多发性骨髓瘤中p15基因甲基化及其mRNA表达的研究

目的探讨p15基因的甲基化及其mRNA转录阻抑与多发性骨髓瘤（MM）的发病和进展之间的关系。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测54例初治和复发MM患者及40例正常骨髓的p15基因启动子区的甲基化状态,并对MSP产物进行序列测定;采用荧光实时定量PCR（RT-qPCR）方法检测MM患者及对照组p15基因mRNA表达情况。结果p15基因启动子区甲基化阳性率为27.78%（15/54）,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。p15基因甲基化率与患者的性别、年龄、病程阶段差异无统计学意义（P〉0.05）。MM组与正常对照组,甲基化组与非甲基化组,初诊组与复发组相比较p15基因mRNA表达均无显著降低,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论p15基因的甲基化与MM的发病有关,与患者的性别、年龄、病程阶段无关。p15基因甲基化与其mRNA转录阻抑的相关性不高。     

氯乙烯对大鼠肝细胞RASSF1A基因DNA甲基化的影响

目的通过检测氯乙烯(VC)染毒大鼠肝细胞RASSF1A基因启动子区甲基化的水平及mRNA的表达量,探讨RASSF1A基因在氯乙烯致癌过程中的表观遗传机制。方法选取96只健康雄性SD大鼠,随机分为4组:阴性对照组(0mg/kg)和低剂量(5 mg/kg)、中剂量(25 mg/kg)、高剂量(125 mg/kg)3个氯乙烯染毒组。腹腔注射,隔日染毒,每周3次。每组分别于6、8和12周随机处死8只,取其肝脏。采用甲基化特异性实时荧光定量(QMSP)检测大鼠肝细胞RASSF1A基因启动子区甲基化的水平,采取实时荧光定量(QPCR)测定RASSF1A mRNA表达量的改变。结果染毒6周时,RASSF1A基因启动子区甲基化水平各组间无明显变化,差异无统计学意义(P0.05);但RASSF1A mRNA的表达量随着剂量的增加而升高,且高剂量组、中剂量组与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。染毒8周时,RASSF1A基因启动子区甲基化水平和mRNA的表达量在各组间差异无统计学意义(P0.05)。染毒12周时,RASSF1A基因启动子区甲基化水平随着染毒剂量的增加而明显升高,高剂量组与其他各组相比,差异有统计学意义(P0.05);mRNA的表达量随着染毒剂量的增加而出现下降,且对照组和低剂量组与高剂量组相比,差异有统计学意义(P0.05)。此外,在高剂量组中,8周时RASSF1A启动子区甲基化水平较6周时低,差异有统计学意义(P0.05),而12周时启动子区甲基化水平较6周时高,且差异有统计学意义(P0.05);mRNA表达量随着染毒时间的延长而下降,且8和12周mRNA表达量与6周时相比,差异有统计学意义(P0.05),在其余各组中,不同染毒时间下RASSF1A甲基化水平及mRNA表达量均未出现统计学差异(P0.05)。结论氯乙烯长期染毒可致大鼠肝细胞RASSF1A基因启动子区甲基化水平的升高,并引起其mRNA的表达量下降,可能参与氯乙烯致癌的表观遗传机制。     

羟基喜树碱对系统性红斑狼疮患者单核淋巴细胞中p16基因表达和启动子甲基化修饰的影响

目的: 探讨羟基喜树碱(Hydroxycamptothecin, HCPT)对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)甲基化敏感基因p16的表达和启动子甲基化修饰的影响。方法: 密度梯度离心法分离得外周血单个核细胞,使用浓度为0.25、0.5、1和2 mg·L^-1的HCPT处理SLE患者PBMC,24 h后收集细胞。MTT法检测处理后PBMC的活力。定量PCR检测p16及DNA甲基转移酶1(DNA Methyltransferase1,Dnmt1)基因mRNA 表达水平,2^-ΔΔct法分析结果。甲基化特异性PCR分析p16基因启动子区甲基化水平。结果: (1)HCPT处理24 h后,0.25、0.5和1 mg·L^-1HCPT处理组PBMC活力之间比较差异无统计学意义(P>0.05),2 mg·L^-1HCPT处理组PBMC活力与0.25、0.5和1 mg·L^-1HCPT处理组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)1 mg·L^-1HCPT处理组与对照组比较p16基因mRNA表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)1 mg·L^-1HCPT处理组与对照组比较Dnmt1基因mRNA表达水平降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。(4)DNA甲基化水平检测显示HCPT处理组p16基因启动子甲基化水平较对照组显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论: HCPT通过降低Dnmt1基因表达水平,下调p16基因启动子甲基化水平,从而增加SLE患PBMC中p16表达水平。     

乳腺癌组织中C-erbB2基因启动子区CpG岛甲基化分析

目的了解乳腺癌组织中致癌基因C-erbB2启动子区CpG岛的甲基化状态。方法收集经病理确诊的39例乳腺癌患者甲醛固定的癌组织及相应的癌旁组织各39份;采用甲基化特异聚合酶链反应(MSP)检测C-erbB2基因启动子区CpG岛的甲基化状态。结果乳腺癌组织中C-erbB2基因启动子区CpG岛的甲基化率(51.3%)低于癌旁组织中存在的甲基化率(74.4%),二者之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论所检测标本显示乳腺癌组织与癌旁组织间C-erbB2基因启动子区CpG岛甲基化率差异有统计学意义,提示C-erbB2的低甲基化可能是C-erbB2蛋白高表达和乳腺癌发生的原因之一。     

ITP中IFN-γ和IL-4 mRNA表达与其甲基化水平的相关性研究

目的:检测免疫性血小板减少症(ITP)患者的干扰素(IFN)-γ和白细胞介素(IL)-4的mRNA表达水平及其各自基因启动子区DNA甲基化的水平.方法:取36例ITP患者(ITP组)和36例正常对照(对照组)外周血,采用实时定量PCR方法检测IFN-γ和IL-4的mRNA水平;随机抽取2组中的各10例,采用DNA甲基化修饰后测序的方法检测IFN-γ和IL-4基因启动子区的甲基化水平,并计算IFN-γ和IL-4基因的mRNA水平与其基因启动子区DNA甲基化水平的相关性.结果:与对照组相比,ITP组IFN-γ的mRNA水平增高(1.86±0.29 vs 0.83±0.14,P＜0.05),而IL-4的mRNA水平降低(0.78±0.22 vs 1.45±0.40,P＜0.05),Th1/Th2(IFN-γ/IL-4)比值升高(7.11±0.60vs 3.12±1.88,P＜0.01).2组IFN-γ和IL-4基因CpG岛的位点甲基化水平和整体甲基化水平差异均无统计学意义(P＞0.05).ITP组中IFN-γ和IL-4的mRNA表达水平与基因启动子区甲基化水平不存在相关性(均P＞0.05).结论:ITP患者处于Th1极化状态,IFN-γ和IL-4的基因启动子区的甲基化水平对各自基因mRNA水平的表达不起调控作用.     

分泌型卷曲相关蛋白2启动子区甲基化与β联蛋白异常表达在结直肠癌中的意义

目的研究结直肠癌中Wnt/β-联蛋白(catenin)信号通路调控因子分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)2基因启动子区甲基化状态及β-catenin蛋白的表达模式,探讨两者在结直肠癌中的关系及意义。方法用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法和免疫组织化学法分别检测结直肠癌组、腺瘤组、非腺瘤性息肉组、健康对照组中SFRP2基因启动子区甲基化状态和β-catenin蛋白的表达情况。结果在结直肠癌组、腺瘤组、非腺瘤性息肉组、健康对照组中,SFRP2基因启动子区甲基化率分别为79%、63%、8%、0,差异有统计学意义(P<0.05);β-catenin蛋白表达率分别为74%、48%、4%、0,差异有统计学意义(P<0.05);SFRP2启动子区甲基化与β-catenin异常表达之间存在相关性(P<0.01);SFRP2启动子区甲基化和β-catenin异常表达均与肿瘤分化程度有关(P<0.05)。结论 SFRP2启动子区域甲基化频率及β-catenin异常表达率在结直肠癌中上调,两者可能共同促进了结直肠癌的发生发展。     

白血病抑制因子基因在急性白血病患者中的表达及意义

目的研究急性白血病(acute leukemia,AL)患者外周血白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)mRNA的表达水平及其与AL病情、疗效和预后的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测37例不同类型以及同一类型不同阶段AL患者[初治患者16例(初治亚组)、完全缓解患者12例(完全缓解亚组)、复发患者9例(复发亚组)]LIF的mRNA的表达水平,并与20例健康者(对照组)比较。结果初治亚组LIF基因mRNA阳性表达率低于对照组和完全缓解亚组(P<0.05);复发亚组LIF基因mRNA阳性表达率低于完全缓解组(P<0.05);复发亚组与初治亚组比较及完全缓解亚组与对照组比较,LIF基因mRNA阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05);LIF基因表达率在急性髓系白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)患者间无显著性差异(P>0.05)。结论 LIF基因表达水平与AL患者病情变化密切相关。检测AL患者LIF基因表达情况,为AL患者检测病情、疗效评价、指导临床用药和预后判断,提供了一定的理论依据。     

荧光定量聚合酶链反应检测miR-342-3p及靶基因EVL在多发性骨髓瘤细胞中的表达

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者中miR-342-3p及靶基因EVL的表达情况及意义。方法建立应用颈环式结构引物反转录扩增微小RNA(miRNA)的反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 ,并采用荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)对miR-342-3p及靶基因EVL的表达进行定量分析。结果①5例MM患者中miR-342-3p相对表达量为7.6±5.7,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。②MM细胞株U266中miR-342-3p相对表达量为7.0±3.2,较对照组表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。③5例MM患者中EVL基因相对表达量为6.3±3.2,较对照组表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。④MM细胞株U266中EVL基因相对表达量为4.3±1.1,较对照组表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MM存在miR-342-3p及EVL基因表达异常,可能为研究MM发病机制提供思路。     

膀胱移行细胞癌中FHIT基因异常甲基化及其与临床病理学的关系

目的检测FHIT基因在膀胱移行细胞癌中的异常甲基化及其表达,探讨其与膀胱移行细胞癌临床病理学的关系。方法收集膀胱移行细胞癌新鲜组织标本共49例和10例正常膀胱组织,采用免疫组织化学的方法(S-P法)检测FHIT蛋白表达,用甲基化特异性聚合酶链反应PCR(MS-PCR)方法研究膀胱移行细胞癌组织、正常膀胱组织中FHIT基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果FHIT蛋白在正常膀胱组织均为阳性;FHIT蛋白在膀胱移行细胞癌中阳性表达率为47%(23/49),肿瘤不同分级中随恶性程度的增高,表达减少,Ⅰ级与Ⅲ级比较,差异有统计学意义(P<0.05),不同临床分期中随分期的增高,表达减少,Tis～T1期与T2～T4期比较,差异无统计学意义(P>0.05)。49例膀胱移行细胞癌组织中,有8例发生了甲基化,阳性率为16%(8/49)。FHIT基因的异常甲基化和蛋白表达无相关性。正常膀胱组织FHIT基因启动子甲基化频率0(0/10)。结论FHIT基因与膀胱移行细胞癌的发生发展有关,FHIT蛋白异常表达可作为膀胱移行细胞癌肿瘤标志物。FHIT基因甲基化及表达缺失参与膀胱移行细胞癌的发生发展,且与其临床病理有一定关系,可能是影响膀胱移行细胞癌预后的重要因素。     

雌激素受体基因甲基化与脑出血的关系

目的:探讨伴或不伴颈动脉粥样硬化脑出血与雌激素受体α(ER-α)基因启动子区甲基化状态的关系,方法:入选124例脑出血(经颈动脉超声检查证实部分有颈动脉粥样硬化)的患者为实验组,47例健康体检者为对照组,采集上述入选病例和对照组肘静脉血;提取DNA,采用巢式甲基化特异性PCR(nMSP)检测ER-α基因启动子区甲基化状态.结果:脑出血组甲基化发生率显著高于对照组,差异具有统计学意义(X2=14.090,P=0.000).颈动脉有无粥样硬化的脑出血患者甲基化率差异无统计学意义.结论:脑出血患者ER-α基因启动子区甲基化可能与动脉粥样硬化有关,是促进脑出血发病的机制之一,颅内动脉粥样硬化与颈动脉硬化可能不平行.     

乳腺癌NOEY2基因启动子区甲基化的研究

目的检测NOEY2基因在乳腺癌发生不同阶段的甲基化状态及其在乳腺浸润性导管癌(IDC)中的mRNA表达水平,探讨NOEY2基因启动子区异常甲基化与乳腺癌发生发展的关系。方法收集2010年1月—2012年1月手术切除乳腺的女性患者标本,其中IDC组46例,乳腺普通型导管增生(UDH)组30例,癌旁正常乳腺组织(NBT)组20例,乳腺原位导管癌(DCIS)组20例,乳腺非典型导管增生(ADH)组13例,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测NOEY2基因的甲基化率及水平,分析其与临床病理参数的关系;采用实时定量PCR检测30例IDC中NOEY2基因的mRNA相对表达量,分析NOEY2基因甲基化对其mRNA表达的影响。结果 IDC组的完全甲基化率高于NBT及UDH组(P<0.01);NOEY2基因完全甲基化与乳腺癌患者的临床分期、组织学分级有关(P<0.05),而与年龄、肿瘤大小、ER、PR、HER2无相关性(P>0.05);完全甲基化的IDC标本NOEY2 mRNA表达量低于部分甲基化的IDC标本(P<0.05);IDC中NOEY2基因的甲基化水平与NOEY2基因mRNA表达量呈负相关(r=-0.659,P<0.05)。结论 NOEY2基因启动子区异常高甲基化及其导致的mRNA表达下调在乳腺癌发生发展过程中起重要作用。     

血浆RUNX3基因启动子甲基化检测对宫颈癌早期诊断的价值研究

目的探究血浆人类Runt相关转录因子3(RUNX3)基因启动子甲基化对早期宫颈癌的诊断价值。方法选取80例宫颈癌患者作为A组,选取同期80例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者作为B组,另选取80例正常宫颈组织切除者作为C组。对三组研究对象的宫颈癌组织、CIN组织、正常宫颈组织及血浆RUNX3启动子甲基化应用甲基化特异性聚合酶链反应(MCP)进行检测。比较三组组织、血浆RUNX3启动子甲基化异常率,分析宫颈癌病理特征与RUNX3启动子甲基化表达及RUNX3蛋白表达的关系。结果A组组织RUNX3启动子甲基化异常率为86.25%,血浆RUNX3启动子甲基化异常率为73.75%;B组组织RUNX3启动子甲基化异常率为33.75%,血浆RUNX3启动子甲基化异常率为26.25%;C组组织RUNX3启动子甲基化异常率为3.75%,血浆RUNX3启动子甲基化异常率为0;A组组织RUNX3启动子甲基化异常率和血浆RUNX3启动子甲基化异常率均高于B组和C组,差异有统计学意义(P<0.05)。血浆、组织RUNX3启动子甲基化异常与临床分期、肿瘤分化程度、病理类型、淋巴转移存在相关性(P<0.05)。宫颈癌患者RUNX3蛋白异常表达与淋巴转移、肿瘤分化程度、临床分期存在相关性(P<0.05)。结论血浆RUNX3基因启动子甲基化异常可提示宫颈癌的发生发展,为早期诊断宫颈癌提供新方法。     

体外培养子宫腺肌病在位内膜腺上皮中Kiss-1和乙酰肝素酶的表达及意义

目的探讨Kiss-1和乙酰肝素酶(Hpa)在子宫腺肌病发生、发展中的作用。方法选择10例子宫腺肌病患者作为研究组,8例宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅲ级患者作为对照组,通过对子宫内膜腺上皮细胞的体外培养,用反转录-聚合酶链反应半定量分析Kiss-1和Hpa mRNA在研究组、对照组子宫内膜腺上皮细胞的表达。结果研究组腺上皮细胞Kiss-1 mRNA的表达在增殖期与分泌期均较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05),而同一组中增殖期腺上皮细胞Kiss-1 mRNA的表达与分泌期相比差异无统计学意义(P>0.05)。研究组腺上皮细胞Hpa mRNA的表达在增殖期与分泌期均较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05),而同一组中增殖期腺上皮细胞Hpa mRNA的表达与分泌期相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论Kiss-1 mRNA表达减弱和Hpa mRNA表达增强可能与子宫腺肌病的侵袭过程有关,两者在腺肌病的发生发展中发挥重要作用。     

肺癌细胞株抑癌基因启动子甲基化与转录的关系

目的 通过测定3例非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株中7个抑癌基因启动子甲基化与mRNA转录之间的关系,探讨启动子甲基化在NSCLC发生中的作用.方法 应用甲基化特异性的多聚酶链反应(MSP)和RT-PCR分别检测甲基化状态和mRNA的转录水平.结果 肺癌细胞株A549发生甲基化的基因包括p16INK4a、RASSF1α、CDH1、MGMT和CDH13,而DAPK和RAR-β为去甲基化状态;SH-77发生甲基化的基因包括p16INK4a、RASSF1α、CDH1和MGMT,而DAPK、CDH13和RAR-β为去甲基化状态;SPC-A1发生甲基化的基因包括p16INK4a、CDH1、 CDH13和RAR-β,而RASSF1α、MGMT和DAPK为去甲基化状态.RASSF1α、MGMT和RAR-β等3个基因发生甲基化的细胞株其mRNA转录失活,而去甲基化状态的细胞株则存在转录活性.结论 NSCLC细胞株中抑癌基因经常发生启动子CpG岛的甲基化,并且甲基化可能与抑癌基因mRNA转录失活相关.     

胃癌患者外周血人端粒酶反转录酶 基质金属蛋白酶-7 mRNA的表达及临床意义

目的应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测胃癌患者外周血中人端粒酶反转录酶(HTERT)及基质金属蛋白酶(MMP)-7mRNA的表达情况,探讨其对监测胃癌血液微转移的临床意义及其对预后的影响。方法采用Trizol法提取血液标本中的总RNA,将其反转录成cDNA,然后用RT-PCR技术检测血液标本中MMP-7mRNA和HTERTmRNA表达,计算样本的△Ct值。结果 126例胃癌患者中,HTERTmRNA阳性58例,阴性68例。MMP-7mRNA阳性46例,阴性80例。不同性别、年龄、分化程度的胃癌患者外周血HTERT、MMP-7mRNA阳性率差异无统计学意义。Ⅲ、Ⅳ期患者外周血HTERTmRNA阳性率较Ⅰ、Ⅱ期患者明显增高,差异有统计学意义。有远处转移的胃癌患者较无远处转移的患者外周血HTERT、MMP-7mRNA阳性率明显增高,差异有统计学意义。癌胚抗原阳性患者外周血HTERT、MMP-7mRNA阳性率较癌胚抗原阴性的患者明显增高,差异有统计学意义。无远处转移的胃癌患者中,HTERT、MMP-7阳性与阴性患者复发转移情况比较,检测后6、12个月HTERT阳性组较阴性组肿瘤复发转移率显著增高,差异有统计学意义。检测后12个月MMP-7阳性组较阴性组肿瘤复发转移率增高,差异有统计学意义。结论胃癌患者外周血HTERT及MMP-7mRNA表达对早期发现血液微转移及预后具有重要意义,值得进一步研究。     

抑癌基因PTEN及DAPK启动子甲基化在急性白血病中的表达及其意义

目的：探讨第10号染色体缺失性磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）phosphatase and tensin homology deleted on chromosome 10和死亡相关蛋白激酶（DAPK）death-associated protein kinase在急性白血病中的表达及其意义。方法：采用甲基化特异性PCR（MSP）检测47例急性白血病患者、26例健康对照组外周血中PTEN和DAPK启动子甲基化的表达及化疗后患者达完全缓解PTEN和DAPK启动子甲基化的表达。结果：PTEN和DAPK启动子甲基化在ALL和AML中的表达水平均明显高于对照组,且差异有显著性（P均〈0.05）。结论：PTEN和DAPK启动子甲基化的高表达可能与急性白血病的发生发展相关。PTEN和DAPK启动子甲基化在急性白血病的早期诊断与靶向治疗中起到了重要的作用。     

LMX1A基因启动子在胃癌中的异常甲基化研究

目的研究LMX1A基因启动子在胃癌细胞中的甲基化状态。方法运用甲基化特异聚合酶链反应(MSP)法检测30例原发胃癌和癌旁组织中LMX1A基因的甲基化水平。甲基化修饰后亚硫酸盐测序聚合酶链反应(BSP)分析胃癌细胞MKN45细胞LMX1A基因启动子CpG岛甲基化状态。提取细胞RNA,通过实时定量聚合酶链反应(PCR)检测LMX1A基因mRNA在不同浓度的DNA甲基化酶抑制剂5′-杂氮-2′-脱氧胞嘧啶(5-aza-dC)处理MKN45细胞后,LMX1A基因mRNA的改变情况。结果原发性胃癌的甲基化异常检出率是33%(10/30)。LMX1A基因在MKN45细胞中存在高甲基化状态,MKN45细胞经5-aza-dC处理后LMX1A基因mRNA表达明显上调。结论 LMX1A基因在原发性胃癌中存在甲基化异常,说明LMX1A基因甲基化异常可能参与胃癌的发生。     

子宫内膜息肉中雌、孕激素受体基因表达对宫腔镜术后妊娠影响的研究

目的研究雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)在不孕症子宫内膜息肉(EP)组织中的表达,探讨其与宫腔镜术后妊娠状况的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测106例子宫内膜息肉组织中ER mRNA、PR mRNA表达,以宫腔镜术后3～6个月是否妊娠分为两组:妊娠组与非妊娠组,比较两组间术前子宫内膜息肉组织中ER mRNA、PR mRNA表达差异,并进行分析。结果妊娠组ER mRNA的表达低于非妊娠组,但差异无统计学意义(P>0.05);PR mRNA在妊娠组的表达显著高于在非妊娠组中的表达,差异有统计学意义(P<0.05);非妊娠组中的复发病例组,其息肉组织中ER mRNA表达显著高于非复发组及妊娠组(P<0.05),而PR mRNA在复发组的表达低于非复发组的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PR在EP中的低表达可能是宫腔镜术后仍不孕的因素之一;PR在EP中的低表达及ER的高表达与EP宫腔镜术后复发密切相关。     

干燥综合征患者外周血淋巴细胞Toll样受体4CD14的表达

目的探讨干燥综合征(SS)患者外周血淋巴细胞Toll样受体(TLR)4、CD14的表达。方法分别采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和流式细胞仪检测TLR4、CD14mRNA和蛋白的表达。结果 SS患者外周血单个核细胞TLR4、CD14mRNA和蛋白的表达均高于对照组(P<0.05);初发组TLR4、CD14mRNA和蛋白表达水平明显高于缓解组(P<0.05);复发组TLR4、CD14mRNA和蛋白表达水平与缓解组相比明显增高(P<0.05);复发组TLR4、CD14mRNA和蛋白表达水平与初发组相比无统计学意义(P>0.05)。结论①SS患者外周血淋巴细胞高表达TLR4和CD14,且与病情活动相一致;②脂多糖(LPS)-TLR4信号传导途径参与了SS的发病机制。     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷诱导卵巢癌细胞系p16基因去甲基化及其表达

目的观察去甲基化制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对体外培养的卵巢癌细胞CAOV3p16基因启动子区甲基化状态及表达的影响,探讨卵巢癌细胞p16基因失活的机制及去甲基化制剂对p16基因表达的调控。方法应用不同浓度的5-Aza-CdR(1×10-7mol/L,5×10-7mol/L,1×10-6mol/L,5×10-6mol/L)处理体外培养的卵巢癌细胞CAOV3后,甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)(MSP)法检测用药前后细胞中p16基因的甲基化状态,RT-PCR法及Western-blot法检测用药前后细胞中p16 mRNA及蛋白表达的变化。结果p16基因在卵巢癌细胞系CAOV3中启动子区呈异常甲基化状态,在 mRNA及蛋白水平低表达。经过5-Aza-CdR处理后,p16基因启动子区呈去甲基化状态,其 mRNA及蛋白表达显著增强(P<0.01)。结论启动子区异常甲基化是卵巢癌细胞p16基因失活的主要原因之一,去甲基化制剂-5-Aza-CdR能逆转p16基因甲基化状态,从而调控p16基因表达。