基质金属蛋白酶2 DNA甲基化在同型半胱氨酸诱导肝细胞凋亡中的作用

目的 探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)及其DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)诱导肝细胞凋亡中的作用.方法 将人源肝细胞分为3组,对照组用正常含血清培养液处理细胞,实验组用100μmol·L-1 Hcy的含药血清处理细胞,干预组用含100μmol·L-1 Hcy和10μmol·L-15-氮杂胞苷的含药血清处理细胞,均...     

硫化氢对多柔比星致心肌细胞凋亡的保护作用

目的:研究硫化氢对多柔比星引起的心肌细胞凋亡的保护作用及其机制.方法:以硫氢化钠(NaHS)作为供体,先用不同浓度NaHS处理心肌细胞,再加入多柔比星(DOX)致其凋亡.应用胎盘蓝染色测量细胞的存活率;应用Annexin V和PI双染流式术检测其凋亡情况;应用比色法检测凋亡相关蛋白CASPASE-3和CASPASE-9的活性.结果:分别以DOX(5μmol·L-1)+ NaHS(50μmol·L-1)、DOX(5μmol·L-1)+ NaHS(100 μmol·L-1)、DOX(5μmol·L-1)+ NaHS( 200 μmol·L-1)浓度处理的各组细胞存活率均较单用DOX组(5μmol·L-1)增高;以DOX(5μmol ·L -1)+ NaHS(200 μmol·L-1)处理的细胞凋亡率较单用DOX组(5μmol·L-1)降低,以DOX(5μmol·L-1)+ NaHS(200μmol·L-1)处理的细胞的caspase-3和caspase-9活性较单用DOX组(5μmoloL-1)降低,各项指标差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:硫化氢可以保护DOX引起的心肌细胞损伤,抑制DOX引起的心肌细胞凋亡.     

L-肌肽对鱼藤素诱导SH-SY5Y细胞神经毒性的保护作用

目的研究L-肌肽是否能通过抗氧化活性降低鱼藤素导致的神经毒性。方法 SH-SY5Y细胞在L-肌肽(1、10、20、40、60、80、100 mmol·L~(-1))中培养24 h,CCK-8法测定细胞存活率。30 mmol·L~(-1) L-肌肽、20μmol·L~(-1)鱼藤素、20μmol·L~(-1)鱼藤素与30 mmol·L~(-1) L-肌肽作用于SH-SY5Y细胞24 h,AO/EB法检测细胞形态和凋亡情况。8μmol·L~(-1)鱼藤素、8μmol·L~(-1)鱼藤素与3 mmol·L~(-1) L-肌肽、8μmol·L~(-1)鱼藤素与30 mmol·L~(-1) L-肌肽、20μmol·L~(-1)鱼藤素、20μmol·L~(-1)鱼藤素与3 mmol·L~(-1) L-肌肽、20μmol·L~(-1)鱼藤素与30 mmol·L~(-1) L-肌肽、50μmol·L~(-1)鱼藤素、50μmol·L~(-1)鱼藤素与3 mmol·L~(-1) L-肌肽、50μmol·L~(-1)鱼藤素与30 mmol·L~(-1) L-肌肽作用于SH-SY5Y细胞24 h,CCK-8法检测细胞的增殖情况;双染流式细胞术检测细胞凋亡率;DCFH-DA流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)水平。结果 20μmol·L~(-1)鱼藤素与30 mmol·L~(-1) L-肌肽共作用于细胞后,细胞抑制率降低9.07%,早期凋亡的细胞数减少,早期凋亡率降低9.35%,总凋亡率降低10.7%,ROS水平低于20μmol·L~(-1)鱼藤素组,结果差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 L-肌肽能有效降低鱼藤素诱导SH-SY5Y细胞的神经毒性,保护细胞,其机制可能与降低氧化应激水平相关。     

依达拉奉保护H9c2心肌细胞对抗异丙肾上腺素诱导的氧化应激及内质网应激反应

目的探讨依达拉奉(EDA)能否保护H9c2心肌细胞对抗异丙肾上腺素(ISO)诱导的氧化应激和内质网应激(ERS)。方法用ISO处理H9c2心肌细胞,建立β1肾上腺素受体持续兴奋诱导心肌细胞毒性的体外模型。EDA在ISO处理心肌细胞前1 h加入培养基中作为预处理。CCK-8比色法检测细胞存活率;双氯荧光素(DCFH-DA)染色/荧光显微镜照相检测细胞内活性氧(ROS)的含量;罗丹明123(Rh123)染色/荧光显微镜照相检测线粒体膜电位(MMP);Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达。结果 ISO在20～100μmol.L-1浓度范围内处理H9c2心肌细胞48 h,呈剂量依赖性地降低细胞存活率;80μmol.L-1ISO处理H9c2心肌细胞可使细胞内ROS含量明显增多及MMP明显降低;80μmol.L-1 ISO处理H9c2心肌细胞0～24 h,可时间依赖性地上调内质网应激蛋白GRP78的表达,其中12 h达到高峰。分别用10、20和40μmol.L-1 EDA预处理1 h可以减弱80μmol.L-1 ISO处理H9c2心肌细胞48h引起的细胞存活率降低,500、1 000和2 000μmol.L-1氧自由基清除剂NAC分别预处理1 h也可减轻ISO诱导的心肌细胞毒性反应;40μmol.L-1的EDA预处理1 h可明显减轻ISO诱导的胞内ROS堆积及MMP降低,并明显抑制ISO引起的GRP78的表达上调。结论 EDA可保护H9c2心肌细胞对抗ISO诱导的损伤作用,其机制可能与抗氧化及抑制内质网应激反应有关。     

全反式维A酸对小鼠胚胎腭间充质细胞成骨分化的抑制作用及其机制

目的探讨全反式维A酸(atRA)对小鼠胚胎腭间充质细胞(MEPM)成骨分化的影响及其机制。方法分离培养MEPM细胞,在成骨诱导(OM)培养基中分别加入atRA 0.1和1.0μmol·L-1,分别于培养1,3,5,7和9 d用MTT法测定细胞存活率,化学比色法检测碱性磷酸酶(ALP)活性。培养21 d后,Von-Kossa染色观察矿化面积比。培养9 d后,逆转录PCR(RT-PCR)检测成骨相关基因Runx2、骨桥蛋白以及骨形态发生蛋白受体(Bmpr)1b,Bmpr2和Smad5 mRNA的表达水平。结果培养9 d后,与正常对照组相比,OM及OM+atRA 0.1和1.0μmol·L-1组细胞存活率明显降低(P<0.05);OM组细胞ALP活性最高,OM+atRA 1.0μmol·L-1组ALP活性明显低于OM组(P<0.05)。培养21 d后,Von-Kossa染色结果显示,OM+atRA 1μmol·L-1组矿化结节面积比为(3.56±1.24)%,明显低于OM组(10.33±2.29)%(P<0.05)。培养9 d后,OM组的Runx2相对表达各组内最高,OM+atRA 1.0μmol·L-1组与其相比约下调20%(P<0.05)。与正常对照组相比,OM组、OM+atRA 0.1和1.0μmol·L-1组骨桥蛋白mRNA表达明显升高(P<0.05)。OM组的Bmpr1b mRNA表达水平为正常对照组的1.6倍,OM+atRA 1.0μmol·L-1组的相对表达仅为OM组的33%(P<0.05)。OM+atRA 1.0μmol·L-1组Smad5 mRNA的表达水平明显低于OM组(P<0.05)。结论atRA能抑制MEPM的成骨分化,其作用机制可能与其下调Bmpr1b影响BMPR信号有关。     

多硫代二酮哌嗪类化合物C87体外对肿瘤细胞生长的抑制作用及对活性氧产生的影响

目的研究多硫代二酮哌嗪类化合物C87对肿瘤细胞生长的影响及其可能机制。方法用磺酰罗丹明B法观察C87 0.05~1μmol·L-1与A549,HCT116,He La和SMMC7721作用24,48和72 h对肿瘤细胞存活率的影响,并计算50%生长抑制浓度(GI50);用流式细胞术检测C87 0.1~2.5μmol·L-1作用HCT116和He La细胞6 h,C87 2.5μmol·L-1作用0~6 h活性氧(ROS)的生成量;用流式细胞术检测C872.5μmol·L-1伴随给予抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)作用HCT116和He La细胞6 h ROS的生成量;用SRB法观察C87 0.05~1μmol·L-1伴随给予NAC作用24和48 h对HCT116细胞存活率的影响。结果C87 0.05~1μmol·L-1作用24,48和72 h,可明显抑制A549,HCT116,He La和SMMC7721细胞存活(P<0.05),且具有浓度依赖性(72 h,r2=0.946,0.989,0.973和0.984,P<0.05);C87 1μmol·L-1与上述4种肿瘤细胞作用24,48和72 h能时间依赖性地抑制细胞存活(r2=0.983,0.956,0.951和0.873,P<0.05)。C87 0.25~2.5μmol·L-1与He La细胞和HCT116细胞作用6 h,可诱发细胞内ROS产生,且呈浓度依赖性(r2=0.760,P=0.045;r2=0.987,P=0.001);C87 2.5μmol·L-1作用0.5~6 h,诱导ROS的产生呈时间依赖性(r2=0.886,P=0.017;r2=0.994,P=0.000)。给予抗氧化剂NAC后能明显抑制C87引起的He La细胞和HCT116细胞ROS生成(P<0.05),NAC 5和10 mmol·L-1可明显逆转C87引起的HCT116细胞死亡,GI50值明显增大,作用24 h时GI50为1.446和1.134μmol·L-1(C87处理组为0.513μmol·L-1);处理48 h时GI50为0.882和1.166μmol·L-1(C87处理组为0.333μmol·L-1)。结论化合物C87对A549,HCT116,He La和SMMC7721肿瘤细胞的生长具有抑制作用,其机制可能与其诱导细胞内氧化应激有关。     

香芹酚抑制人胃癌细胞增殖的体外实验研究

目的:研究香芹酚对胃癌BGC-823细胞的生长、凋亡及侵袭的影响。方法:采用MTT法检测香芹酚对胃癌BGC-823细胞的增殖抑制作用;流式细胞技术检测香芹酚对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响;Transwell法检测香芹酚对胃癌BGC-823细胞侵袭能力的影响;实时荧光定量PCR检测MMP-9、TIMP-1的表达;Western blot检测caspase-9、PARP的表达以及ERK、P38信号通路的激活情况。结果:香芹酚能够明显抑制胃癌细胞生长(P<0.05),与对照组相比,香芹酚处理组胃癌BGC-823细胞凋亡明显增加(0μmol·L-1vs 10μmol·L-1,0μmol·L-1vs 20μmol·L-1,0μmol·L-1vs 40μmol·L-1,0μmol·L-1vs80μmol·L-1),侵袭能力显著降低(0μmol·L-1vs 80μmol·L-1),差异均有统计学意义(P<0.000 1)。香芹酚处理组细胞caspase-9、TIMP-1表达升高(P<0.000 1)、PARP发生裂解(P<0.000 1),P38信号被激活,同时MMP-9表达降低(P<0.000 1),ERK信号通路受到抑制。结论:香芹酚能够抑制胃癌细胞的增殖和侵袭,诱导其凋亡,其作用与MAPK信号通路激活密切相关。     

氯胺酮对HepG2细胞线粒体功能的影响

目的评价氯胺酮的线粒体毒性,从而探讨氯胺酮可能的毒性机制。方法 Hep G2细胞培养基中分别加入齐多夫定10~2000μmol·L-1培养7 d,或加入氯胺酮50~3000μmol·L-1培养24 h,CCK8细胞计数法测定细胞存活率。Hep G2细胞培养基中分别加入齐多夫定100μmol·L-1培养7 d后,或加入氯胺酮100和1200μmol·L-1培养24 h,化学发光法检测胞内ATP合成水平,荧光探针法检测胞内钙离子浓度、活性氧及线粒体膜电位(ΔΨm)的变化,同时设齐多夫定1000μmol·L-1用于实时荧光定量PCR检测线粒体DNA(mt DNA)表达水平的变化。结果与正常对照组相比,齐多夫定10~2000μmol·L-1可以抑制细胞存活,IC50为100μmol·L-1;氯胺酮1000~3000μmol·L-1抑制细胞存活,IC50为1200μmol·L-1。与正常对照组相比,齐多夫定100μmol·L-1组线粒体ATP合成水平显著下降(P<0.05),胞内钙离子浓度明显升高(P<0.05),活性氧水平显著升高(P<0.05),ΔΨm显著下降(P<0.05),而1000μmol·L-1可以明显干扰mt DNA表达水平(P<0.05)。氯胺酮100μmol·L-1组ATP合成水平明显下降(P<0.05),其他指标均无显著性差异;氯胺酮1200μmol·L-1组ATP合成水平显著下降(P<0.01),活性氧水平和胞内钙离子浓度显著升高(P<0.01),ΔΨm显著下降(P<0.05),mt DNA水平无明显改变。结论氯胺酮可以通过干扰线粒体代谢功能而诱导线粒体损伤。     

蛇床子素延缓叔丁基过氧化氢诱导的神经干细胞衰老

目的通过建立神经干细胞(NSC)体外衰老模型,探讨蛇床子素(Ost)延缓NSC衰老的作用,并探讨其可能调控机制。方法体外培养NSC,在增殖培养基中传代纯化培养至第3代,用于细胞实验。利用叔丁基过氧化氢(t-BHP)50,100和150μmol·L-1分别与NSC孵育1,2和3 h,CCK-8法检测细胞存活率,确定t-BHP 100μmol·L-1与NSC孵育2 h为制备细胞衰老模型的最佳条件。再加入Ost 50,100和150μmol·L-1作用1,2和3 h,CCK-8法检测细胞存活率,选择Ost促进细胞存活的最佳作用浓度和作用时间。实验分为细胞对照组、衰老模型组(NSC与t-BHP 100μmol·L-1作用2 h)和模型+Ost组(NSC与t-BHP 100μmol·L-1作用2 h后,再与Ost 100μmol·L-1作用2 h),用Ki67染色法检测NSC细胞增殖能力,免疫组化法检测NSC分化能力,衰老β-半乳糖苷酶(Sa-β-gal)法检测衰老细胞百分率,RT-PCR法检测p53,p21,p19和p16基因表达,Western蛋白印迹法检测P16、细胞周期蛋白依赖性激酶D1(CDKD1)和磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白(p Rb)蛋白表达。结果 Ost 100μmol·L-1作用2 h可明显促进NSC存活(P<0.01)。与细胞对照组相比,模型组NSC增殖能力明显下降(P<0.05),分化为星形胶质细胞、神经元和少突胶质细胞的能力亦明显下降(P<0.05),Sa-β-gal阳性衰老细胞百分率升高(P<0.01)。与模型组相比,模型+Ost 100μmol·L-1组NSC增殖能力升高(P<0.05),分化为星形胶质细胞、神经元和少突胶质细胞的能力亦明显提高(P<0.05),Sa-β-gal阳性衰老细胞百分率下降(P<0.01)。RT-PCR结果显示,与模型组相比,模型+Ost100μmol·L-1组p16和p53 m RNA表达水平降低(P<0.05),p19和p21 m RNA表达无显著性变化;与模型组相比,模型+Ost 100μmol·L-1组P16蛋白表达降低,同时CDKD1和p Rb蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论 Ost具有延缓t-BHP造成NSC衰老的作用,其延缓NSC衰老作用机制可能与调控P16-p Rb信号通路有关。     

柚皮素对Aβ25-35损伤PC12细胞丝裂原激活蛋白激酶/细胞外信号调节蛋白激酶通路的调控效应研究

目的探讨柚皮素对体外培养的Aβ_25-35损伤PC12细胞的保护作用及相关信号通路的调控机制。方法将生长至对数期的PC12细胞接种于培养瓶培养24 h,弃掉旧培养液后,随机分为空白组(培养液)、模型组(150μmol·L-1 Aβ_25-35)、实验组-1(4×10-1 μmol·L-1柚皮素+150μmol·L-1 Aβ_25-35)和实验组-2(10μmol·L-1 U0126+4×10-1 μmol·L-1柚皮素+150μmol·L-1 Aβ_25-35),使每组细胞浓度为20μmol·L-1(除空白组),给药24 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法检测各组细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)和磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-ERK1/2)的蛋白表达量。结果空白组、模型组、实验组-1、实验组-2的细胞总凋亡率分别为(4.13±0.55)%,(34.70±1.66)%,(11.26±0.77)%,(23.52±0.80)%;Bax蛋白表达量分别是0.24±0.06,0.76±0.03,0.21±0.02,0.68±0.04;Bcl-2蛋白表达量0.61±0.04,0.20±0.04,0.55±0.03,0.34±0.02;Caspase-3蛋白表达量0.13±0.03,0.40±0.03,0.21±0.04,0.31±0.02;p-ERK1/2蛋白表达量0.86±0.03,0.48±0.06,0.78±0.04,0.50±0.07。模型组与空白组、实验组与模型组和实验组-2与实验组-1比较,上述指标差异均有统计学意义(P<0.01)。结论柚皮素可通过丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)/细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular-signal regulated protein kinase, ERK)信号通路改变Bax、Caspase-3、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达量,抑制细胞凋亡,对Aβ_25-35损伤的PC12细胞有保护作用。     

姜黄素介导微小RNA-199a-3p基因对前列腺癌细胞的影响

目的探讨姜黄素调控微小RNA-199a-3p(miR-199a-3p)的表达对前列腺癌C4-2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法(1)将体外培养的前列腺癌C4-2细胞分为4组:空白组(无药物干预)和低、中、高3个剂量实验组(20,40,80μmol·L^-1姜黄素干预),选取对C4-2细胞的增殖抑制最明显姜黄素浓度用于以下实验。(2)将体外培养的前列腺癌C4-2细胞分为3组:空白对照组(仅加入脂质体)、第1转染组和第2转染组,第1转染组、第2转染组分别转染阴性对照物与miR-199a-3p抑制物后再加入姜黄素40μmol·L^-1处理。用溴化噻唑蓝四氮唑法检测细胞增殖水平,以Transwell法检测细胞迁移和侵袭水平,以实时荧光定量-PCR法检测miR-199a-3p基因表达(2﹣△△Ct值),以蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Wnt/β-catenin通路β-catenin、Cyclin D1和c-Myc蛋白表达(灰度值的比值)。结果(1)空白组和低、中、高3个剂量实验组干预72 h的细胞增殖率分别为(1.76±0.31)%,(1.52±0.27)%,(0.78±0.16)%和(0.95±0.19)%,低、中、高3个剂量实验组与空白组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05),其中40μmol·L^-1姜黄素对C4-2细胞的增殖抑制最明显,故选用该浓度做后续实验。空白组和中剂量实验组的细胞迁移数目分别为(165.48±27.83)和(68.42±16.67)个;这2组的细胞增殖数目分别为(104.62±21.64)和(43.58±10.91)个;这2组的miR-199a-3p基因表达量分别为1.03±0.12和3.91±0.29,中剂量实验组与空白组比较,以上指标的差异均有统计学意义(均P<0.05)。(2)空白对照组、第1转染组和第2转染组在转染72 h的细胞增殖率分别为(0.95±0.19)%,(0.95±0.27)%和(1.66±0.41)%;这3组的细胞迁移数目分别为(62.45±12.11),(71.52±15.12)和(138.46±39.49)个;这3组的细胞侵袭数目分别为(34.49±8.43),(39.34±9.46)和(81.49±24.16)个;这3组的MMP-2表达分别为0.46±0.11,0.45±0.13和0.76±0.17;这3组的MMP-9表达分别为0.36±0.11,0.38±0.12和0.59±0.15;这3组的β-catenin表达分别为0.53±0.13,0.49±0.16和0.71±0.17;这3组的Cyclin D1表达分别为0.26±0.09,0.29±0.11和0.69±0.15;这3组的c-Myc表达分别为0.21±0.06,0.22±0.07和0.56±0.12。以上指标:第2转染组与空白对照组比较,或第2转染组与第1转染组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论姜黄素可上调miR-199a-3p基因的表达,从而抑制前列腺癌C4-2细胞的增殖、迁移和侵袭。     

壁虎粗多肽对SH-SY5Y细胞增殖和凋亡的影响

目的研究壁虎粗多肽(GCPs)对人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞增殖、凋亡能力的影响。方法用不同浓度GCPs(0,0.08,0.12,0.16,0.20,0.24,0.32 mg·mL^-1)分别处理SH-SY5Y细胞24,48,72 h,用噻唑蓝(MTT)比色法检测SH-SY5Y细胞增殖能力的变化,根据MTT结果分组。将SH-SY5Y细胞分为空白组和低、中、高剂量实验组(GCPs:0,0.12,0.16,0.20 mg·mL^-1)。用流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞的凋亡率,用Hoechst 33258荧光染色检测细胞核变化,用蛋白质印迹法检测胱天蛋白酶-3(Caspase-3)和Caspase-9蛋白的表达水平。结果GCPs作用SH-SY5Y细胞24,48,72 h的半数抑制浓度(IC₅₀)值分别为(0.23±0.01),(0.20±0.01)和(0.17±0.01)mg·mL^-1。空白组和低、中、高剂量实验组的细胞凋亡率分别为(10.21±0.73)%,(20.93±2.07)%,(32.90±1.07)%和(57.71±8.51)%,低、中、高剂量实验组的凋亡率与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在荧光显微镜下观察,低、中、高剂量实验组蓝色荧光分布不均,细胞核缩小,有较强荧光团出现。空白组和低、中、高剂量实验组的Caspase-3与GAPDH灰度值比值分别为0.25±0.05,0.43±0.06,0.52±0.07和0.59±0.06,低、中、高剂量实验组与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);Caspase-9与GAPDH灰度值比值分别为0.17±0.01,0.19±0.02,0.23±0.02和0.26±0.02,高剂量实验组与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论GCPs可抑制SH-SY5Y细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与激活Caspase凋亡途径相关。     

鹅不食草心菊内酯对肝星状细胞活化的抑制作用机制研究

目的研究鹅不食草心菊内酯(helenalin)对LX-2人肝星状细胞(HSCs)活化的抑制作用及其机制。方法用白细胞介素-1β(IL-1β)20 ng·mL^-1刺激LX-2细胞建立体外细胞模型,另取未刺激细胞作为正常组。将损伤细胞分为5组:模型组、阳性对照组[LY294002(磷脂酰肌醇3激酶/丝苏氨酸蛋白激酶通路抑制剂)20μmol·L^-1]和高、中、低3个剂量实验组(helenalin:2.0,1.0,0.5μmol·L^-1),均干预24 h。用四甲基偶氮唑盐法检测细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量-PCR法检测微小RNA-21(miR-21)基因的表达,蛋白质印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的表达(光密度值)。结果Helenalin作用24 h时的IC₅₀为6.98μmol·L^-1,根据细胞的增殖抑制率,选择低于IC₅₀的3个浓度(2.0,1.0,0.5μmol·L^-1)作为后续实验的给药浓度。正常组、模型组和高、中、低3个剂量实验组的miR-21基因相对表达量分别为0.99±0.15,1.71±0.07,1.03±0.04,1.01±0.02和1.19±0.12;正常组、模型组、阳性对照组和高、中、低3个剂量实验组的总凋亡率分别为(1.45±0.33)%,(1.93±0.55)%,(23.33±0.49)%,(19.77±0.65)%,(10.70±0.75)%和(3.01±0.38)%;上述6组的α-SMA蛋白相对表达量分别为0.19±0.02,0.26±0.04,0.15±0.02,0.15±0.02,0.18±0.04和0.20±0.04;上述6组的I型胶原蛋白相对表达量分别为0.15±0.02,0.39±0.05,0.19±0.01,0.24±0.04,0.37±0.04和0.38±0.06;上述6组的Ⅲ型胶原蛋白相对表达量分别为0.07±0.01,0.31±0.04,0.09±0.01,0.05±0.01,0.05±0.01和0.18±0.02。上述指标:模型组与正常组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01);3个剂量实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论Helenalin抗肝纤维化的作用机制可能与抑制肝星状细胞的增殖活化、诱导细胞凋亡和减少活化细胞内胶原的合成并下调miR-21基因的表达有关。     

硫化氢对青光眼大鼠视网膜细胞的保护作用及机制研究

目的研究硫化氢(H2S)对青光眼大鼠视网膜细胞的保护作用及作用机制。方法雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和低、高剂量实验组,每组25只。模型组及低、高剂量实验组大鼠均用光凝法建立青光眼大鼠模型,造模成功后,低、高剂量实验组大鼠分别腹腔注射50,100μmol·kg^-1·d^-1硫氢化钠(NaHS)溶液(H2S供体),对照组与模型组腹腔注射等量生理盐水,连续干预2周。用动物眼压计测量各组大鼠干预后眼内压,以原位末端标记染色法检测视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡情况,用蛋白质印迹法检测各组大鼠视网膜组织中磷酸化原癌基因蛋白Jun氨基末端激酶(p-JNK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)及磷酸化丝裂原活化蛋白激酶p38(p-p38 MAPK)蛋白相对表达量。结果对照组、模型组和低、高剂量实验组大鼠干预后眼内压分别为(18.55±3.02),(37.11±2.62),(29.34±3.22),(23.87±1.68)mmHg,RGCs凋亡指数分别为(3.24±1.12)%,(59.03±5.92)%,(23.26±3.87)%,(12.52±2.33)%,视网膜组织中p-JNK蛋白相对表达量分别为0.10±0.04,0.81±0.13,0.19±0.05,0.15±0.06,p-ERK蛋白相对表达量分别为0.22±0.05,0.89±0.08,0.32±0.09,0.27±0.06,p-p38 MAPK蛋白相对表达量分别为0.40±0.06,0.94±0.06,0.51±0.11,0.45±0.08。模型组及低、高剂量实验组以上各指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);低、高剂量实验组以上各指标与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 H2S具有降低青光眼大鼠眼内压,改善视网膜组织病变,保护RGCs的作用,其作用机制可能与抑制MAPK信号转导通路有关。     

山奈酚对HepG2细胞增殖的影响及诱导其凋亡的机制研究

目的研究山奈酚对人肝癌细胞(HepG2细胞)增殖与凋亡的影响及其机制。方法将HepG2细胞分为空白组和实验组,实验组以CCK-8法检测10个不同浓度的(10,20,30,40,50,60,70,80,90,100μmol·L^-1)山奈酚处理HepG2细胞24 h后的存活率。最终以3个浓度(20,40,50μmol·L^-1)山奈酚作为低、中、高3个浓度实验组。以免疫印迹法检测核苷酸结合寡聚化域样受体蛋白3(NLRP3)和死骨片-1(P62)蛋白表达水平(灰度值)。结果山奈酚处理HepG2细胞24 h后,空白组与低、中、高3个浓度实验组HepG2细胞的存活率分别为(100.00±0.00)%,(87.92±3.13)%,(77.92±4.40)%和(70.53±4.19)%;上述这4组的NLRP3表达水平分别为0.27±0.05,0.50±0.03,0.71±0.08和0.93±0.10;上述这4组的P62表达水平分别为0.54±0.06,0.76±0.05, 0.87±0.04和1.09±0.10。上述指标:3个浓度实验组与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论山奈酚可有效抑制HepG2细胞增殖、抑制其自噬并诱导其凋亡,其机制可能为有效促进P62的沉积,同时能诱导凋亡经典途径中NLRP3的合成,从而抑制HepG2细胞自噬并促进其凋亡。     

芦荟多糖对糖尿病足溃疡大鼠创面愈合的影响

目的研究芦荟多糖对糖尿病足溃疡大鼠创面愈合的影响及相关机制。方法采用腹腔注射1%链脲佐菌素(STZ)60 mg·kg-1的方法构建糖尿病大鼠模型,另选取15只大鼠为空白组,腹腔注射等量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液;糖尿病大鼠模型构建成功后制备糖尿病足溃疡创面模型。将糖尿病足溃疡大鼠随机分为模型组、实验组和对照组,各15只。实验组于创面外敷浸湿10%芦荟多糖溶液的纺纱,对照组外涂重组牛碱性成纤维细胞生长因子,空白组和模型组外敷浸湿生理盐水的纺纱,每日换药2次,直至创面完全愈合。观察各组糖尿病大鼠创面愈合情况,用酶联免疫吸附法测定糖尿病足溃疡大鼠血清碱性成纤维因子(bFGF)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)及白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;用蛋白质印迹(WB)法检测创面组织Wnt/β-catenin蛋白表达。结果治疗后14 d,空白组、模型组、实验组和对照组糖尿病足溃疡大鼠的创面愈合率分别为(95.46±2.14)%,(65.15±2.48)%,(89.45±3.15)%,(85.46±2.75)%,与模型组比较,其他各组差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白组相比,模型组大鼠血清bFGF、PDGF-BB水平降低,而血清IL-1、TNF-α水平升高(均P<0.05);与模型组比较,实验组和对照组血清bFGF、PDGF-BB水平升高,而血清IL-1、TNF-α水平降低(均P<0.05)。治疗后14 d,空白组、模型组、实验组和对照组大鼠创面组织R-脊椎蛋白3(Rspo3)蛋白表达量分别为1.15±0.21,0.45±0.14,0.89±0.12,0.96±0.10;糖原合成激酶-3β(GSK-3β)蛋白表达量分别为0.24±0.03,1.16±0.34,0.49±0.05,0.52±0.12;β-连环素(β-catenin)蛋白表达量分别为0.99±0.10,0.36±0.05,0.67±0.04,0.82±0.06,与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论芦荟多糖可降低糖尿病足溃疡大鼠血清炎性因子水平,升高生长因子水平,同时可调控Wnt/β-catenin通路蛋白表达进而促进大鼠创面愈合。     

柚皮苷对抗表阿霉素所致H9C2心肌细胞毒性的研究

目的: 柚皮苷(Nar)对抗表阿霉素(EPI)所致H9C2心肌细胞毒性的研究。方法: 取H9C2心肌细胞均分为空白组、对照组、模型组、低剂量、中剂量及高剂量组,低剂量、中剂量及高剂量组分别给予10,20,40 μmol·L^-1 Nar预处理24 h后加入5 μmol·L^-1 EPI,对照组加入等体积的培养基,同样条件下培养。ELSIA法检测5组细胞肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)水平,CCK-8法检测5组心肌细胞活力,Western blot 法检测GRP78、Bax及 Bcl-2 蛋白水平。结果: (1)CK-MB、LDH及MDA水平在模型组>低剂量组>中剂量组>高剂量组>对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);(2)心肌细胞活力在对照组>高剂量组/中剂量组>低剂量组>模型组,差异均有统计学意义(均为P<0.05),但高剂量组及中剂量组间无统计学意义(P>0.05);(3)GRP78及Bax蛋白水平在模型组>低剂量组>中剂量组/高剂量组>对照组,但Bcl-2蛋白水平在对照组>高剂量组/中剂量组>低剂量组/模型组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论: 柚皮苷具备潜在的保护表阿霉素所致H9C2心肌细胞损伤作用,其作用机制可能与上调Bcl-2表达有关。     

黄秋葵多糖调控p73反义RNA 1T对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨黄秋葵多糖调控p73反义RNA 1T(TP73-AS1)对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响,及其作用机制。方法实验分为对照组(正常DMEM培养基),低、中、高剂量实验组(分别用含0.6,1.2,1.8 mg·mL^-1黄秋葵多糖的DMEM培养基)、si-NC组(转染TP73-AS1阴性对照质粒)、si-TP73-AS1组(转染TP73-AS1抑制表达质粒)、pcDNA3.1组(1.2 mg·mL^-1黄秋葵多糖+TP73-AS1阳性对照质粒)、pcDNA3.1-TP73-AS1组(1.2 mg·mL^-1黄秋葵多糖+TP73-AS1过表达质粒)。用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞存活率,用流式细胞术检测细胞凋亡,用实时荧光定量聚合酶链反应检测TP73-AS1的表达水平。结果低、高剂量实验组和对照组、si-NC组、si-TP73-AS1组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-TP73-AS1组的细胞存活率分别为(71.67±3.08)%,(37.36±2.27)%,(100.55±3.68)%,(100.91±6.81)%,(57.12±4.98)%,(49.26±2.81)%和(81.19±7.09)%,细胞凋亡率分别为(14.67±1.40)%,(25.17±2.59)%,(8.38±1.22)%,(8.98±1.04)%,(19.42±1.90)%,(21.13±2.16)%和(10.23±1.06)%,TP73-AS1表达水平分别为0.67±0.07,0.28±0.03,1.00±0.10,1.01±0.10,0.52±0.05,0.42±0.04和0.76±0.06。低、高剂量实验组的上述指标与对照组相比,si-TP73-AS1组的上述指标与si-NC组相比,pcDNA3.1-TP73-AS1组的上述指标与pcDNA3.1组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论黄秋葵多糖可抑制宫颈癌细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与下调TP73-AS1有关。     

盐霉素抑制大鼠肝星状细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的研究

目的研究盐霉素抑制大鼠肝星状细胞胶原蛋白合成的作用机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞(HSC-T6),以酶联免疫吸附(ELISA)法检测HSC-T6上清液中Ⅰ型(ColⅠ)和Ⅲ型(ColⅢ)胶原蛋白的分泌,以实时定量聚合酶链反应(Real time-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路下游蛋白β-catenin、cyclinD1的表达,以荧光素酶报告基因检测β-catenin/T细胞因子(TCF)的转录活性。结果ELISA结果显示,低、中、高浓度实验组ColⅠ水平分别为6.68±0.57,4.15±0.61,3.02±0.42,ColⅢ水平分别为5.61±0.55,3.19±0.43,2.28±0.36,且呈现浓度依赖性,而对照组ColⅠ和ColⅢ的水平分别为5.42±0.53,4.59±0.49,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Real time-PCR和Western blot检测结果显示,盐霉素能显著下调Wnt/β-catenin通路下游β-catenin、cyclinD1蛋白的表达,且呈浓度依赖性,高浓度盐霉素抑制作用大于秋水仙碱(均P<0.05)。实验组TOPFlash报告基因荧光素酶活性显著下降,且在高浓度实验组下降最为显著(均P<0.05),提示盐霉素能显著下调β-catenin/TCF转录活性,且呈浓度依赖性,而秋水仙碱下调β-catenin/TCF转录活性强度大于高浓度实验组(P<0.05)。结论盐霉素通过下调Wnt/β-catenin通路活性抑制HSC-T6的胶原蛋白合成,从抑制肝纤维化,且抗纤维化效果优于秋水仙碱组。     

川楝素对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响

目的研究川楝素对体外卵巢癌细胞恶性生物学行为的作用及其可能的作用机制。方法体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,分为低、中、高剂量实验组和对照组,分别以50,60,70μmol·L^-1川楝素与等量生理盐水干预,分别干预24,48和72 h。用活细胞计数(CCK-8)法检测人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制情况;用细胞划痕实验检测人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力;用Transwell小室实验检测人卵巢癌SKOV3细胞的侵袭能力;用蛋白质印迹(Wb)法检测人卵巢癌SKOV3细胞LIM激酶1(LIMK-1)、丝切蛋白(cofilin)和磷酸化cofilin(p-cofilin)蛋白的表达水平。结果干预72 h时,低、中、高剂量实验组人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制率分别为(56.41±2.69)%,(68.37±3.56)%和(79.51±4.64)%;干预72 h时,对照组和低、中、高剂量实验组人卵巢癌SKOV3细胞的迁移率分别为(92.43±3.51)%,(47.32±4.11)%,(36.25±3.42)%和(18.62±2.69)%;侵袭率分别为(91.48±3.73)%,(76.56±4.12)%和(34.51±3.22)%,(10.36±2.91)%;LIMK-1蛋白相对表达量分别为0.86±0.11,0.59±0.14,0.53±0.12和0.28±0.09;cofilin蛋白相对表达量分别为0.79±0.08,0.82±0.12,0.80±0.10和0.81±0.11;p-cofilin蛋白相对表达量分别为0.90±0.10,0.82±0.12,0.55±0.08和0.24±0.07。随川楝素作用浓度增大,低、中、高剂量实验组人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制率逐渐升高;与对照组比较,低、中、高剂量实验组人卵巢癌SKOV3细胞迁移率、侵袭率及LIMK-1和p-cofilin蛋白相对表达量均显著降低,且呈剂量依赖性(均P<0.05)。结论川楝素具有体外抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭的作用,其作用机制可能与抑制人卵巢癌SKOV3细胞LIMK-1/cofilin信号通路有关。