梁金菇多糖促人急性早幼粒细胞白血病细胞系(HL-60)细胞凋亡研究

目的 :观察梁金菇多糖对人类早幼粒细胞白血病细胞系 (HL 6 0 )是否具有凋亡诱导作用 ,并进一步研究半胱天冬酶 3(Caspase 3)基因在此过程中的作用。方法 :四氮唑蓝比色法 (MTT法 )观察梁金菇多糖对HL 6 0细胞的抑制率 ,应用形态学、流式细胞术、DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡的发生。应用半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法检测凋亡相关基因Caspase 3mRNA表达的变化。结果 :梁金菇多糖对HL 6 0细胞的生长有明显的抑制作用 ,并诱导肿瘤细胞发生凋亡 ;在HL 6 0细胞凋亡过程中 ,凋亡相关基因Caspase 3转录水平比用药前增强。结论 :梁金菇多糖促HL 6 0细胞凋亡 ,且与Caspase 3基因表达有关     

青蒿琥酯诱导肿瘤细胞凋亡与抑制存活蛋白表达有关

目的 :探讨青蒿琥酯 (artesunate ,Art)诱导肿瘤细胞凋亡与存活蛋白 (survivinprotein)表达的关系。方法 :采用细胞荧光染色、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳法和测定细胞浆Caspase 3的活性等手段检测肿瘤细胞暴露于不同浓度的Art时 ,对肿瘤细胞凋亡的诱导作用 ;用RT PCR、WesternBlotting法 ,检测不同浓度的Art作用于肿瘤细胞时 ,对survivinmRNA和survivin蛋白表达的影响。结果 :HL6 0细胞暴露于Art时 ,呈现典型细胞凋亡特征 ,如 :胞核固缩、形成凋亡小体 ;凋亡细胞的比例呈浓度依赖性增高 ;琼脂糖电泳出现明显的“梯状”条带 ;细胞浆Caspase 3的活性呈浓度依赖性增高等。RT PCR检测表明 ,A5 49细胞暴露于Art 10和 5 0g·L-172h后 ,survivinmRNA的表达呈浓度依赖性降低 ,对照组、10和 5 0mg·L-1处理组的survivin条带和内标GAPDH条带灰度的比值分别为 1.74 5、0 .390和0 .0 2 3;WesternBlotting法也检测到Art抑制Survivin蛋白的表达。结论 :Art诱导肿瘤细胞发生凋亡 ,激活Caspase 3途径 ,可能与抑制survivin基因表达有关     

三氧化二砷诱导肿瘤细胞凋亡途径的研究

目的　探讨细胞线粒体跨膜电位 (Δψm)和半胱氨酶3(Caspase 3)在三氧化二砷 (As2 O3 )诱导肿瘤细胞凋亡过程中的作用。方法　以Namalwa、SGC790 1和Bcap37细胞为体外模型 ,流式细胞仪检测亚G1期细胞含量和细胞膜磷脂酰丝氨酸 (PS)外翻量等方法鉴定细胞凋亡 ;碘化丙啶 (PI) /Rhodamine(Rh12 3)双染色检测Δψm变化并观察了Caspase 3抑制剂DEVD CHO对As2 O3 诱导肿瘤细胞凋亡的影响。结果　As2 O3 诱导肿瘤细胞凋亡效应与其诱导细胞Δψm下降和Caspase 3活性升高相关 ,抑制Caspase 3活性后As2 O3 使细胞选择坏死通路。结论　As2 O3 可能通过诱导细胞Δψm下降激活Caspase 3并最终使肿瘤细胞凋亡。     

阿霉素热化疗诱导A549细胞凋亡及线粒体跨膜电位的变化

目的 :探讨阿霉素 (adrimycin ,ADM)热化疗诱导人肺腺癌A5 49细胞凋亡及对线粒体跨膜电位(Δψm)的影响。 方法 :不同浓度的阿霉素作用于体外培养的A5 49细胞 ,4 2 .5℃作用 30min后 ,37℃继续培养 ,在不同时间内检测。用电镜、MTT法、流式细胞仪检测。结果 :阿霉素热化疗明显增强对A5 49细胞的抑制作用 ,细胞内阿霉素的浓度显著高于化疗组 (P <0 .0 1) ;阿霉素浓度为 1.0 ,2 .0mg·L-1时 ,热化组与化疗组比较 ,凋亡率增高 ,线粒体膜电位下降 (P <0 .0 1)。结论 :线粒体跨膜电位下降可能是ADM热化疗诱导A5 49细胞凋亡的关键     

丙戊酸钠诱导K562细胞凋亡的机制探讨

目的 探讨丙戊酸钠(VPA)诱导K562细胞凋亡的可能机制.方法 将K562细胞分为经VPA 2.0mmol/L处理的实验组(A组)和正常对照组(B组),分别培养24、48、72 h.流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位改变,分光光度法检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶(Caspase)8、Caspase-9蛋白活性.结果 A组细胞凋亡率、细胞线粒体跨膜电位破坏率呈时问依赖性地增加,且明显高于B组(P<0.05);与B组相比,A组不同时间的Caspase-8、Caspase-9活性均上调(P<0.05).结论 VPA诱导K562细胞凋亡的机制可能与线粒体跨膜电位崩溃或死亡途径有关.     

姜黄素对Aβ_(1-42)诱导的细胞损伤和线粒体途径细胞凋亡的抑制作用

目的探讨姜黄素对Aβ_(1-42)诱导的细胞损伤和凋亡的抑制作用。方法采用体外培养的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,分为溶剂对照组、Aβ_(1-42)10μmol·L~(-1)损伤组、Aβ_(1-42)10μmol·L~(-1)+姜黄素1,5和10μmol·L~(-1)保护组及姜黄素10μmol·L~(-1)对照组;噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,酶活性法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量以考察细胞损伤程度;AnnexinⅤ-FITC/PI染色法测定细胞凋亡;JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;比色法测定胱天蛋白酶9和胱天蛋白酶3的活性;Western蛋白印迹法检测胱天蛋白酶3表达。结果与溶剂对照组比,Aβ_(1-42)10μmol·L~(-1)损伤组细胞存活率显著降低(P<0.01)。与Aβ_(1-42)10μmol·L~(-1)损伤组比较,姜黄素5和10μmol·L~(-1)缓解了Aβ_(1-42)诱导的细胞存活率下降(P<0.05),降低了Aβ_(1-42)诱导的乳酸脱氢酶释放水平(P<0.01)和细胞早期及晚期凋亡率(P<0.01)。姜黄素抑制了Aβ_(1-42)诱导的细胞线粒体膜电位去极化作用(P<0.01);姜黄素1~10μmol·L~(-1)抑制了Aβ_(1-42)诱导的胱天蛋白酶9及胱天蛋白酶3级联激活作用,且呈浓度依赖性(r=0.990,P<0.01;r=0.996,P<0.01)。姜黄素10μmol·L~(-1)对照组以上指标与溶剂对照组无明显差异。结论姜黄素可能通过升高线粒体膜电位、降低胱天蛋白酶活性抑制Aβ_(1-42)诱导的细胞损伤和线粒体途径细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导K562/ADM细胞凋亡的作用机制研究

目的 :观察三氧化二砷 (As2 O3 )对K5 6 2 ADM细胞的诱导凋亡效应 ,探讨其作用机制。方法 :应用噻唑蓝 (MTT)比色法、Wright Giemsa染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术 (FCM)观察K5 6 2 ADM细胞凋亡 ;FCM测定K5 6 2 ADM细胞Fas、Bcl 2、P5 3蛋白水平的变化 ;比色法检测Caspase3活性变化。结果 :As2 O3 可抑制K5 6 2 ADM细胞增殖 ;K5 6 2 ADM呈典型凋亡形态改变 ;DNA电泳可见梯状条带出现 ;FCM分析示亚G1期细胞比例增高 ,G2 M期阻滞 ;Fas、P5 3蛋白表达明显上调 ;Caspase3活性明显增强。结论 :As2 O3 可通过Fas依赖性Caspase3激活而诱导K5 6 2 ADM细胞凋亡。     

榄香烯对人喉鳞癌细胞生长抑制与凋亡诱导作用

目的探讨榄香烯对人喉鳞癌细胞株HEp2细胞的生长抑制作用,以及对半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)活性的影响。方法采用四氮甲基唑蓝(MTT)法和流式细胞分析技术(FCM),研究榄香烯诱导人喉鳞癌细胞株HEp2细胞凋亡的作用;用比色法观察榄香烯诱导人喉鳞癌细胞株HEp2细胞凋亡时Caspase3活性的变化。结果榄香烯抑制HEp2细胞生长呈时间剂量依赖性,24hIC50值为69.297mg·L-1;榄香烯(60mg·L-1)和顺铂(3mg·L-1)联合用药可加强抑制作用;Caspase3活性在榄香烯作用12h达到最高,并随药物作用时间的延长而下降。结论榄香烯可诱导HEp2细胞凋亡,同时可引起Caspase3活性的改变。     

西罗莫司对鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的观察西罗莫司干预鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡的作用,以探讨西罗莫司用于治疗帕金森病的可能性及机制。方法 PC12细胞处理分为正常对照组、鱼藤酮50nmol.L-1组和西罗莫司25,50,100和200μg.L-1组。PC12细胞加入西罗莫司25,50,100和200μg.L-1预处理12h后,再加入鱼藤酮50nmol.L-1作用24h。采用4′,6-二脒-2-苯基吲哚(DAPI)免疫荧光实验检测细胞凋亡形态变化;AnnexinⅤ-FITC/PI染色法检测细胞凋亡率;罗丹明123检测线粒体膜电位;吖啶橙荧光染色法检测自吞噬体形成;Western印迹法检测胱天蛋白酶3和微管相关蛋白轻链3(LC3)表达。结果与鱼藤酮模型组比较,西罗莫司50,100和200μg.L-1组细胞凋亡率分别降低了20.6%,35.4%和40.2%(P<0.05,P<0.01);西罗莫司25,50,100和200μg.L-1组可以升高鱼藤酮导致的线粒体膜电位降低,分别为1.8,2.2,2.4和3.2倍。西罗莫司100μg.L-1预处理促使LC3由Ⅰ型向Ⅱ型转变,胱天蛋白酶3的20ku活性片段降低16.2%。结论西罗莫司通过增强失调线粒体的自吞噬降解作用,降低线粒体相关的促凋亡因子的释放和激活,进而抑制依赖胱天蛋白酶凋亡途径的激活而对鱼藤酮诱导的细胞凋亡具有保护作用,提示西罗莫司有治疗帕金森病的可能。     

二氨基肉豆蔻酸活化胱天蛋白酶依赖的线粒体途径诱导HL-60细胞凋亡

目的探讨二氨基肉豆蔻酸(D-82)诱导HL-60细胞凋亡的作用及与线粒体途径活化的关系。方法 D-821.5,3和6mg·L-1处理HL-60细胞6h,或D-826mg·L-1处理细胞6,12及24h后,锥虫蓝染色法检测细胞存活率;AO-EB染色分析凋亡率;琼脂糖凝胶电泳检测DNA损伤;罗丹明123染色流式细胞术检测线粒体膜电位变化;比色法测定胱天蛋白酶3和胱天蛋白酶9活性;Western印迹法检测胞浆和线粒体细胞色素c(Cytc)及细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 D-82的浓度和作用时间与HL-60细胞存活率密切相关,相关系数分别为0.938(P<0.01)和0.809(P<0.05)。D-821.5,3和6mg·L-1处理HL-60细胞6h,细胞存活率分别为(81±11)%,(70±9)%和(56±11)%;D-826mg·L-1作用HL-60细胞12和24h,存活率降至(36±7)%和(24±9)%。D-821.5,3和6mg·L-1诱导HL-60细胞出现凋亡形态学改变及DNA阶梯状条带,凋亡率从正常对照组的(2±2)%上升至(18±4)%,(40±11)%和(75±11)%(n=3,P<0.05)。D-823和6mg·L-1组,罗丹明平均荧光强度由正常对照组的24±5降至20±5及12±4(n=3,P<0.05),说明线粒体膜电位降低;D-823和6mg·L-1组胱天蛋白酶3活性分别增加39%和125%,胱天蛋白酶9活性分别增加61%和145%(P<0.05,P<0.01)。与正常对照组比,D-823和6mg·L-1组线粒体Cytc表达分别降低22%和38%(P<0.05,P<0.01),胞浆中Cytc表达分别升高22%和65%(P<0.05);Bax表达分别增加45%和116%(P<0.05,P<0.01),Bcl-2表达分别减少27%和40%(P<0.01)。结论 D-82通过活化胱天蛋白酶依赖的线粒体途径诱导HL-60细胞凋亡。     

Nachweis einiger Heilmittel in der Kniegelenksynovialflüssigkeit

Zusammenfassung Mittels Gaschromatographie und Dünschichtchromatographie wiesen die Autoren 11 Substanzen nach, welche durch Injektion oder nach Verabreichung per os in die Kniegelenksynovialflüssigkeit eindrangen. In ihrer Aufstellung konnten sie eine direkte Beziehung zwischen Struktur sowie chemischphysikalischen Eigenschaften der Substanz und ihrer Fähigkeit, aus dem Blut in die Kniegelenksynovialflüssigkeit einzudringen, nicht nachweisen, außer der Tatsache, daß Substanzen mit starker Affinität zu Eiweißstoffen erst in höheren Dosen nachweisbar waren.     

Synthesis,Cytotoxicity and Antileishmanial Activity of Some N-(2-(indol-3-yl)ethyl)-7-chloroquinolin-4-amines

We report herein the condensation of 4,7-dichloroquinoline (1) with tryptamine (2) and D-tryptophan methyl ester (3) . Hydrolysis of the methyl ester adduct (5) yielded the free acid (6) . The compounds were evaluated in vitro for activity against four different species of Leishmania promastigote forms and for cytotoxic activity against Kb and Vero cells. Compound (5) showed good activity against the Leishmania species tested, while all three compounds displayed moderate activity in both Kb and Vero cells.     

Emerging drugs for epilepsy

Epilepsy affects ≤ 1% of the world's population. Antiepileptic drugs (AEDs) are the mainstay of treatment, although more than a third of patients are not rendered seizure free with existing medications. Uncontrolled epilepsy is associated with increased mortality and physical injuries, and a range of psychosocial morbidities, posing a substantial economic burden on individuals and society. Limitations of the present AEDs include suboptimal efficacy and their association with a host of adverse reactions. Continued efforts are being made in drug development to overcome these shortcomings employing a range of strategies, including modification of the structure of existing drugs, targeting novel molecular substrates and non-mechanism-based drug screening of compounds in traditional and newer animal models. This article reviews the need for new treatments and discusses some of the emerging compounds that have entered clinical development. The ultimate goal is to develop novel agents that can prevent the occurrence of seizures and the progression of epilepsy in at risk individuals.     

盐酸达泊西汀中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯及甲磺酸异丙酯的顶空毛细管GC-ECD法测定

建立了衍生化顶空毛细管气相色谱-电子捕获检测器(ECD)法测定盐酸达泊西汀中的甲磺酸甲酯(MMS)、甲磺酸乙酯(EMS)和甲磺酸异丙酯(IMS).应用碘化钠衍生技术,使用PW-5毛细管柱,载气为氮气,ECD检测,程序升温.MMS、EMS和IMS分别在0.03～0.30、0.05～0.50和0.05～0.50 μg/ml浓度范围内线性关系良好,平均回收率分别为63.5％、100.3％和96.2％,最低检测限分别为0.30、0.50和0.50 ng/ml.     

Lung disease and PKCs

The lung offers a rich opportunity for development of therapeutic strategies focused on isozymes of protein kinase C (PKCs). PKCs are important in many cellular responses in the lung, and existing therapies for pulmonary disorders are inadequate. The lung poses unique challenges as it interfaces with air and blood, contains a pulmonary and systemic circulation, and consists of many cell types. Key structures are bronchial and pulmonary vessels, branching airways, and distal air sacs defined by alveolar walls containing capillaries and interstitial space. The cellular composition of each vessel, airway, and alveolar wall is heterogeneous. Injurious environmental stimuli signal through PKCs and cause a variety of disorders. Edema formation and pulmonary hypertension (PHTN) result from derangements in endothelial, smooth muscle (SM), and/or adventitial fibroblast cell phenotype. Asthma, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), and lung cancer are characterized by distinctive pathological changes in airway epithelial, SM, and mucous-generating cells. Acute and chronic pneumonitis and fibrosis occur in the alveolar space and interstitium with type 2 pneumocytes and interstitial fibroblasts/myofibroblasts playing a prominent role. At each site, inflammatory, immune, and vascular progenitor cells contribute to the injury and repair process. Many strategies have been used to investigate PKCs in lung injury. Isolated organ preparations and whole animal studies are powerful approaches especially when genetically engineered mice are used. More analysis of PKC isozymes in normal and diseased human lung tissue and cells is needed to complement this work. Since opposing or counter-regulatory effects of selected PKCs in the same cell or tissue have been found, it may be desirable to target more than one PKC isozyme and potentially in different directions. Because multiple signaling pathways contribute to the key cellular responses important in lung biology, therapeutic strategies targeting PKCs may be more effective if combined with inhibitors of other pathways for additive or synergistic effect. Mechanisms that regulate PKC activity, including phosphorylation and interaction with isozyme-specific binding proteins, are also potential therapeutic targets. Key isotypes of PKC involved in lung pathophysiology are summarized and current and evolving therapeutic approaches to target them are identified.