土木香中纯化的五种倍半萜类化合物抑制肿瘤增殖活性的研究

目的检测土木香中纯化的五种倍半萜化合物抑制肿瘤增殖的活性,并探讨化合物结构与活性之间的关系。方法应用MTT法测定五种倍半萜类化合物对体外培养人肿瘤细胞增殖的影响;应用小鼠移植性肝癌模型测定了异土木香内酯的抗肿瘤活性。结果化合物1(异土木香内酯)对U251SP细胞、HLE细胞和MM1-CB细胞的增殖显示较强的抑制活性;化合物2～5对各种实验用肿瘤细胞的增殖不显示抑制活性;化合物1对移植性肿瘤(肝癌H22)具有明显的抑制作用,并呈现较好的剂量依赖关系。结论异土木香内酯具有较强的肿瘤抑制活性;化合物2～5对肿瘤细胞增殖抑制活性丧失可能由于A-环和B-环之间的键裂开,形成一个大10元环,改变了原来的构象所致。     

大蒜素联合替加氟对人HepG2肝癌细胞增殖的影响

目的观察大蒜素联合替加氟对人HepG2肝癌细胞增殖的影响。方法体外培养人HepG2肝癌细胞,细胞分为4组:对照组、大蒜素组、替加氟组和联合组,于培养24和48 h后,MTT法检测大蒜素、替加氟及两药联合对人HepG2肝癌细胞增殖的影响。结果大蒜素组和替加氟组的细胞增殖抑制率均明显高于对照组(P<0.05),联合组细胞增殖抑制率明显强于单独用药组(P<0.05)。结论大蒜素联合替加氟能够显著抑制人HepG2肝癌细胞的增殖。     

重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin的构建及其对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的构建重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin并探讨其对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同病毒感染复数（MOI）LV-hTERT-tumstatin感染肝癌细胞HepG2及正常肝细胞L02,荧光显微镜下观察转染情况,MTT法检测两种细胞增殖情况,流式细胞术检测两种细胞凋亡情况。结果重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin转染后在肝癌HepG2细胞中特异表达,在L02细胞中无表达。肝癌细胞HepG2的生长抑制率随MOI增加而逐渐增加,L02细胞生长无明显变化。慢病毒治疗组HepG2细胞凋亡率达（48.39±3.32）%,明显高于空白对照组（3.96±0.94）%（P〈0.05）,而对L02细胞作用不明显（P〉0.05）。结论重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin可靶向抑制肝癌HepG2细胞增殖和促进HepG2细胞凋亡。     

杠柳毒苷体外抑制肝癌细胞和乳腺癌细胞增殖的实验研究

目的探讨杠柳毒苷在体外对人乳腺癌MDA—MB．468细胞和人肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法MTT法观察杠柳毒苷对人乳腺癌MDA-MB-468细胞和人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞术观察杠柳毒苷对两种肿瘤细胞的细胞增殖周期作用。结果与对照组比较,杠柳毒苷能明显抑制两种肿瘤细胞的增殖,其抑制率与药物浓度和作用时间呈正相关。流式细胞仪检测发现,杠柳毒苷对乳腺癌MDA-MB-468细胞和肝癌HepG2细胞持续作用24h后,可以使GdG1期细胞增多,G2／M期细胞减少。结论杠柳毒苷具有抑制乳腺癌MDA-MB-468细胞和肝癌HepG2细胞增殖的作用,并可将乳腺癌MDA-MB-468细胞和肝癌HepG2细胞的细胞生长周期阻滞在G0／G1期。     

p21基因对肝癌细胞的生物学影响

目的探讨逆转录病毒介导的p21基因对肝癌Hep3B细胞的杀伤作用。方法通过脂质体将有p21基因的逆转录病毒载体MMLV-p21转染肝癌Hep3B细胞系,并用G418筛选。试验分为转p21基因的Hep3B-P21组及相同遗传背景及培养过程的两对照组肝癌Hep3B系细胞组、转Hep3B-MMLV组3组。采用RT-PCR检测实验组p21基因的表达;应用流式细胞计数分别分析3组细胞周期;MTT法检测细胞增殖并比较细胞抑制率。结果野生p21基因阻止Hep3B系细胞进入S期,停滞在G1期,Hep3B-P21组细胞增殖比两对照组明显受到抑制（P〈0.05）。结论逆转录病毒介导p21基因可有效抑制肝癌Hep3B系细胞的增殖并诱导肝癌细胞的凋亡。     

苦参碱对肝癌细胞增殖及其细胞自噬的影响

目的探索苦参碱对肝癌HepG2细胞增殖及其细胞自噬的影响,为临床探索有效的肝癌综合治疗方案提供实验依据。方法采用MTF法和流式细胞仪检测肝癌HepG2细胞增殖抑制率及其细胞周期的变化;荧光显微镜定性观察肝癌细胞自噬情况。结果苦参碱抑制肝癌HepG2细胞的增殖,且随苦参碱浓度的增加和时间的延长,肝癌HepG2细胞的抑制率增加（P〈0．05）。流式细胞仪检测示：苦参碱组细胞周期中G1期细胞增多,S期细胞减少（P〈0．05）。荧光显微镜检测：肝癌HepG2细胞质中有自噬体形成,且随苦参碱浓度的增加,自噬体越来越多。结论苦参碱对肝癌HepG2细胞增殖有一定的抑制作用,苦参碱抑制肝癌细胞的同时诱导了自噬的产生。苦参碱诱导肝癌HepG2细胞自噬多发生在细胞周期的G1期。     

新型环丙烷类B-Raf激酶抑制剂的设计合成及抗肿瘤活性研究

目的设计合成一系列环丙烷类B-Raf激酶抑制剂并测定其对人肝癌Hep G2细胞增殖的影响。方法以索拉非尼(sorafenib)为先导化合物,通过结构优化设计新型环丙烷类B-Raf激酶抑制剂,并以对羟基苯甲醛为起始原料经过苄基保护、缩合、酯化、环丙化、水解、酰胺化、脱苄、亲核取代等反应合成目标化合物。以索拉非尼为阳性对照物,采用MTT法测定目标化合物对人肝癌HepG2细胞增殖的影响。结果与结论合成了16个未见文献报道的新化合物,其结构经核磁共振氢谱鉴定。初步的体外活性评价结果表明,其中9个化合物表现出良好的肿瘤细胞抑制活性,优于阳性对照药索拉非尼,具有进一步研究的价值。     

具有Src激酶和NO合酶双重抑制作用的4-芳杂胺-3-氰基喹啉类抗肿瘤化合物的设计、合成与生物活性研究

Src与iNOS为肿瘤发生、转移中位于不同通路的重要靶酶,本文采用分子拼合的药物设计原理,设计合成了全新的酪氨酸Src蛋白激酶与iNOS的双重抑制剂。所设计合成的化合物经过Src激酶和iNOS的抑制活性检测及体外抗肿瘤测试,实验结果表明大部分化合物对于两种靶酶均表现出一定的抑制活性,部分化合物对于多种肿瘤细胞的增殖有一定的抑制作用。其中化合物33对Src激酶和iNOS均有比较好的抑制活性,对于肝癌HepG2和结肠癌HT-29细胞的增殖也有明显的抑制作用。     

hTERT-siRNA对人肝癌细胞QGY增殖活性的影响

目的:利用siRNA在肝癌细胞内诱导RNAi,抑制hTERT基因表达,探讨RNAi对肝癌细胞增殖活性的影响.方法:构建靶向hTERT基因的siRNA(hTERT-siRNA),转导人肝癌细胞株QGY,采用3H-TdR掺入法检测转染质粒后细胞增殖活性.结果:成功构建hTERT-siRNA,其对肝癌细胞增殖具有明显抑制效应,抑制率达42%.结论:hTER-siRNA能明显抑制肝癌细胞的增殖.     

小叶锦鸡儿中异黄酮及其苷类化合物的体外抗肿瘤活性研究

目的研究小叶锦鸡儿中异黄酮及其苷类化合物的体外抗肿瘤细胞增殖作用。方法利用四唑盐比色法检测,观察小叶锦鸡儿中分离出的3种异黄酮及其苷类化合物:雁靛黄素(Ⅰ)、高丽槐树-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅱ)和芒柄花素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅲ)对人乳腺癌细胞株、宫颈癌细胞株、人肝癌细胞株生长的影响。结果化合物Ⅰ对人乳腺癌细胞株、宫颈癌细胞株的增殖均有明显的抑制作用,IC50分别为20.2、16.9μg.mL-1;化合物Ⅱ对乳腺癌细胞株、肝癌细胞株均有不同强度的抑制作用,IC50分别为17.9、18.8μg.mL-1;化合物Ⅲ对乳腺癌细胞株的增殖有抑制作用,但不呈现浓度依赖关系,对其他两个细胞株的增殖不显示抑制活性。结论化合物Ⅰ、Ⅱ对两种细胞株有不同程度的抗肿瘤活性,化合物Ⅲ不具抗肿瘤活性。     

东北红豆杉中14种紫杉烷化合物对HLE细胞增殖的影响

东北红豆杉(Taxus cuspidata)为红豆杉科红豆杉属植物[1].本文通过观察从东北红豆杉中分离得到的14种紫杉烷化合物进行抑制人肝肿瘤细胞增殖活性的影响,为开发新的治疗肝癌药物提供实验室依据.     

微小RNA-375调控自噬抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖和转移

目的 探讨微小 RNA-375（miR-375）通过调控自噬相关蛋白（Atg）14 介导的自噬对肝癌细胞（SMMC-7721）增殖和转移能力的影响。方法 将SMMC-7721细胞分别用miR-375模拟物、抑制物以及Atg14的干扰RNA处理,并建立缺氧1 h复氧6 h的模型,分为miR-375 NC组、miR-375 mimics组、miR-375 inhibitor组以及siRNA NC组、Atg14 siRNA 组、miR-375+Atg14 siRNA 组。TargetScan 预测 miR-375 与 Atg14 基因相关性。荧光实时定量 PCR（qRT-PCR）检测miR-375 NC组、miR-375 mimics组、miR-375 inhibitor组miR-375、Atg14 mRNA相对表达量。免疫细胞化学染色检测3组细胞内N-钙黏素（N-Cadherin）和β-连环蛋白（β-catenin）表达分布情况。绿色荧光蛋白-红 色荧光蛋白-轻链（mGFP-RFP-LC3）自噬双标腺病毒转染3组细胞,荧光显微镜下观察自噬体形成情况。平板克隆检测肝癌细胞增殖情况。Western blot 检测Atg14、泛素结合蛋白（P62）、轻链3Ⅰ（LC3Ⅰ）、轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、酵母Atg6同源物（Beclin1）、N-Cadherin、β-catenin和波形蛋白（Vimentin）表达情况。结果 miR-375与Atg14基因相关性较高,qRT-PCR显示过表达miR-375能抑制Atg14 mRNA表达;反之能促进Atg14 mRNA表达。过表达miR-375能抑制肝癌细胞内N-Cadherin表达、提高β-catenin表达水平,抑制肝癌细胞增殖能力（P＜0.01）;而抑制miR-375表达能促进N-Cadherin表达、降低β-catenin表达水平,提高肝癌细胞增殖能力（P＜0.01）。过表达miR-375能抑制Atg14、LC3Ⅱ、Beclin1表达,促进P62表达（P＜0.01）;反之能促进Atg14、LC3Ⅱ、Beclin1表达,抑制P62表达（P＜0.01）。荧 光显微镜下观察到过表达 miR-375 可抑制自噬体形成,而抑制 miR-375 表达能促进自噬体形成（P＜0.01）。干扰Atg14表达后可增强miR-375对肝癌细胞增殖、转移能力的抑制作用（P＜0.01）。结论 激活miR-375能抑制肝癌细胞增殖和转移,而抑制miR-375能促进肝癌细胞增殖和转移,其机制可能与miR-375通过靶向调控Atg14抑制自噬,从而抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖和转移有关。     

没药倍半萜诱导的p21WAF/CIP1蛋白参与抑制前列腺癌细胞增殖

目的 探讨没药的两个倍半萜单体化合物抑制前列腺癌细胞增殖的作用机制.方法 应用细胞增殖实验噻唑蓝(MTT)法检测化合物对人前列腺癌细胞株LNCaP的影响;流式细胞术进一步分析前列腺癌细胞经化合物处理后细胞周期时相的变化;Western blot检测化合物对细胞周期相关蛋白p21WAF/CIP1(p21)和cyclin D表达的影响;利用细胞转染技术检测化合物对cyclin D启动子表达活力的影响.结果 两个没药倍半萜单体化合物对前列腺癌细胞均有显著的抑制活力,使细胞停滞于GO/G.期;且能在蛋白水平诱导p21WAF/CIP1的表达,同时降低cyclinD的表达.结论 没药倍半萜化合物抑制前列腺癌细胞的增殖,可能是通过上调p21WAF/CIP1的表达、下调cyclinD蛋白的表达来实现的.     

芳香环并咪唑环类凋亡抑制蛋白抑制剂的设计、合成与抗肿瘤活性评价

目的设计并合成新的小分子凋亡抑制蛋白抑制剂。方法运用计算机辅助药物设计模拟靶蛋白与目标分子的结合作用,设计并合成新结构的化合物,以紫杉醇作为阳性对照,进行与多个凋亡抑制蛋白的结合实验和多个细胞系的抗肿瘤细胞增殖抑制活性评价,并比较目标物对癌细胞的抑制率。结果合成两个系列共21个目标化合物,部分化合物表现出对多个凋亡抑制蛋白有强烈的抑制活性(纳摩尔级)和对多种肿瘤细胞的抑制能力,其中,ⅡA-1活性最为突出,对XIAP L-BIR2-BIR3抑制作用的IC50值为77.2 nmol·L-1;对乳腺癌细胞系MDA-MB-231的抑制率为70.9%,相同条件下紫杉醇的抑制率仅为38.5%。结论合成的部分化合物有较好的活性,将为今后此类凋亡抑制蛋白抑制剂的研究奠定基础。     

川楝素对人肝癌细胞株HepG2生物学行为的影响

目的 观察川楝素对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响,并研究其诱导凋亡的机制.方法 取人肝癌HepG2细胞株培养后,随机分为对照组(不添加任何药物)、观察组(加川楝素80 mmol/ml),培养细胞24、48、72 h后,酶标仪测定人肝癌HepG2细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测人肝癌HepG2细胞周期和凋亡率.结果 两组对肝癌HepG2细胞增殖抑制率差异有统计学意义(x2=5.33,P＜0.05);两组S期、G0/G1期、M/G2期的细胞比率(t=6.31、6.26、6.56,均P＜0.05)、细胞凋亡率差异有统计学意义(x2=6.15,P＜0.05).结论 川楝素可明显抑制人肝癌细胞HepG2的恶性增殖,并诱导肿瘤细胞凋亡.     

美洛昔康对人肝癌HepG_2细胞增殖的抑制作用

目的:研究环氧合酶(COX)-2抑制剂美洛昔康对肝癌细胞HepG2的生长抑制作用及其作用机制。方法:MTT法观察美洛昔康在不同浓度和作用时间下对细胞增殖的抑制作用;免疫细胞化学染色检测细胞增殖核抗原(PCNA)的表达;DNA原位末端标记(TUNEL)法和流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡。结果:美洛昔康可抑制人肝癌细胞HepG2增殖;TUNEL及FCM检测结果均显示美洛昔康可诱导HepG2细胞凋亡。结论:美洛昔康可通过抑制细胞增殖和诱导凋亡2种途径抑制人肝癌细胞HepG2的生长。     

杜仲中超氧化物歧化酶1抑制成分的虚拟筛选及分子动力学研究

目的 对杜仲中潜在作用于超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase 1, SOD1)靶点的抗肌萎缩性脊髓侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis disease, ALS)活性物质进行研究,阐明其药效物质基础。方法 收集文献中报道的具有抑制SOD1聚集活性的化合物信息,建立基于SOD1配体的HipHop药效团模型,收集文献中报道的杜仲中的成分并建立化合物库,对杜仲中的成分与药效团进行匹配,随后采用柔性对接手段对匹配到的小分子化合物与SOD1靶点(PDB ID:6A9O)进行对接并评估其相互作用。结果 通过文献检索共得到杜仲中包含的化学成分118种,建立杜仲化合物库。通过测试集验证选出优选药效团02用于对杜仲化合物库的虚拟筛选,匹配后得到6种杜仲中潜在的抗ALS成分。通过分子模拟对接分析了6种化合物与SOD1的相互作用情况,预测所得的杜仲抗ALS成分与已有文献相符。采用分子动力学模拟手段对打分前2位的化合物进行了研究,结果表明,配体-受体复合物的稳定性与分子模拟对接结果基本保持一致。结论 虚拟筛选结果表明基于药效团、分子对接及分子动力学模拟手...     

凋亡抑制蛋白抑制剂的设计合成与抗肿瘤活性评价

目的设计并合成具有抗肿瘤活性的小分子凋亡抑制蛋白广泛性抑制剂。方法运用基于靶点结构的药物设计策略改造前期得到的苗头化合物,设计合成新结构化合物,并进行多靶点的凋亡抑制蛋白家族（IAPs）结合实验和多个细胞系的肿瘤细胞增殖抑制活性评价。结果合成了25个新结构化合物,部分表现出较强的IAPs抑制活性和多种肿瘤细胞增殖抑制能力（微摩尔级别）,Ⅱc系列化合物显示出较强的ciAP1选择性（〉1000）。结论五元杂环烷当中的4s-甲基是化合物对两类IAPs产生选择性差异的结构基础。     

翻白草油对肝癌HepG2细胞CDK4蛋白的影响

目的:检测翻白草油对肝癌HepG2细胞CDK4蛋白表达的影响,探讨翻白草油抗肝癌的机制.方法:翻白草油作用肝癌HepG2细胞后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测HepG2细胞增殖活性和IC50;western blot法检测CDK4蛋白的表达.结果:翻白草油能抑制HepG2细胞增殖,且呈剂量依赖性,IC50值为2.03mg...     

自噬对肝癌HepG2细胞增殖及对细胞周期影响的研究

目的研究用诱导肝癌HepG2细胞自噬与抑制肝癌HepG2细胞自噬的方法检测自噬对肝癌HepG2细胞增殖的影响,阐明细胞自噬的发生与细胞周期的关系。方法常规培养肝癌HepG2细胞,应用MTT比色法和流式细胞仪检测肝癌HepG2细胞增殖抑制率及细胞周期各时相的变化。结果自噬诱导剂雷帕霉素组的肝癌HepG2细胞抑制率明显高于对照组（P〈0.05）,对照组的肝癌HepG2细胞抑制率明显高于自噬抑制剂3-MA组（P〈0.05）;流式细胞仪分析示自噬诱导剂雷帕霉素组细胞周期中G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多（P〈0.05）。自噬抑制剂3-MA组细胞周期中G1期细胞减少,S期细胞增多,G2/M期细胞相对减少（P〈0.05）。结论自噬对肝癌HepG2细胞增殖有抑制作用,自噬不利于肝癌HepG2细胞成活。肝癌HepG2细胞自噬的发生多停留在细胞周期的G1期。