药物基因组学及临床应用进展

目的:伴随着精准医学概念的提出,药物基因组学与遗传学的发展进入一个新的机遇期,然而如何将实验成果转化为临床实际应用仍是当前亟待解决的问题。笔者探讨药物基因组学在临床应用中面临的挑战,为全面推行药物基因组学指导的个体化用药提供参考。方法:通过检索与查阅万方、中国知网、PubMed和FDA官网等数据库中与药物基因组学有关的文献,综述药物基因组学在个体化医疗中的应用现状。结果:目前药物基因组学在临床上的应用并没有得到全面推广,原因可能涉及具有显著临床意义的基因标志物发现的困难、不稳定的经济学评价结果以及伦理和教育培训等方面。结论:未来基因导向的个体化治疗能实际有效地应用到临床,仍需要政府及各相关社会团体、研究协会制定出合适的研究和教育政策。     

医科院校“基因导向”个体化用药教学现状经验及发展策略

目的探讨目前医科院校"基因导向"个体化用药的教学现状及发展策略。方法总结已有教学经验,探讨个体化用药教育现状;通过分析需要学习个体化用药知识的不同人群的特点,提出可行、可发展的普及个体化用药知识的教学策略。结果医科院校的必选课教育、高水平国际、国内专题会议的召开,以及针对在职人员的短期培训班都是在医务工作者中普及个体化用药知识的有效手段。结论随着遗传药理学研究成果向临床的不断转化,需要医务工作人员在医学实践中灵活掌握个体化用药知识,以上几种方法可以在更大范围人群中普及个体化用药知识,有利于医务工作人员在临床实践中合理用药。     

治疗药物监测与药物基因组学

目的将药物基因组学应用到临床合理用药,为临床个体化给药提供依据。方法查阅文献,总结治疗药物监测在临床实践中发现的问题,并阐述药物基因组学等学科的发展与特点。结果基因多态性是药物治疗效果因人而异的最重要因素。通过药物基因组学研究,实现临床个体化药物治疗,是治疗药物浓度监测的进一步延伸和充实。药物基因组学应用到临床合理用药,弥补了以往只根据血药浓度进行个体化给药的不足,也为以前无法解释的药效学现象找到了答案。结论将来的临床药物治疗模式应以遗传药理学、药物基因组学为导向,结合血药浓度监测,来指导特定药物对特定患者的合理使用。     

基因多态性与合理用药的帕累托图分析

目的 根据药物基因多态性原理,参与并指导临床合理用药,提高利用率,降低用药风险.方法 抽查三明市2015年2月1日～2016年2月1日第一医院821份内科系统住院病历,以及医务科配合药剂科发放404份个体化给药认知度问卷调查表,对其影响临床个体化给药因素进行帕累托图分析.结果 404份药物基因多态性与临床个体化给药调查问卷帕累托图显示:药物基因多态性药物目录、临床个体化给药方案制定、药物基因多态性代谢酶为影响临床个体化给药的主要因素.结论 同一药物对于同一疾病作用于不同患者由于存在基因代谢酶的差异,临床需实施个体化给药.     

临床药师参与伏立康唑治疗方案调整1例并文献复习

目的 探讨临床药师参与1例使用伏立康唑治疗肺部真菌感染患者的治疗方案调整,为复杂患者的个体化用药提供信息支持。方法 临床药师利用治疗药物监测及基因检测作为技术支持,药学指南及文献作为信息支持,为临床医师提供参考意见,改善治疗效果。结果 治疗过程中,临床药师根据患者情况提出用药调整建议,与医师共同制定个体化治疗方案并随时调整,节省了医疗费用,提高了患者的依从性。结论 临床工作中,部分患者存在治疗疗程长、联合用药复杂的问题,治疗药物监测、基因检测等技术的应用,为临床个体化用药提供了技术保障,而临床药学人员的参与,也为个体化用药的逐步完善提供了一定的支持。     

浅谈基因多态性与药物不良反应

药物相关基因多态性是引起药物不良反应个体差异的重要原因。进行药物相关基因多态性与药物不良反应的相关性研究有助于根据个体基因确定临床给药方案,最大程度地提高药物疗效,减少不良反应发生率,实现基因导向个体化药物治疗。本文综述基因多态性与药物不良反应相关性研究,为个体化药物治疗提供指导。     

个体化用药相关基因检测在临床应用的影响因素及思考

目的：探究某院个体化用药相关基因检测技术在临床应用和推广的影响因素及相应的解决方案。方法：通过对某院药物相关基因检测在临床的实际应用、检测费用和患者对该检测接受程度三方面的分析,提出切实有效的解决方案。结果：各种因素不同程度的影响着药物相关基因检测技术在临床的应用与推广。结论：医院药师需深入开展药物基因检测工作,在实践中突破限制因素,规划正确的工作方向,引领药物基因检测技术的发展,实现个体化用药。     

基因多态性与药物不良反应发生风险的相关性及其临床证据

药物不良反应(ADR)是临床用药中常常出现的难题,不但影响药效,还严重威胁患者的生命安全。随着药物基因组学的快速发展,个体间的基因序列差异与ADR之间的相关性不断被证实,但是缺乏全面的归纳和总结。基于遗传药理学和药物基因组学知识库(PharmGKB)和临床药物遗传学实施联盟(CPIC)、美国食品和药品管理局(FDA)等权威组织发布的药物基因组学相关指南,综述近年来高证据等级的基因多态性在预测和避免ADR中的最新进展和重要意义,以期为基因导向的个体化给药提供参考。     

精神科药物治疗的基因组学研究进展

药物基因组学通过候选基因的多态性预测药物疗效，其研究基础是确定与药物作用和疾病病理生理机制相关的候选基因多态性，并评价药物疗效。精神科的药物基因组学目前主要关注多巴胺和5-羟色胺受体基因的多态性。目前尚不能根据基因型进行个体化药物治疗，但用药物基因组学的基本原理，可能会对临床用药产生巨大影响。     

临床药师基于基因多态性和药物相互作用参与华法林个体化抗凝的临床实践

目的：探讨临床药师参与华法林个体化抗凝的临床实践。方法：参与1例INR频繁波动的华法林个体化给药的过程。结果：临床药师结合基因检测结果与药物相互作用原理,给出合并用药方案调整的建议,并对患者进行华法林用药教育。结论：基因多态性只是华法林个体化治疗过程中的部分影响因素,将其与环境因素有机结合起来,才能真正做到华法林的个体化抗凝治疗,提高抗凝治疗的成功率。     

Ad-VEGF121和Ad-VEGF165重组腺病毒的构建和制备

目的:以pAdEasy-1缺陷性腺病毒系统为载体构建用于实验动物模型基因治疗的Ad-VEGF121和Ad-VEGF165重组腺病毒。方法:采用RT-PCR方法从人心肌组织中扩增获得VEGF121、VEGF165cDNA片段,分别插入pUCm-T载体构成pUC-VEGFs;限制性内切酶SalⅠ、KpnⅠ切下目的基因片段,插入pAdTrack-CMV载体相应的多克隆位点构成pAdTrack-CMV-VEGFs。电转法将被PmeⅠ切成线性的pAdTrack-CMV-VEGFs转入E coli BJ5183,与其中的pAdEasy-1同源重组成pAdEasy-VEGFs。阳离子脂质体法将被PacⅠ线性化的重组子转染293T细胞进行腺病毒包装。转染后7～11d可在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白(GFP)呈彗星状,收集细胞反复冻融获得含重组腺病毒的上清液。感染293T细胞3～4次,待细胞出现细胞病变效应(CPE)时收获腺病毒(Ad-VEGFs),并用CsCl密度梯度超速离心进行纯化。结果:重组腺病毒在电镜下呈多面体,形态完整;Ad-VEGF121和Ad-VEGF165病毒滴度分别达到1.155×1012和1.281 5×1012 V.P/mL。结论:利用pAdEasy-1缺陷性腺病毒系统构建携带目的基因的重组腺病毒方法较简便,易掌握。获得的重组腺病毒纯度高、滴度高,适用于实验动物模型和体外培养细胞的基因治疗。     

c-myc靶向siRNA真核表达载体的构建和鉴定

目的：设计构建重组体为转染肿瘤细胞，观察癌基因的沉默效果，为探索肿瘤基因治疗的新途径打好基础。方法：以c-myc为靶基因，以pEGFP-C1／U6质粒为载体，设计构建重组体，根据c-myc癌基因cDNA序列，设计有小发夹结构的3条寡核苷酸序列，克隆到空载体pEGFP-C1／U6中，转化DHSa菌株，提取质粒，进行酶切鉴定和测序分析。结果：经酶切鉴定筛出的重组体测序结果与目的序列相同，重组载体构建成功。结论：利用RNAi技术可成功构建小干扰RNA重组体。     

The novelUGT1 gene complex links bilirubin,xenobiotics, and therapeutic drug metabolism by encoding UDP-glucuronosyltransferase isozymes with a common carboxyl terminus

The UDP-glucuronosyltransferase system (transferase) plays an important role in the pharmacokinetics of clearance of endogenous metabolites, therapeutic drugs, and xenobiotics. The human bilirubin and phenol transferases are encoded by the same gene complex which we designateUGT1. The gene arrangement indicates there are 6 exon 1s each with a promoter and each of which can predictably undergo differential splicing to the 4 common exons (2 through 5) to generate possibly 6 different mRNAs. The entire unique amino acid terminus of each isoform is encoded by an exon 1, and the common carboxyl terminus is encoded by the 4 common exons. Evidence supports the existence of other exon is upstream of the currently described locus. The 13-bp deletion in exon 2 represents the most common defect, to date, in the Crigler-Najjar, Type I individuals. Different point mutations in the 4 common exons and in exon 1 ofUGT1A, however, also account for defective bilirubin transferase activity. The gene arrangement, in conjunction with the toxicity data from the Gunn rat, leads to the prediction that detoxification of bilirubin, xenobiotics, and therapeutic drugs is linked to theUGT1 locus. The Crigler-Najjar syndromes are uncommon, but the Gilbert individuals are commonly represented in 6% of the population. It is expected that, similar to the deleterious mutations in the common region of theUGT1 locus in Crigler-Najjar, Type I individuals, there is a range of moderate to intermediate deleterious mutations in this region of the gene of at least some Gilbert's individuals. Linkages, therefore, at this locus could signal that these individuals are at risk for certain drug toxicities and/or idiosyncratic drug reactions.     

重组人甲状旁腺激素相关蛋白1-141序列的克隆和表达载体构建

目的：构建人甲状旁腺激素相关蛋白1-141（hPTHrP1—141）基因的表达载体。方法：提取人基因组DNA，PCR扩增PTHrP1—141基因，将其克隆入原核表达载体pQE-30Xa，构建重组表达载体pQE-30Xa／hPTHrP1—141。结果：重组载体pQE-30Xa／hPTHrP1-141经限制性核酸内切酶Pvu Ⅱ酶切鉴定，得到符合预期大小的核酸片段。结论：表达载体pQE-30Xa／hPTHrP1—141构建成功。     

人TIMP-2基因逆转录病毒重组体的构建及表达

目的：构建含人ＴＩＭＰ－２基因可调控逆转现毒重组体。方法：通过四步亚克隆将编码人组织金属蛋白酶抑制剂－２（ＴＩＭＰ－２）的基因片段从表达载体Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ中切下,定向插入经改良的逆转录病毒载体ｐＬ－ＭＴ上,以限制性内切酶鉴定插入方向是否正确。结果：结果：限制性内切酶谱分析与理论计算相等。结论：含人组织金属蛋白酶抑制剂ＴＩＭＰ－２基因可逆转录病毒重组体构建成功,为体外胶原代谢的基因调控研究提供     

河南食管癌高发区AGT Exon3与食管癌高易感性关系分析

目的 探讨AGTExon3与食管癌高易感性之间的关系.方法 聚合酶链反应(PCR)法,PCR基础上的限制性片段多态(PCR-RFLP)检测法及单链构象多态性分析(PCR-SSCP)检测法检测275例食管癌患者血标本抽提DNA,以正常血标本抽提DNA315例为对照.结果 AGT第三外显子(AGT Exon3)突变型携带者患ESCC的危险度比野生型携带者升高4.876倍(95%CI,3.248～7.319).将AGTExon3各基因型组合考查河南安阳地区人群患ESCC的结合危险度.在ESCC组,AGTExon30R值为0.1166,性别OR值为93.558,年龄为1.0703,具有统计学显著性意义.结论 AGTExon3突变型基因型显著增加河南安阳地区人群ESCC的易感性,而DNA损伤修复酶基因缺陷可能是导致食管癌变的重要途径.     

人血管内皮抑素腺相关病毒载体包装质粒0pSNAV-hEndostatin-CMV-EGFP的构建

目的:构建人血管内皮抑素(Endostatin)腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV)载体包装质粒pSNAV-hEndostatin-CMV-EGFP.方法:采用分子克隆技术,从pCD-sEndostatin质粒获得hEndostatin cDNA,并将PCR扩增产物插入至AAV包装质粒pSNAV上,构建pSNAV-hEndostatin-CMV-EGFP的AAV重组质粒,经PCR、酶切及测序鉴定.结果:经PCR、酶切鉴定及基因测序证实AAV包装质粒pSNAV-hEndostatin-CMV-EGFP构建成功.结论:构建的AAV包装质粒pSNAV-hEndostatin-CMV-EGFP可作为rAAV-hEndostatin-EGFP表达载体的包装质粒.     

R/S手性布洛芬的药代动力学相关遗传因素及其在新生儿的应用

布洛芬的药理作用与吲哚美辛相似,为前列腺素合成抑制药物,能关闭早产儿动脉导管。近年来采用布洛芬治疗早产儿动脉导管未闭(patent ductus arteriosus, PDA)疗效好且不良反应明显较少。目前,国内市场上只有口服剂型,并没有静脉注射剂型。布洛芬在其α-碳上存在一个手性中心,具有两种光学对映异构体。临床中常用的布洛芬是手性(S)-(+)布洛芬和(R)-(-)布洛芬的外消旋混合物。但是,不管是在体外还是体内,只有(S)-(+)布洛芬才具有药理活性。约65% 的(R)-(-)布洛芬能在肝脏中转化为(S)-(+)对映体结构。而在人体肠道中,由于存在酰基辅酶A硫酯,(R)-(-)布洛芬能被α-甲基酰基辅酶A消旋酶催化,从而发生单向的手性转化 。