硒酸酯多糖诱导白血病多药耐药细胞凋亡的作用机制

目的:观察硒酸酯多糖(Kappaselenocarrageenan,KSC)对K562ADM耐药细胞的诱导凋亡效应,并探讨其作用机制。方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法、WrightGiemsa染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术(Flowcytometry,FCM)观察K562ADM细胞凋亡;FCM测定K562ADM细胞Fas、P53和Bcl2蛋白表达水平;RTPCR检测Caspase3mRNA的表达。结果:50～500mg·L-1KSC抑制K562ADM细胞增殖,并诱导K562ADM细胞凋亡,细胞出现呈典型凋亡形态改变,DNA电泳可见DNA梯状条带(DNAladder);FCM分析出现亚G1期细胞群,S期细胞比例增高。Fas蛋白表达上调,Bcl2蛋白表达下调,Caspase3mRNA表达显著增强,但P53蛋白表达无明显改变。结论:KSC通过Fas依赖性Caspase3激活途径诱导K562ADM细胞凋亡。     

维生素E琥珀酸酯诱导耐药白血病K562／ADM细胞凋亡

目的：研究维生素E琥珀酸酯(Vitamin E succinate，VES）对多药耐药白血病K562／ADM细胞的诱导凋亡作用及分子机制。方珐：以体外培养的K562／ADM细胞为研究对象，采用噻唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）比色法检测细胞增殖活性，Wright-Giemsa染色、DNA凝胶电泳和流式细胞术(Flow cytometry，FCM）检测细胞凋亡；FCM测定细胞Fas，Bcl-2、P53蛋白表达水平。结果：VES可显著抑制K562／ADM细胞的生长及增殖；光镜下可见K562／ADM细胞呈典型凋亡的形态学改变；DNA凝胶电沫显示典型的凋亡DNA梯形条带，FCM细胞周期分析显示G1期阻滞，亚G1期细胞比例增高；Fas蛋白表达明显上调，Bcl-2蛋白表达下调，p53蛋白表达无明显变化。结论：VES可诱导K562／ADM细胞凋亡，作用机制可能与其上调Fas表达和下调Bcl-2表达有关。     

青蒿琥酯诱导人早幼粒白血病细胞HL60凋亡的线粒体机制

目的 :探讨青蒿琥酯 (artesunate ,Art)诱导人急性早幼粒白血病细胞HL6 0凋亡的线粒体机制。方法 :用Art处理HL6 0细胞 ,通过MTT比色法检测细胞增殖抑制的效果 ;透射电镜、DNA凝胶电泳技术观察细胞的凋亡 ;流式细胞术 (flowcytometry ,FCM)进行细胞周期分析和线粒体膜电位 (mitochon drialmembranepotential ,MMP)水平的检测 ;比色法检测半胱 天冬氨酸蛋白酶 3(cysteinecontainingas partate,Caspase 3)活性。结果 :Art呈浓度和时间依赖性的抑制HL6 0细胞的增殖 (P <0 .0 5 )。Art诱导后HL6 0细胞出现典型的凋亡形态学变化和生化改变 ,G2 M期细胞比例增高 ,S期减少 ,凋亡率上升 (P <0 .0 5 ) ,线粒体膜电位降低 (P <0 .0 5 ) ,Caspase 3活性增强 (P <0 .0 5 )。结论 :Art可能通过线粒体 半胱 天冬氨酸蛋白酶 3特定途径诱导HL6 0细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导肿瘤细胞凋亡途径的研究

目的　探讨细胞线粒体跨膜电位 (Δψm)和半胱氨酶3(Caspase 3)在三氧化二砷 (As2 O3 )诱导肿瘤细胞凋亡过程中的作用。方法　以Namalwa、SGC790 1和Bcap37细胞为体外模型 ,流式细胞仪检测亚G1期细胞含量和细胞膜磷脂酰丝氨酸 (PS)外翻量等方法鉴定细胞凋亡 ;碘化丙啶 (PI) /Rhodamine(Rh12 3)双染色检测Δψm变化并观察了Caspase 3抑制剂DEVD CHO对As2 O3 诱导肿瘤细胞凋亡的影响。结果　As2 O3 诱导肿瘤细胞凋亡效应与其诱导细胞Δψm下降和Caspase 3活性升高相关 ,抑制Caspase 3活性后As2 O3 使细胞选择坏死通路。结论　As2 O3 可能通过诱导细胞Δψm下降激活Caspase 3并最终使肿瘤细胞凋亡。     

As2O3诱导K562细胞凋亡过程中细胞表面电荷变化的研究

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3 )诱导K562 细胞凋亡时细胞表面电荷的变化 ,阐明As2 O3 诱导K562 细胞凋亡的可能机制 ,为As2 O3 在临床上的应用提供理论依据。方法 :应用细胞电泳仪检测As2 O3 诱导K562 细胞凋亡中细胞电泳率的变化。通过细胞增殖、活力检测 ,形态学观察 ,亚G1期细胞含量和DNA凝胶电泳等鉴定细胞凋亡。结果 :1.0～ 2 0 μmol·L-1As2 O3 作用于K562 细胞 ,在细胞形态、DNA凝胶电泳、FCM显示出典型的细胞凋亡特征之前 ,试验组细胞表面电荷已在 1.6h左右开始下降 ,6h内降低最明显 ,6h后虽有下降 ,但幅度明显减弱。与对照组比较 ,低于 1.0 μmol·L-1的As2 O3 对细胞表面电荷影响不大。结论 :细胞表面电荷的下降是K562 细胞凋亡的早期事件。细胞表面电荷的下降有一定的时间范围 ,超过此范围 ,细胞表面电荷下降趋向无限大。     

多柔比星温热化疗诱导A549细胞凋亡实验研究

目的 研究多柔比星(DRB)温热化疗诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的效果，探讨其作用机制。方法对照组A549细胞不经处理，37 ℃培养箱中常规培养；化疗组A549细胞分为4组，DRB 浓度分别为0.5，1.0，2.0和4.0 μg·mL 1，均37 ℃培养箱中常规培养；热疗组A549细胞采用水浴加温法，温度设定为42.5 ℃，加热时间30 min，然后在37 ℃孵箱中培养；DRB温热化疗组（热疗+化疗）DRB浓度同化疗组，处理方法同热疗组。四氮甲唑蓝（MTT）比色法测定各组细胞抑制率， 流式细胞仪(FCM法)测定细胞内DRB荧光强度及 Fas蛋白水平变化，比色法检测细胞内Caspase 3活性变化。结果DRB温热化疗可明显增强DRB对A549细胞的抑制作用并诱导细胞凋亡;FCM分析显示，化疗组、DRB温热化疗组细胞内DRB浓度升高，且呈浓度依赖性;DRB温热化疗组细胞内DRB浓度高于化疗组（P＜0.01）。细胞周期分析显示，化疗组和DRB温热化疗组G1期细胞所占比例降低，S期细胞比例增高，细胞被阻滞于S期。化疗组和DRB温热化疗组Fas蛋白表达上调，Caspase 3活性增强。结论DRB温热化疗可增加A549细胞凋亡，其机制可能是通过激活Fas依赖的Caspase 3诱导凋亡起作用。     

半胱氨酸酶3和Bcl-2在三氧化二砷诱导Namalwa细胞凋亡过程中的表达及意义

目的:了解半胱氨酸酶3(Caspase 3)和Bcl-2在三氧化二砷(As2O3)诱导Burkitt’s淋巴瘤细胞系Namalwa凋亡效应中的作用。方法:琼脂糖凝胶电泳法和Annexin V/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡。应用Caspase 3抑制剂DEVD-CHO和As2O3共同处理细胞,检测Caspase 3和Bcl-2蛋白表达水平的变化。结果:As2O3使Namalwa细胞Caspase 3表达增加,Bcl-2蛋白表达降低。DEVD-CHO能抑制细胞凋亡,但不影响As2O3诱导Bcl-2蛋白表达水平降低的效应。结论:Caspase 3激活可能是As2O3诱导Namalwa细胞凋亡的机制之一。     

三氧化二砷诱导K562/ADM耐药细胞凋亡中活性氧的作用

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）诱导K562／ADM细胞凋亡中活性氧（ROS）的作用和其与耐药基因radr1及其编码的P-糖蛋白（P—gP）表达的关系。方法：应用噻唑蓝（MTT）比色法检测K562／ADM细胞增殖活性；Annexin V／PI染色法检测细胞凋亡；RT-P（鼠检测mdr1基因mRNA的表达；流式细胞术测定P-gP表达、ROS活性和细胞内阿霉素（ADM）含量。结果：As2O3显著抑制K562／ADM细胞的增殖，Annexin V／PI双染检测显示凋亡细胞明显增加：ROS活性明显下降；mdr1 mRNA和P-gP表达明显降低，P-gP功能受抑，细胞内ADM含量显著增高。结论：As2O3抑制K562／ADM耐药细胞的增殖活性和促进其凋亡，其机制可能为通过降低细胞ROS水平、抑制radr1/P-gp的表达和功能，进而逆转mdr1/P-gP介导的多药耐药和凋亡抑制。     

黄芩苷元选择性诱导人白血病K562细胞凋亡

目的研究黄芩苷元诱导人白血病细胞凋亡的作用及机理。方法MTT法测细胞毒活性，Hoechst 33258荧光染色法观察凋亡小体形成，流式细胞仪Annexin V FITC-PI法检测细胞凋亡发生率，PI染色法检测凋亡峰及细胞周期，同时流式细胞仪检测细胞Bcl-2，Fas和Caspase 3蛋白表达情况。结果黄芩苷元能选择性抑制人白血病K562细胞生长且呈浓度依赖关系，并能诱导细胞凋亡，细胞增殖被阻滞于S期；同时细胞Fas和Caspase 3蛋白表达增高，而Bcl-2蛋白表达不变。结论黄芩苷元能激活Caspase 3蛋白表达，诱导人白血病K562细胞凋亡且呈时效量效关系，此作用与Fas蛋白表达上调有关，与Bcl-2蛋白表达无关。     

锰超氧化物歧化酶模拟化合物通过Fas途径诱导白血病K562细胞凋亡

目的：探讨锰超氧化物歧化酶模拟化合物（mi mics of manganese superoxide dismutase,MnSODm）对人白血病K562细胞的凋亡诱导效应及作用机制。方法：应用MTT比色法、An-nexin V/PI双标记和细胞形态学法观察细胞凋亡;流式细胞术（FCM）测定Fas蛋白表达水平;RT-PCR检测Caspase-3mRNA的表达水平,比色法测定Caspase-3活性变化。结果：MnSODm作用后K562细胞的增殖受到抑制,Annexin V/PI染色显示凋亡细胞明显增多,透射电镜观察呈现典型的凋亡形态改变。同时,Fas蛋白表达水平显著增高,Caspase-3mRNA表达水平明显升高,活性显著增强。结论：MnSODm可能通过Fas途径诱导白血病K562细胞凋亡。     

Effect and mechanism of nociceptin/orphanin FQ reversing multi-drug resistance in K562/ADM cell

OBJECTIVE: To investigate the effect and mechanism of nociceptin/orphanin FQ (OFQ) reversing multi-drug resistance of K562/ADM cells in vitro. METHODS: MTT assay, Wright staining, flow cytometry, transmission electron microscope and gel electrophoresis were used to evaluate the effect and mechanism of OFQ in reversing multi-drug resistance of K562/ADM cells. RESULTS: OFQ could time-dependently reverse the ADM resistance of K562/ADM cell. After treatment with OFQ (1 x 10(-7) mol x L(-1)), K562/ADM cells were cultured for 24, 48 and 72 h. The reversal index (RI) was 1.33, 1.42 and 1.53, respectively. Furthermore, OFQ significantly increased the intracellular accumulation of ADM in K562/ADM cells and percentage apoptosis in K562/ADM cells. OFQ down-regulated the level of P-gp time-dependently, while the level of Fas and FasL were up-regulated. There were evidently significant differences compared with the control (P < 0.01). After treating K562/ADM cells with OFQ (1 x 10(-7) mol x L(-1)) and ADM (20 microg x ml(-1)) for 48 hours, the cells showed apoptotic nuclear fragmentation, which was characterized by the appearance of a DNA ladder pattern in genomic DNA gel electrophoresis. CONCLUSION: OFQ can reverse the ADM resistance of K562/ADM cells. The mechanism involves OFQ up-regulating the expression of Fas/FasL, down-regulating the level of P-gp, and decreasing the intracellular level of calcium in K562/ADM cells.     

白藜芦醇诱导K562细胞凋亡过程中活性氧水平的改变

目的：探讨白藜芦醇对K562细胞的凋亡诱导效应和对K562细胞内活性氧水平的影响。方法：应用噻唑蓝(MTr)比色法、光镜、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡；FCM测定细胞内活性氧(ROS)水平。结果：白藜芦醇显著抑制K562细胞增殖，并呈现典型的凋亡形态学改变；DNA电泳可见梯状条带出现；FCM分析显示S期细胞数明显增多，出现S／G，期阻滞，ROS水平升高。结论：白藜芦醇诱导K562细胞凋亡与细胞内活性氧水平升高有关。     

4-［4″-(2″, 2″, 6″, 6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基］-4′-去甲表鬼臼毒素对K562/ADM细胞的抑制作用

目的 比较4-［4″-(2″, 2″, 6″, 6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基］-4′-去甲表鬼臼毒素（GP-7）对多药耐药人慢性粒细胞白血病K562的多柔比星耐药株细胞（K562/ADM细胞）的抑制作用是否优于依托泊苷。方法 以依托泊苷和K562细胞为对照，用不同浓度GP-7处理K562/ADM细胞不同时间，MTT比色法测定细胞增殖，流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡率，普通光学显微镜观察细胞凋亡形态，琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA凋亡性降解。结果 8～128 mol·L^-1 GP-7处理48 h或64 μmol·L^-1 GP-7处理24～72 h，GP-7对K562/ADM细胞的增殖抑制呈剂量依赖性（r=0.947，P＜0.05)和时间依赖性(r=0.999，P＜0.01)。GP-7及依托泊苷对K562/ADM的IC₅₀分别为(45.9±1.8)及(68.7±4.6)μmol·L^-1；64 μmol·L^-1 GP-7作用48 h可使G₂/M期细胞明显增多，相同情况下依托泊苷则使S期细胞明显增多；GP-7可引起K562/ADM和K562细胞凋亡，但其引起的K562/ADM和K562细胞凋亡率与依托泊苷无明显差异；GP-7可引起K562/ADM和K562细胞典型的凋亡形态学变化和DNA凋亡性降解，但GP-7引起的K562/ADM细胞DNA凋亡性降解弱于K562细胞；128及256 μmol·L^-1 GP-7或依托泊苷处理K562/ADM和K562细胞48 h，GP-7诱导DNA凋亡性降解的作用强于依托泊苷，但32和64 μmol·L^-1时作用则相反。结论 GP-7可抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的增殖,诱导细胞凋亡。GP-7抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的作用优于依托泊苷。     

4-[4″-(2″,2″,6″,6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基]-4′-去甲表鬼臼毒素对K562/ADM细胞的抑制作用

目的比较4-[4″-(2″,2″,6″,6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基]-4′-去甲表鬼臼毒素(GP-7)对多药耐药人慢性粒细胞白血病K562的多柔比星耐药株细胞(K562/ADM细胞)的抑制作用是否优于依托泊苷。方法以依托泊苷和K562细胞为对照,用不同浓度GP-7处理K562/ADM细胞不同时间,MTT比色法测定细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡率,普通光学显微镜观察细胞凋亡形态,琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA凋亡性降解。结果8~128mol.L-1GP-7处理48h或64μmol.L-1GP-7处理24~72h,GP-7对K562/ADM细胞的增殖抑制呈剂量依赖性(r=0.947,P<0.05)和时间依赖性(r=0.999,P<0.01)。GP-7及依托泊苷对K562/ADM的IC50分别为(45.9±1.8)及(68.7±4.6)μmol.L-1;64μmol.L-1GP-7作用48h可使G2/M期细胞明显增多,相同情况下依托泊苷则使S期细胞明显增多;GP-7可引起K562/ADM和K562细胞凋亡,但其引起的K562/ADM和K562细胞凋亡率与依托泊苷无明显差异;GP-7可引起K562/ADM和K562细胞典型的凋亡形态学变化和DNA凋亡性降解,但GP-7引起的K562/ADM细胞DNA凋亡性降解弱于K562细胞;128及256μmol.L-1GP-7或依托泊苷处理K562/ADM和K562细胞48h,GP-7诱导DNA凋亡性降解的作用强于依托泊苷,但32和64μmol.L-1时作用则相反。结论GP-7可抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的增殖,诱导细胞凋亡。GP-7抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的作用优于依托泊苷。     

联合应用化疗药物对三氧化二砷耐药白血病细胞的毒性实验研究

目的:探讨化疗药物联合应用对三氧化二砷(As2O3)耐药白血病细胞(K562/AS2)的毒性作用。方法:细胞毒实验采用MTT法,二药合用时细胞毒性作用采用ChouTalalay联合指数法分析,细胞表面P糖蛋白(Pgp)和细胞内柔红霉素(DNR)浓度测定采用流式细胞术测定。结果:K562/AS2细胞对三氧化二砷、柔红霉素、鬼臼乙叉苷(VP16)、三尖杉酯碱(H)、米托蒽醌(NVT)和阿糖胞苷(AraC)的耐药倍数分别为7.4、2.9、3.8、3.6、2.8和1.1。K562细胞和K562/AS2细胞的细胞表面Pgp或细胞内任意荧光强度无显著的统计学意义(P>0.05)。As2O3与DNR、VP16、H或NVT联合应用时,对K562、K562/AS2和Pgp表达的白血病细胞(K562/A02)细胞的联合指数均大于1。异搏定与DNR联合应用时,对K562和K562/AS2细胞的联合指数均大于1,但是对K562/A02细胞的联合指数均小于1。结论:K562/AS2细胞对As2O3、DNR、VP16和NVT耐药,其机制与Pgp表达无关。异搏定联合应用DNR可以逆转K562/A02对DNR的耐药性,不能逆转DNR对As2O3耐药细胞的耐药性。As2O3与DN、VP16、H和NVT联合应用时,对K562、K562/AS2和K562/A02细胞的毒性均为拮抗作用。     

孤啡肽逆转人白血病K562/ADM细胞耐药性的研究

目的 探讨孤啡肽对人白血病K562/ADM细胞对阿霉素耐药性的逆转作用.方法 测定孤啡肽的细胞毒性及其对K562/ADM细胞药物敏感性的影响,计算耐药逆转倍数.瑞士染色观察药物作用后K562/ADM细胞形态的改变;流式细胞仪检测阿霉素单用或与孤啡肽联用K562/ADM细胞凋亡百分率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察孤啡肽与阿霉素联用后K562/ADM细胞内DNA的损伤程度.结果 非细胞毒性剂量的孤啡肽(10-7mol/L)作用于K562/ADM细胞时,对阿霉素耐药起到了部分逆转作用,使K562/ADM细胞的IC50由原来的(46.99±0.25)μg/ml降低至(23.11±0.29)μg/ml,其逆转倍数为2.03倍;孤啡肽(10-7mol/L)和阿霉素(20μg/ml)联合处理K562/ADM细胞48h,K562/ADM细胞呈典型的凋亡形态改变;细胞的凋亡率达到(18.73±3.90)%,明显高于两种药物在相同条件下单独作用的效果,P＜0.01;结论 孤啡肽能诱导K562/ADM细胞凋亡,从而能逆转K562/ADM细胞的耐药性,提高阿霉素的敏感性.     

Anti-leukemia activities of Lup-28-al-20(29)-en-3-one,a lupane triterpene

The cytotoxicities of 11 lupane series triterpenes against 3 human leukemias, 2 melanomas, 2 neuroblastomas and normal fibroblast cells were examined. Lupane triterpenes with a carbonyl group at C-17 (7-11) showed inhibitory effects on leukemia, melanoma and neuroblastoma cell growth. Lup-28-al-20(29)-en-3-one (8) markedly inhibited the cell growth of 3 leukemias to a greater extent than the other human cancers and normal lung fibroblast cells. The cytotoxicity profiles of 8 against human cancer cells showed that its cytotoxic effect against 3 lung cancer cell lines was strong and the cytotoxic effects against osteosarcoma, breast cancer and urinary bladder cancer cells were very weak. The morphological observations of leukemia nuclei and the gel electrophoresis analysis of DNA extracted from 8-treated leukemia cells revealed that 8 induced leukemia cell apoptosis. Furthermore, we investigated the cytotoxic effects of 8 on adriamycin (ADM)- and vincristine (VCR)-resistant K562 (K562/ADM and K562/VCR) cells. K562/ADM and K562/VCR cells showed greater resistance toward ADM and VCR when compared to parent K562 cells. However, 8 inhibited the drug-resistant K562 cell growth to the same extent as K562 cells by the induction of apoptosis.