低剂量X射线全身照射对小鼠IL-12和CD2、CD48表达的影响

目的　检测低剂量辐射 (LDR)对小鼠腹腔巨噬细胞IL 12的影响 ,同时观察胸腺细胞CD2及腹腔巨噬细胞表面分子CD48的变化并分析其与IL 12变化的关系。方法　分别采用Northernblot和ELISA检测了 0 0 75GyX射线全身照射后IL 12转录水平、蛋白水平的变化 ;采用荧光免疫流式细胞术检测CD2、CD48蛋白表达的变化。结果　 (1)IL 12的改变 :0 0 75GyX射线全身照射后 1h巨噬细胞中IL 12、p3 5及p40亚基mRNA水平均迅速升高 ,分别达到假照组的 13 1%和 192 %(P <0 0 5) ,而后开始回降直至照后 16～ 48h恢复正常 ;巨噬细胞分泌IL 12在照后 4～ 8h明显增高(P <0 0 5)。 (2 )CD2、CD48表达变化 :0 0 75GyX射线照射后 4h胸腺细胞CD2表达即开始升高 ,至8h达峰值 (P <0 0 5～ 0 0 1) ;巨噬细胞CD48表达在照射后 2h开始升高 ,至 48h仍明显高于假照水平 (P <0 0 5～ 0 0 1) ;4h量效结果显示 ,50 ,75,10 0和 2 0 0mGy均使CD2、CD48表达上调 (P <0 0 5)。结论　LDR可引起IL 12表达上调 ,CD2、CD48分子与IL 12的变化具有一致性 ,提示两者可能参与IL 12的免疫调控     

电离辐射对小鼠组织金属硫蛋白-1mRNA表达的影响

目的 探讨X射线全身照射对小鼠肝、脑、胸腺及脾脏金属硫蛋白(MT)-1 mRNA表达的影响及其剂量效应关系。方法 采用Northem杂交方法检测了X射线全身照射后小鼠肝、脑、胸腺及脾脏MT-1 mRNA水平变化。结果 4GyX射线照射后肝脏及胸腺MT-1mRNA水平逐渐升高，照射后4h达峰值，分别为假射组的1．82及1．72倍，24h基本恢复至正常水平；0．5～6Gv照射后4h，肝脏及胸腺MT-1mRNA水平均呈剂量依赖性增加，6Gy照射后MT-1mRNA水平分别为假照组的2．13和1．62倍。但X射线全身照射后小鼠脑及脾脏MT-1mRNA水平未见明显变化。结论 X射线全身照射可提高小鼠肝脏和胸腺MT-1 mRNA水平，但对小鼠脑及脾脏MT-1mRNA表达无影响.     

X射线全身照射对小鼠骨髓细胞CyclinD、CDK4表达的影响

目的 研究X射线全身照射对小鼠骨髓细胞CyclinD、CDK4表达的影响，以探讨电离辐射诱导小鼠骨髓细胞G1阻滞的分子机理。方法 采用Northern blot和半定量RT－PCR方法分别检测CDK4、CyclinD基因转录水平变化；流式细胞仪检测了X射线全身照射小鼠骨髓细胞CyclinD、CDK4的表达及周期时程的变化。结果 2Gy X射线全身照射后12h骨髓细胞出现G1期细胞百分数升高（P＜0．05），G2＋M期细胞百分数于照后4h及12h升高（P＜0．05）；CyclinD基因转录水平从2h开始下降，48h达到最低，照后72h恢复至正常水平，CDK4的变化趋势与CyclinD相似，只是从8h开始下降，48h达到最低，照后72h恢复假照组水平；CyclinD蛋白表达在照射后2、4、24、48h显著降低（P＜0．01），CDK4蛋白表达在照射后2h开始急剧下降，持续至照射后48h仍未恢复到对照水平（P＜0．01）。结论 2Gy X射线全身照射可诱导小鼠骨髓细胞发生G1、G2阻滞；CyclinD、CDK4基因及其蛋白产物可能在电离辐射诱导的小鼠骨髓细胞周期阻滞中起重要作用。     

电离辐射对小鼠骨髓细胞cyclinB1、cdc2基因转录的影响

目的　研究X射线全身照射对小鼠骨髓细胞cyclinB1、cdc2基因转录的影响 ,以探讨电离辐射诱导小鼠骨髓细胞G2 期阻滞的分子机理。方法　采用流式细胞仪检测了X射线全身照射后小鼠骨髓细胞周期进程的变化。采用半定量RT PCR方法分别检测cyclinB1、cdc2基因转录水平变化。结果　 2GyX射线全身照射后 4及 1 2hG2 +M期细胞百分率升高 (P <0 0 5) ;0 5～ 6Gy照射后 1 2hG2 +M细胞百分率呈剂量依赖性增加 (P <0 0 5～P <0 0 1 )。 2GyX射线照射后 2～ 48h小鼠骨髓细胞cyclinB1转录水平在各个时间点未见明显变化 ,0 5～ 6GyX射线照射后 1 2h ,骨髓细胞cyclinB1基因转录在各剂量点均未见明显改变 ;2GyX射线照射后小鼠骨髓细胞cdc2转录水平从照后 4h即开始不同程度下降 ,1 2h达最低值 (为假照射组的 46 % ) ,照射后 48h开始恢复 ,0 5～ 6GyX射线照射后 1 2h ,骨髓细胞cdc2基因转录水平在各剂量点均明显降低 ,分别达到假照射组的40 %～ 70 %。结论　电离辐射可诱导小鼠骨髓细胞发生G2 期阻滞 ,cdc2激酶活性下降在G2 期阻滞中起重要作用。     

电离辐射对小鼠骨髓细胞p53、Wafl、gadd45基因转录水平的影响

目的研究X射线全身照射对小鼠骨髓细胞p53、wafl、gadd45基因转录水平的影响,以探讨电离辐射诱导小鼠骨髓细胞G1阻滞的分子机理.方法采用Northern blot和半定量RT-PCR方法分别检测p53、wafl、gadd45基因转录水平变化.结果2GyX射线全身照射后2～72 hp53基因转录水平均有不同程度的升高,wafl基因在照射后2 h开始升高,4 h达峰值,一直持续到照后48 h开始恢复,gadd45转录水平除在照射后2 h一过性升高外,从8 h即开始不同程度下降,照射后72 h开始恢复.分别以0.5～6.0 Gy X射线全身照射后12 h取小鼠骨髓细胞作量效研究表明,p53的改变在照射后各组虽有不同程度的升高,但未见明显的剂量依赖,wafl基因转录呈明显的剂量依赖性升高,6.0 Gy X射线照射后达对照组的3.41倍,gadd45未见升高趋势.结论在电离辐射诱导的小鼠骨髓细胞周期G1阻滞中p53-wafl通路起重要作用,而gadd45可能不参与该过程调控.     

电离辐射对小鼠骨髓细胞p53、waf1、gadd45基因转录水平的影响

目的：研究X射线全身照射对小鼠骨髓细胞p53、wafl、gadd45基因转录水平的影响，以探讨电离辐射诱导小鼠骨髓细胞G1阻滞的分子机理。方法：采用Northern blot和半定量RT-PCR方法分别检测p53、wafl、gadd45基因转录水平变化。结果：2Gy射线全身照射后2-72hp53基因转录水平均有不同程度的升高，wafl基因在照射后2h开始升高，4h达峰值，一直持续到照后48h开始恢复，gadd45转录水平除在照射后2h一过性升高外，从8h即开始不同程度下降，照射后72h开始恢复。分别以0.5-6.0Gy X射线全身照射后12h取小鼠骨髓细胞作量效研究表明，p53的改变在照射后各组虽有不同程度的升高，但未见明显的剂量依赖，wafl基因转录呈明显的剂量依赖性升高，6.0Gy X射线照射后达对照组的3.41倍，gadd45未见升高趋势。结论：在电离辐射诱导的小鼠骨髓细胞周期G1阻滞后p53-wafl通路起重要作用，而gadd45可能不参与该过程调控。     

低剂量辐射对脐血免疫细胞功能影响的初步研究

目的 观察低剂量辐射对脐血淋巴细胞增殖，CD25分子表达，IL－2水平和NK细胞活性的影响。方法：（1）采用^3H-TdR掺入法和^3H-TdR释放法检测62mGy,124mGy,186mGy 射线照射新鲜分离的脐血淋巴细胞增殖和NK细胞活性。（2）采用单克隆抗体直接免疫荧光标记流式细胞术和酶联免疫吸附实验检测62mGy γ射线照射新鲜分离的脐血淋巴细胞在不同时间（12h,24h,48h）CD25分子表达和培养上清液的IL－2水平。结果 在一定剂量范围内的低剂量辐射显著促进脐血淋巴细胞增殖和增强NK细胞活性。62mGy γ射线照射后脐血淋巴细胞CD25表达和IL－12水平显著上调，CD25表达和IL－2的水平随时间推移逐步增高。结论 在一定剂量范围内的低剂量辐射能促进淋巴细胞的增殖，活化和成熟，增强NK细胞活性。低剂量辐射对脐血免疫细胞存在兴奋效应。可能加速脐血移植时造血功能和免疫功能的重建，这可能增加移植物抗白血病效应，降低其复发，显示出临床应用前景。     

2 Gy X射线对EL-4细胞p16、CyclinD、CDK4基因转录和蛋白表达影响

目的研究电离辐射对EL-4细胞p16、CyclinD、CDK4基因转录及蛋白表达的影响.探讨p16/CyclinD/CDK4负向调控通路在辐射诱导G1期阻滞中的作用.方法采用半定量RT-PCR方法检测2 GyX射线照射后EL-4细胞p16 mRNA水平变化,采用Northern blot方法检测CyclinD、CDK4基因转录变化,应用免疫细胞化学方法(ICC)检测3种蛋白表达的变化.结果2 Gy X射线照射后2～48 h EL-4细胞p16 mRNA水平增高,48 h恢复至正常水平.p16蛋白表达照射后2h开始增高,12h达到峰值(P＜0.01),72 h恢复至正常水平.EL-4细胞周期蛋白CyclinD mRNA水平于照射后1 h开始明显降低,照射后8 h降至最低值.CyclinD蛋白表达于照射后8 h开始明显减少,持续至照射后48 h(P＜0.05～P＜0.01).EL-4细胞CDK4 mRNA水平于照射后1h明显降低,照射后4 h～12 h保持较低水平,72 h恢复至正常水平.CDK4蛋白表达于照射后4 h明显下降,12 h降至最低,72 h仍低于正常水平(P＜0.01).结论2 Gy X射线照射可诱导EL-4细胞p16表达增高,CyclinD和CDK4表达降低.提示p16/CyclinD/CDK4负向调控通路可能在电离辐射诱导EL-4细胞G1期阻滞中发挥重要作用.     

p21在电离辐射诱导EL-4细胞G_1期阻滞中的作用

目的　探讨 p2 1在电离辐射诱导EL 4细胞G1期阻滞中的作用。方法　采用North ernblot检测 p2 1WAF1mRNA水平的变化 ;采用流式细胞术检测 p2 1蛋白表达及细胞周期的变化。结果　 4 0GyX射线照射后 12h、2 4h、48hG1期EL 4细胞百分数明显高于假照射组 ;p2 1WAF1mRNA水平从照射后 1h开始升高 ,4h达峰值 ,持续至照后 12h ;p2 1蛋白表达在照射后 2～ 48h明显增高。结论　 4 0GyX射线照射可诱导EL 4细胞G1期阻滞 ,p2 1在电离辐射诱导EL 4细胞G1期阻滞中起重要作用。     

电离辐射对小鼠腹腔巨噬细胞IL-12和NF-κB活性的影响

目的　观察电离辐射对小鼠腹腔巨噬细胞IL 12和NF κB活性的影响以及两者间相互作用的关系。方法　采用酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测IL 12蛋白水平变化 ,通过电泳凝胶移动变化分析 (EMSA)检测NF κB结合活性的变化。结果　①ELISA检测结果显示 ,腹腔巨噬细胞分泌的IL 12在 0 0 75GyX射线全身照射后 4～ 8h升高 (P <0 0 5 ) ,2Gy照射后从 2h开始升高 ,一直持续至 4 8h仍高于假照组的水平 (P <0 0 5 ) ,而且 2Gy引起IL 12升高的幅度大于 0 0 75Gy ;②EMSA检测结果显示 ,NF κB呈现两条特异带分别代表P6 5 P5 0、P5 0 P5 0两种二聚体 ,0 0 75Gy照射后P6 5 P5 0明显增高 ,最高时超过假照组的 2 0 0 % (2～ 8h) ,而P5 0 P5 0则升高不明显 ;2Gy照射后则显示P6 5 P5 0、P5 0 P5 0均明显升高 ,二者在 2～ 8h也超过假照组的 2 0 0 %。结论　IL 12表达增强和NF κB活性升高的一致性提示NF κB可能参与辐射诱导IL 12变化的分子调控。     

低剂量电离辐射诱导小鼠脑c－fos原癌基因的表达

应用原位杂交方法观察７５ｍＧｙ全身照射后不同时间小鼠脑神经元ｃ－ｆｏｓ原癌基因ｍＲＮＡ水平的变化。结果发现，７５ｍＧｙ全身照射可诱导小鼠脑内广泛神经元ｃ－ｆｏｓ的表达，大脑皮质和下丘脑尤为明显。照射后１５分钟ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ即出现，１小时最为明显，２小时后逐渐减少，８小时完全消失。提示低剂量辐射可增加神经元的活性。     

X射线全身照射诱导小鼠派伊氏板细胞凋亡及其机理的研究

目的 研究不同剂量X射线全身照射后小鼠派伊氏板细胞凋亡相关基因蛋白表达的变化规律。初步阐明凋亡调控的部分分子机理。方法 应用光、电镜技术观察小鼠派伊氏板细胞凋亡的形态改变,并用流式细胞术检测小鼠派伊氏板细胞Bcl-xL及Fas-L蛋白表达的变化。结果 2GyX射线全身照射后派伊氏板细胞凋亡增加,且Bcl-xL蛋白表达下降,Fas-L蛋白表达升高;75mGyX射线全身照射后,派伊氏板细胞凋亡减少,且Bcl-xL蛋白表达升高,Fas-L蛋白表达下降。结论 凋亡相关基因Bcl-xL、Fas-L在电离辐射诱导的派伊氏板细胞凋亡方面起重要的调控作用。     

低剂量全身照射抑制小鼠癌细胞播散

小鼠受５０，７５，１００和１５０ｍＧｙＸ射线全身照射后２４小时经球后静脉注入Ｌｅｗｉｓ肺癌或Ｂ１６黑色素瘤细胞。注后１４天以计数肺肿瘤结节数为指标，发现受照小鼠癌细胞播散明显低于假照射对照小鼠。Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞注入前２４小时接受７５ｍＧｙ全身照射小鼠与注入相同癌细胞数的假照射小鼠比较，发现照后２～６天脾脏ＮＫ细胞活性和ＩＬ－２分泌均增高。提示低剂量辐射可能通过增强免疫反应抑制癌细胞播散。     

低剂量电离辐射诱导小鼠脑c-fos原癌基因的表达

应用原位杂交方法观察７５ｍＧｙ全身照射后不同时间小鼠脑神经元ｃ－ｆｏｓ原癌基因ｍＲＮＡ水平的变化。结果发现，７５ｍＧｙ全身照射可诱导小鼠脑内广泛神经元ｃ－ｆｏｓ的表达，大脑皮质和下丘脑尤为明显。照射后１５分钟ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ即出现，１小时最为明显，２小时后逐渐减少，８小时完全消失。提示低剂量辐射可增加神经元的活性。     

不同剂量X射线全身照射后胸腺细胞游离钙浓度的变化时程

目的研究Ｘ射线全身照射后胸腺细胞游离钙浓度的变化时程，以揭示低剂量辐射免疫增强效应的分子机理。方法应用Ｆｕｒａ－２ＡＭ荧光探针，采用荧光分光光度法检测了小鼠胸腺细胞内游离钙浓度。结果７５ｍＧｙ全身照射后可使细胞内游离钙浓度增高，２４小时达峰值，７２小时回降至对照水平。结论低剂量辐射可促进Ｔ淋巴细胞信号传递     

X射线全身照射对小鼠腹腔巨噬细胞NO产生的影响

目的：观察７５ｍＧｙ、２．０ＧｙＸ射线全身照后不同的时间,小鼠腹腔巨噬细胞ＮＯ产生的时程变化及不同剂量照射后２４ｈ时ＮＯ、ｉＮＯＳ的含量变化。方法分光光度法及免疫组织化学方法。结果：ｉＮＯＳ和ＮＯ产的生与剂量呈正相关。２．０Ｇｙ照射后,ＮＯ从６ｈ到４８ｈ随时间推移产生量逐渐增加,４８ｈ达峰值,为对照的３．８倍,而后回降。结论电离辐射可刺激巨噬细胞合成ｉＮＯＳ及产生ＮＯ。     

低剂量辐射对人骨髓间充质干细胞影响的研究

目的 探讨低剂量辐射(LDR)对人骨髓间充质干细胞(hBM-MSC)生物学特性的影响。方法 应用体外培养传代的第四代hBM-MSC,采用X射线照射,照射剂量分别为50 mGy、75mGy、100 mGv,剂量率为12.5 mGy/min,分别观察LDR后hBM-MSC生长曲线、细胞周期与凋亡的变化及细胞因子、干细胞因子(SCF)、白细胞介素6(IL-6)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)表达量的变化。结果 LDR后,hBM-MSC从72 h起生长明显加快;LDR照射hBM-MSC后,在G0-G1期百分率逐渐减少,S期百分率在照射后48 h、72 h逐渐明显增多,以75 mGy照射后72 h的S期百分率增多最明显,为68.88%,而细胞凋亡的变化结果是LDR后在24 h、48 h有增多趋势,照射后72 h,凋亡细胞百分率有减少趋势;LDR照射hBM。MSC后24 h、48 h SCF分泌量均有升高趋势;50mGv、75mgy、100mGyX射线照射hBM-MSC后在培养的24 h、48 h,IL-6分泌量均有升高趋势;LDR照射hBM-MSC后,除50mGy照射后72h外,M-CSF分泌量在不同剂量照射后24 h、48 h、72 h均持续升高。结论 LDR后hBM-MSC从生长曲线、细胞周期与凋亡的变化及细胞因子表达量的变化均表现出兴奋性效应。     

低剂量电离辐射对小鼠下丘脑cAMP、cGMP及Fos蛋白表达的影响

目的　研究低剂量辐射对小鼠下丘脑cAMP、cGMP及Fos蛋白表达的影响。方法cAMP、cGMP和Fos蛋白分别采用竞争性蛋白结合分析、放免分析和免疫组织化学法。结果　 75mGyX射线全身照射后 ,小鼠下丘脑cAMP含量迅速增高 ,15min即达峰值 ,而后迅速回降 ,1h后接近假照射水平 ,以后出现小的波动 ;cGMP含量的变化基本与cAMP的变化相反 ;Fos蛋白在下丘脑诸多神经元核团内均呈阳性 ,照射后 8h达峰值 ,12h后逐渐减少 ,48h基本恢复至假照射水平。结论　提示低剂量辐射可激活小鼠下丘脑神经元的信号传递 ,进而调节免疫系统功能。