蜈蚣提取物对宫颈癌Caski细胞增殖的抑制效应

目的:观察蜈蚣对宫颈癌Caski细胞生长的抑制作用。方法:实验于2006-06/09在三峡大学医学院免疫学重点学科实验室完成。运用体外细胞培养技术,以不同浓度(8,16,32g/L)的乙醚、乙醇蜈蚣提取物作用于培养的Caski细胞48h,采用MTT法测定细胞代谢率,以流式细胞术观察DNA含量和凋亡的变化情况。结果:①细胞形态由梭形逐渐变圆,胞浆皱缩,体积缩小,细胞数量明显少于阴性对照组。②MTT以浓度依赖方式降低吸光度值,与对照组相比抑制率增高显著。③细胞周期各时相DNA含量改变明显,G0～G1期细胞显著降低(由最初64.0%降至最低37.2%),而S,G2～M期细胞明显上升;凋亡率显著增高,阳性对照药物顺铂组也有上述类似改变。结论:中药蜈蚣乙醚、乙醇提取物在体外对宫颈癌Caski细胞的生长有明显地抑制作用,机制与影响癌细胞的DNA合成,阻止瘤细胞的分裂增殖,并促进其凋亡有关。呈现一定的量效和时效相关性。     

阿司匹林诱导人宫颈癌Caski细胞凋亡及其分子机制

目的探讨阿司匹林对人宫颈癌Caski细胞体外增殖抑制作用及机制,为其用于宫颈癌的临床治疗提供依据。方法体外培养Caski细胞,分别以1．0、2．5、5．0、7．5、10．0mmol／L阿司匹林干预。采用噻唑蓝（MTT）法测定细胞增殖抑制率;流式细胞仪测定细胞周期时相改变及细胞凋亡率;琼脂糖电泳法观察凋亡细胞DNA Ladder现象;Western blot法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3等凋亡相关基因表达。结果阿司匹林干预后Caski细胞增殖明显受抑,且呈时间和剂量依赖性;Caski细胞G0／G1期和G2／M期比例明显下降,S期比例升高;细胞凋亡率明显升高;Bcl-2表达量减少,Bax表达增加,Caspase-3活化。结论阿司匹林在体外可抑制人宫颈癌Caski细胞增殖,其机制可能为抑制肿瘤细胞DNA合成,改变其细胞周期时相分布,诱导其凋亡。     

顺铂诱导人宫颈鳞癌细胞Caski细胞凋亡的分子机制

目的研究顺铂对人宫颈癌Caski细胞体外增殖抑制作用及凋亡的影响,探究顺铂诱导宫颈鳞癌细胞凋亡的分子机制。方法运用体外细胞培养,顺铂以不同浓度（20、10、5、2、1μg/ml）作用于人宫颈癌Caski细胞。采用噻唑蓝（MTT）法测定顺铂对细胞杀伤率;用流式细胞检测法测定细胞周期时相改变及细胞凋亡率;琼脂糖电泳法观察凋亡细胞DNALadder现象;Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2等表达;荧光染色观察细胞线粒体膜电位的改变。结果顺铂对人宫颈癌Caski细胞有较强的抑制作用,有明显的时间和剂量依赖性;可使Caski细胞G2/M期比例明显下降（P〈0.01）,S期比例升高（P〈0.01）;诱导细胞凋亡发生;顺铂作用Caski细胞后,Bcl-2表达量减少,Bax表达增加,Caspase3活化,线粒体膜电位改变。结论顺铂在体外可有效抑制人宫颈癌Caski细胞增殖,可能通过影响肿瘤细胞DNA合成,改变细胞周期时相分布、诱导凋亡发挥抑制细胞增殖作用,其凋亡分子机制与Bcl-2家族表达调控,线粒体膜跨膜电位下降的线粒体参与凋亡途径相关。     

HIV-1Nef调节内皮细胞黏附分子ICAM-1的表达

目的研究HIV-1的调节基因Nef对ECV304细胞ICAM-1表达的影响,从而为分析HIV-1感染引起内皮细胞生物学活性的变化,以及为阐明Nef参与HIV-1致病的分子机制奠定基础。方法应用本实验室已经建立保存的HIV-1Nef基因在内皮细胞的稳定表达细胞株ECV304-Nef和其阴性对照细胞株ECV304 pcDNA 3.1(+),通过RT-PCR、实时定量PCR(real-time PCR)、Western blot、FCM和细胞黏附试验分析ECV304-Nef细胞ICAM-1的表达水平。结果 RT-PCR、real-time PCR结果显示ECV304-Nef细胞ICAM-1 mRNA表达水平明显升高,为对照组的(4.3±0.2)倍;Western blot结果示ECV304-Nef细胞I-CAM-1蛋白的表达水平高于对照组;FCM分析显示ECV304-Nef细胞和对照组细胞ICAM-1阳性细胞百分率分别为(35.3±2.2)%和(12.5±0.8)%(P0.01),两组间ICAM-1表达有显著差异。细胞黏附实验观察到ECV304-Nef细胞黏附的Jurkat细胞数明显多于对照组,荧光仪定量分析结果显示ECV304-Nef细胞黏附的Jurkat细胞的荧光强度值显著高与对照组(P0.05)。结论本实验证实了HIV-1Nef基因可以上调血管内皮细胞细胞黏附分子ICAM-1的表达。     

NF-κB与肿瘤关系的研究进展

NF-κB是一种具有多功能的核转录因子.文章综述了NF-κB的结构和作用发挥机制及其与机体相关功能和肿瘤发生发展、诊断治疗等相关方面的研究简况.     

中药蜈蚣的研究进展

蜈蚣是一种具有多种生物活性的动物药材.文章综述了蜈蚣的种类、化学成分、药理作用和临床应用的研究简况.     

非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型的建立

目的:建立并研究高脂饲料(HFD)联合不同浓度葡聚糖硫酸钠(DSS)饮水导致小鼠非酒精性脂肪肝炎(NASH)的动物模型,确定最适DSS浓度。方法:雄性昆明小鼠80只,随机分为8组,即正常对照组、HFD组、2%DSS组、2%DSS+HFD组、2.5%DSS组、2.5%DSS+HFD组、3%DSS组、3%DSS+HFD组。高脂组均给予高脂饲料,饲养1周后给予5 d相应浓度的DSS溶液,再换正常饮水。2周后处死,HE染色观察结肠和肝脏组织形态,油红O染色观察肝脏脂质沉积情况,RT-PCR检测肝脏chREBF、IL-6的表达情况。结果:组织病理结果显示,3种浓度DSS联合高脂组肝脏均有脂质沉积,并且与DSS浓度呈正相关;3种浓度DSS联合高脂组的结肠损伤与肝损伤结果一致。3种浓度DSS联合高脂组的脂代谢相关基因表达增加,与肝脏组织学结果一致,同时炎症因子表达升高,其中2.5%DSS高脂联合组IL-6表达显著上调(P0.001)。结论:给予DSS可加速高脂饮食诱导小鼠NASH模型的建立,且在本研究中确立2.5%DSS为最适浓度。     

宜昌三峡移民妇女生殖道感染及宫颈糜烂的调查

目的:了解宜昌三峡移民生殖道白色念珠菌、沙眼衣原体感染率以及宫颈糜烂发生情况,分析其相关关系,为进一步改善该人群生殖健康提供依据。方法:通过常规妇科检查、病原体分离培养、核酸鉴定分析了解白色念珠菌、沙眼衣原体的感染率与宫颈糜烂的发生率。结果:该地区妇女生殖道白色念珠菌、沙眼衣原体感染率分别为23.7%、16.9%,宫颈糜烂发生率为58.0%,明显高于卫生部基层卫生与妇幼保健司在全国部分城市抽查的结果以及在浙江、山东农民中调查的结果,该地区宫颈糜烂的发生与沙眼衣原体感染有一定关系。结论:三峡坝区妇女生殖道感染及宫颈糜烂发病率较高与其经济发展水平、特殊的不稳定生活状态、较大劳动强度和受教育程度有关,防治妇女生殖道感染应为该地区妇女保健的重要内容之一,有关部门需采取综合措施重点干预。     

乌司他丁联合低分子肝素治疗急性重度一氧化碳中毒疗效观察

目的探讨乌司他丁联合低分子肝素对急性重度一氧化碳中毒（SACMP）的治疗作用。方法 108例SACMP患者随机分为对照组和治疗组,每组54例。所有患者均给高压氧、脱水、营养脑神经治疗。治疗组在此基础上,给低分子肝素钙5000 U皮下注射,b.i.d.×10 d,乌司他丁30万U静脉注射,q8 h×7 d。结果 24 h内清醒率治疗组77.8%比对照组66.7%高,差异有统计学意义（P〈0.05）;14 d和3个月有效率治疗组分别为92.6%和96.3%高于对照组的79.6%和85.2%,差异有统计学意义（P〈0.05）;24 h和14 d时血栓栓塞总发生率治疗组分别为3.70%和0,显著低于照组的25.93%和9.26%,差异有统计学意义（P〈0.05）;迟发性脑病发生率对照组7.41%（4/54）高于治疗组的1.85%（1/54）,两组比较差异均无统计学意义（P〉0.05）,将迟发性脑病患病率和死亡率合并比较对照组显著高于治疗组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论在高压氧、脱水、营养脑神经治疗的基础上,乌司他丁联合低分子肝素治疗SACMP,患者意识恢复快、有效率高、血栓栓塞事件显著减少,迟发型脑病和死亡患者减少。     

HCK SH3结构域与HIV-1 Nef蛋白体外结合活性的检测

目的构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1/SH3,检测原核表达的SH3蛋白的生物学活性。方法利用PCR方法扩增HCK SH3基因,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒pGEX-4T-1/SH3,转化E.coli DH5α,进行双酶切和测序鉴定。筛选阳性质粒,转化至E.coli BL21(DE3)中进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE和蛋白质印迹检测,同时纯化SH3蛋白。表达并纯化HIV-1 Nef蛋白,利用GST pull-down方法检测SH3蛋白与Nef蛋白的结合活性。结果成功获得重组质粒pGEX-4T-1/SH3,测序正确,高效表达并纯化了SH3蛋白。GST pull-down实验结果显示SH3与HIV-1 Nef蛋白具有良好的结合活性。结论成功地克隆、表达和纯化了GST-SH3蛋白,SH3与Nef蛋白具有体外特异性结合活性,为进一步研究针对Nef与SH3结合的靶向药物的筛选提供了实验基础。