癌SiHa细胞的生长有明显地抑制作用,其机制与改变细胞DNA周期,促进凋亡有关。