天津市2001年-2004年流感病原学监测分析

目的：观察天津市流感病毒流行特点以及发生禽流感疫情时的情况。方法：2001年10月-2004年3月3个冬春季的类流感患者咽拭子标本采用MDCK细胞和鸡胚双腔法分离流感病毒，用鸡红细胞和豚鼠红细胞凝集试验（HA）证实是否存在病毒，再用红细胞凝集抑制试验（HI）进行型和亚型的鉴定。2004年用RT—PCR方法检测禽流感疫情区发热患者咽拭子标本。结果：3个监测周期共采集类流感样患者咽拭子标本953份．分离出流感毒株285株，总检出率为29、9％，男女比例为1．06：1，其中A（H1Nl）亚型4．6％（13／285株），A（H3N2）亚型59．6％（170／285株），B型35．8％（102／285株）。285株流感病毒都能适应MDCK细胞，但阳性标本液直接接种鸡胚阳性率极低，仅为2．1％（6／285）。21份禽流感监测咽拭子标本H5亚型RT—PCR结果为阴性。结论：天津地区同时存在A（H1N1）、A（H3N2）和B型流感病毒，12月为发病高峰。天津市2004年发生禽流感时未发现人感染H5亚型禽流感病毒。     

麻疹病毒流行株主要结构蛋白的基因变化

自从1954年Enders分离到第1株麻疹病毒（MV）以来，在麻疹流行过程中MV发生了基因改变，导致生物学特性的变化。通过对H、N、M、F、L、P基因的核苷酸序列分析，可了解地区间流行毒株的基因差异和疫苗的预防效果，为制定免疫策略及消除麻疹提供依据。     

2004-2006年上海市麻疹病毒基因特征分析

目的 对2004-2006年上海市麻疹暴发、流行的野毒株进行基因特征分析和分子流行病学研究,为提出更好的免疫策略,实现麻疹消除目标提供科学依据.方法 采集的血清用ELISA法检测麻疹病毒IgM抗体;用Vero/SLAM细胞对采集的咽拭子标本进行病毒分离,分离到的麻疹病毒株用RT-PCR方法扩增其核蛋白基因C端的部分序列,并对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,以C端456个核苷酸为目的 片段进行基因亲缘性关系分析.结果 2004-2006年上海市疾病预防控制中心对148例疑似麻疹病人的血清进行麻疹IgM抗体检测,132份血清阳性,148份咽拭子中分离到66株麻疹野病毒,阳性率分别为89.2%和44.6%.病毒分离阳性标本的对应血清麻疹IgM抗体检测均为阳性.分离到的66株麻疹野毒株均为H1基因型,除Shanghai04-5为H1b基因亚型外,其余均为H1a基因亚型.所有分离毒株之间的核苷酸同源性为95.8%～100%,氨基酸同源性为95.8%～100%.所有毒株与中国疫苗株S191的核苷酸同源性为91.2%～93.2%,氨基酸同源性为86.8%～90.1%;与疫苗株Changchun-47的核苷酸同源性为92.5%～93.4%,氨基酸同源性为88.2%～91.4%.结论 引起2004-2006年上海市麻疹暴发、流行的野毒株为HI基因型,并以H1a为绝对优势亚型.上海市2005年和2006年可能都有一个主传播链的存在.     

安徽省淮南市2012-2013年流感病毒细胞分离及其流行特征分析

目的：观察安徽省淮南市2012-2013年流感病毒细胞培养分离结果,研究淮南市流感流行特征,为该市流感防控提供科学依据。方法实时荧光定量PCR法对哨点医院送检咽拭子标本进行核酸快速分型后采用狗肾（ MDCK）传代细胞培养法分离病毒,红细胞凝集试验（ HA）鉴定病毒滴度,红细胞凝集抑制试验（ HI）进行型和亚型的鉴定。结果从148份流感网络实验室实时定量PCR阳性标本中,分离出流感毒株68株,总分离率45．9％,其中 A1（H1N1）型26株,分离成功率56．5％,A3（H3N2）型25株,分离成功率33.3％;BY型4株,BV型13株,B型毒株分离成功率为63．0％;各型毒株的分离成功率差异有统计学意义（P＜0．05）。2012年淮南市流行株为BV型流感病毒,于3月份达到流行高峰;2013年流行株为A（H1N1）型流感病毒,流行高峰期则是12月份。结论淮南市2012-2013年甲型流感病毒抗原的变异性强;细胞培养分离病毒对流感流行的病原鉴定起决定性作用;流感病毒B型毒株和新A（H1N1）型毒株分离成功率较高。     

鲍曼不动杆菌ADC型AmpC β-内酰胺酶基因研究

目的了解浙江湖州解放军第98医院自临床分离的鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）中ADC型AmpC β-内酰胺酶基因（blaADC）存在状况。方法收集2000年7月-2002年12月所分离到的60株鲍曼不动杆菌，采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析blaADC基因。结果60株中有59株blaADC基因呈阳性（98．3％），序列分析表明4号菌株（原始编号HZB3944）blaADC基因为-新亚型，其核酸序列已登录GenBank（注册号EF569589）。结论鲍曼不动杆菌中blaADC基因阳性率很高，产ADC型AmpC β-内酰胺酶是本组菌株对β-内酰胺类抗生素耐药的重要原因之一。     

麻疹病毒流行株主要结构蛋白的基因变化

自从 195 4年 Enders分离到第 1株麻疹病毒 (MV)以来 ,在麻疹流行过程中 MV发生了基因改变 ,导致生物学特性的变化。通过对 H、N、M、F、L、P基因的核苷酸序列分析 ,可了解地区间流行毒株的基因差异和疫苗的预防效果 ,为制定免疫策略及消除麻疹提供依据     

贵州省2010年H3N2亚型流感病毒HA1基因序列分析

目的 了解2010年贵州省H3N2亚型流感病毒HA1基因变异特征.方法 用MDCK细胞分离流感病毒,采用血凝抑制试验分型鉴定,随机选取8株H3N2亚型流感毒株进行RNA提取,逆转录扩增获得HA1基因产物,将其进行基因产物测序,测定的序列用相关的生物信息软件进行分析.结果 贵州省各代表株在同一分支.该分支与2008-2009年疫苗推荐株A/Brisbane/10/2007(H3N2)接近,与WHO 2010年疫苗推荐株A/Perth/16/2009 (H3N2)相距较远.结论 2010年根据WHO疫苗推荐株生产的疫苗对该年我市H3N2亚型流感预防效果不好,以至于H3亚型在我省成为优势株,引起广泛流行.     

宁波地区肠道病毒71型VP1基因特征分析

 目的  了解宁波地区肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）流行株VP1基因特征。方法   采集手足口病患者的样本进行病毒分离和鉴定,用逆转录-聚合酶链反应对EV71流行株VP1进行扩增和测序。对流行株VP1进行进化分析,并将流行株VP1与各基因型代表株进行序列比对。同时测定EV71 流行株的半数组织培养感染量（median tissue culture infective dose,TCID50）。结果  2008-2009年,宁波地区分离出23株病毒,鉴定后其中6株为EV71。EV71 流行株VP1进化分析显示,6株EV71流行株与C4亚型代表株聚于同一分支,流行株VP1的核苷酸和氨基酸序列与C4亚型代表株的同源性最高,分别为92.0%～93.1%和98.9%～99.3%。6株EV71流行株的TCID50为101.16～103.33 TCID50/ml。 结论  2008-2009年宁波地区EV71流行株属于C4亚型。     

贵州省分离出一株甲3型流感病毒新变异株

目的：了解人群中流感流行的流感病毒型别，及时发现新的变异性。方法：采用鸡胚和MDCK细胞培养，进行病毒分离，用血凝试验进行型和亚型鉴定，以及作抗原分析，结果：2001年4月在贵阳类流感病人中分离一株A3／112／GuiZhou/2001的新变异株。结论：在我省人群中出现甲3型（A3）流感病毒新变异株，必须加强流感监测，防止流感流行。     

宁波地区肠道病毒71型VP1基因特征分析

目的 了解宁波地区肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)流行株VP1基因特征.方法 采集手足口病患者的样本进行病毒分离和鉴定,用逆转录-聚合酶链反应对EV71流行株VP1进行扩增和测序.对流行株VP1进行进化分析,并将流行株VP1与各基因型代表株进行序列比对.同时测定EV71流行株的半数组织培养感染量(median tissue culture infective dose,TCID50).结果 2008-2009年,宁波地区分离出23株病毒,其中6株为EV71.EV71流行株VP1进化分析显示,6株EV71流行株与C4亚型代表株聚于同一分支,流行株VP1的核苷酸和氨基酸序列与C4亚型代表株的同源性最高,分别为92.0%～93.1%和98.9%～99.3%.6株EV71流行株的滴度为101.16～103.33TCID50/ml.结论 2008-2009年宁波地区EV71流行株属于C4亚型.     

The emergence of adamantane resistance in influenza A(H1) viruses in Australia and regionally in 2006

The adamantanes (amantadine and rimantadine) were the first antivirals licensed for use against influenza A viruses and have been used in some countries to control seasonal influenza. While increasing resistance of A(H3) viruses to this class of drug has been reported in recent years, only low levels of resistance were seen with A(H1) viruses until the 2005-2006 influenza season in the USA. In this study we analysed 101 human influenza A viruses isolated in 2006 that were referred to the WHO Collaborating Centre for Reference and Research in Melbourne, from Australia and the surrounding regions, for evidence of resistance to adamantanes. We found that whereas previously A(H1) resistant viruses were rare, 21.8% of the 2006 viruses had a resistant genotype. By comparison, 58.6% of influenza A(H3) viruses isolated in 2006 that were tested at the Centre, had a resistant genotype.     

Susceptibility of highly pathogenic A(H5N1) avian influenza viruses to the neuraminidase inhibitors and adamantanes

Since 2003, highly pathogenic A(H5N1) influenza viruses have been the cause of large-scale death in poultry and the subsequent infection and death of over 140 humans. A group of 55 influenza A(H5N1) viruses isolated from various regions of South East Asia between 2004 and 2006 were tested for their susceptibility to the anti-influenza drugs the neuraminidase inhibitors and adamantanes. The majority of strains were found to be fully sensitive to the neuraminidase inhibitors oseltamivir carboxylate, zanamivir and peramivir; however two strains demonstrated increased IC50 values. Sequence analysis of these strains revealed mutations in the normally highly conserved residues 116 and 117 of the N1 neuraminidase. Sequence analysis of the M2 gene showed that all of the A(H5N1) viruses from Vietnam, Malaysia and Cambodia contained mutations (L26I and S31N) associated with resistance to the adamantane drugs (rimantadine and amantadine), while strains from Indonesia were found to be a mix of both adamantane resistant (S31N) and sensitive viruses. None of the A(H5N1) viruses from Myanmar contained mutations known to confer adamantane resistance. These results support the use of neuraminidase inhibitors as the most appropriate class of antiviral drug to prevent or treat human A(H5N1) virus infections.     

肇庆市2004年麻疹病例流行病学特征分析

目的 了解麻疹在我市流行的三间分布情况,以制定和调整预防的策略和措施,更好地控制麻疹的流行.方法 用excel软件分析2004年1～12月份肇庆市麻疹监测系统麻疹的病例个案.结果 经过分析得出病例的三间分布均有明显的聚集性.结论 今年我市发生麻疹的主要原因:为封开县的一次暴发流行及流动人口的低免疫接种率.     

天津地区鼠间感染汉坦病毒S基因片段的分型研究

目的：了解天津地区宿主鼠间感染的汉坦病毒的基因分型.方法：提取经免疫荧光检测证实为汉坦病毒抗原阳性的鼠肺组织的总RNA,经RT-PCR扩增汉坦病毒S基因片段,其产物纯化后与T载体连接并进行序列分析.结果：6份鼠肺标本RT-PCR产物均为阳性,序列分析表明J16为HTN型,B11、BC3、D17、H4、J37均为SEO型,且属于同一亚型.结论：天津地区鼠中存在汉坦病毒主要为HTN型和SEO型.     

H1N1 influenza A virus neuraminidase modulates infectivity in mice

In the 2years since the onset of the H1N1 2009 pandemic virus (H1N1pdm09), sporadic cases of oseltamivir-resistant viruses have been reported. We investigated the impact of oseltamivir-resistant neuraminidase from H1N1 Brisbane-like (seasonal) and H1N1pdm09 viruses on viral pathogenicity in mice. Reassortant viruses with the neuraminidase from seasonal H1N1 virus were obtained by co-infection of a H1N1pdm09 virus and an oseltamivir-resistant H1N1 Brisbane-like virus. Oseltamivir-resistant H1N1pdm09 viruses were also isolated from patients. After biochemical characterization, the pathogenicity of these viruses was assessed in a murine model. We confirmed a higher infectivity, in mice, of the H1N1pdm09 virus compared to seasonal viruses. Surprisingly, the oseltamivir-resistant H1N1pdm09 virus was more infectious than its sensitive counterpart. Moreover, the association of H1N1pdm09 hemagglutinin and an oseltamivir-resistant neuraminidase improved the infectivity of reassortant viruses in mice, regardless of the NA origin: seasonal (Brisbane-like) or pandemic strain. This study highlights the need to closely monitor the emergence of oseltamivir-resistant viruses.     

Genotypic and phenotypic resistance of pandemic A/H1N1 influenza viruses circulating in Germany

In response to the rapid global spread of an antigenically novel A/H1N1 influenza virus in 2009, the World Heath Organization (WHO) recommended surveillance and monitoring for antiviral resistance of influenza viruses. We designed and evaluated pyrosequencing (PSQ)-based genotypic assays for high-throughput analysis of the susceptibility of pandemic A/H1N1 influenza viruses to neuraminidase (NA) inhibitors. A total of 1570 samples circulating in Germany between April 2009 and April 2010 were tested for determination of molecular markers of resistance to the NA inhibitors oseltamivir and zanamivir, and 635 of them were evaluated by phenotypic fluorescence-based assay with MUNANA substrate. Eight (0.5%) viruses were resistant to oseltamivir due to the H274Y NA substitution (N2 numbering). Six of these oseltamivir-resistant cases were treatment-related; four of them were selected in immunocompromised patients, two in patients suffered from chronic diseases. The two remaining oseltamivir-resistant viruses seem to have evolved in the absence of drug treatment and were isolated from immunocompetent healthy patients. All tested A/H1N1 pandemic viruses were sensitive to zanamivir. In addition, analysis of 1011 pandemic A/H1N1 virus samples by a PSQ-based assay according to the WHO protocol revealed the presence of mutation S31N in the M2 protein that conferred resistance to M2 ion channel inhibitors. Our data demonstrate a low incidence of oseltamivir-resistant pandemic A/H1N1 influenza variants isolated under drug selection pressure as well as community-acquired or naturally evolving viruses.     

甲型流感病毒血凝素基因变异与抗原变异关系研究

目的 了解甲型流感病毒流行株的血凝素基因变异和抗原变异及两者间的关系,结合流行病学资料分析基因变异和抗原变异的吻合情况.方法 从2005-2007年上海市季节性流感样病例分离到的甲型流感病毒株中,选取H1N1、H3N2两个亚型中部分有代表性的病毒株,并同WHO北半球流感疫苗推荐株一起,进行血凝素全基因序列测定后做基因进化树分析.同时用灭活的全病毒抗原免疫金黄地鼠,通过血凝抑制试验测定病毒的血凝效价,对血凝抑制结果进行聚类分析,绘制病毒的抗原变异图.结果 H3N2分离株与WHO北半球疫苗推荐株A/Sydney/5/97、A/Fujian/411/2002处于不同的基因进化分枝上,时间间隔越久,进化距离越远,同样的结果也出现在抗原变异分析中.而H1N1分离株的基因变异情况和抗原变异情况则不一致,在基因变异中,与疫苗推荐株A/New Caledonia/20/1999的距离远近受到分离时间的影响,抗原变异还与病毒是否从散发病例或聚集性病例分离有关.结论 流感病毒血凝素的基因变异和抗原变异的结果基本吻合,采用流行株免疫血清的血凝抑制试验能更好地反映病毒的变异和进化情况.     

甲型流感病毒血凝素基因变异与抗原变异关系研究

目的 了解甲型流感病毒流行株的血凝素基因变异和抗原变异及两者间的关系,结合流行病学资料分析基因变异和抗原变异的吻合情况.方法 从2005-2007年上海市季节性流感样病例分离到的甲型流感病毒株中,选取H1N1、H3N2两个亚型中部分有代表性的病毒株,并同WHO北半球流感疫苗推荐株一起,进行血凝素全基因序列测定后做基因进化树分析.同时用灭活的全病毒抗原免疫金黄地鼠,通过血凝抑制试验测定病毒的血凝效价,对血凝抑制结果进行聚类分析,绘制病毒的抗原变异图.结果 H3N2分离株与WHO北半球疫苗推荐株A/Sydney/5/97、A/Fujian/411/2002处于不同的基因进化分枝上,时间间隔越久,进化距离越远,同样的结果也出现在抗原变异分析中.而H1N1分离株的基因变异情况和抗原变异情况则不一致,在基因变异中,与疫苗推荐株A/New Caledonia/20/1999的距离远近受到分离时间的影响,抗原变异还与病毒是否从散发病例或聚集性病例分离有关.结论 流感病毒血凝素的基因变异和抗原变异的结果基本吻合,采用流行株免疫血清的血凝抑制试验能更好地反映病毒的变异和进化情况.